周可林 董 碩 國 生 魏培棟 付國兵 楊靖頤

(1 北京中醫(yī)藥大學(xué),北京,100029; 2 北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院,北京,100078)

抑郁癥以其高患病率、高復(fù)發(fā)率、高致殘率、高自殺傾向的特點(diǎn),成為全世界醫(yī)學(xué)界亟待解決的問題,目前抗抑郁的治療方法主要以抗抑郁藥物治療為主。中醫(yī)認(rèn)為抑郁癥屬于“郁病”的范疇,目前認(rèn)為肝郁脾虛證是抑郁癥最常見的中醫(yī)證型[1-2]。有研究發(fā)現(xiàn),肝郁脾虛的抑郁癥模型大鼠骨骼肌中線粒體含量減少,且線粒體的形狀結(jié)構(gòu)也存在異常,因而導(dǎo)致骨骼肌線粒體的功能出現(xiàn)異常,并認(rèn)為這可能與抑郁癥的低動(dòng)力癥狀相關(guān)[3]。前期研究發(fā)現(xiàn)振腹推拿可以明顯改善抑郁癥患者的癥狀評(píng)分,對(duì)于患者的情緒低落、精力減退等癥狀有明顯的改善作用[4]。因此本研究擬通過慢性不可預(yù)見性溫和應(yīng)激(Chronic Unpredictable Mild Stress,CUMS)方法建立抑郁癥大鼠模型,探究振腹推拿手法對(duì)于抑郁癥模型大鼠骨骼肌組織炎癥介質(zhì)白細(xì)胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)的含量,沉默信息調(diào)節(jié)因子1(SilenceInformation Regulator 1,SIRT1)、過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活物-1α(Peroxisome Proliferator-activated Receptor Gamma Coactivator-1α,PCG-1α)、核因子κB(Nuclear Factor-κB,NF-κB)的蛋白及信使核糖核酸(messenger RNA,mRNA)含量的調(diào)節(jié)作用,分析振腹推拿改善抑郁癥骨骼肌組織炎癥損傷的干預(yù)作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 健康雄性無特定病原體(Specific Pathogen Free,SPF)級(jí)SD大鼠32只,10周齡,體質(zhì)量(330±20)g,購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司,許可證號(hào):SCXK(京)2012-0001。所有大鼠在北京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物房(SPF級(jí))中飼養(yǎng),室溫(21±2)℃,相對(duì)濕度30%～40%,光照保持正常晝夜節(jié)律,并且飼養(yǎng)環(huán)境保持安靜。實(shí)驗(yàn)全過程在北京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)的監(jiān)督下完成(倫理審批號(hào):BUCM-4-201911260 2-4049)。

1.1.2 藥物 鹽酸氟西汀膠囊(禮來蘇州制藥有限公司,國藥準(zhǔn)字:J20170022)。

1.1.3 試劑與儀器 蛋白提取液(貨號(hào):MDL91201)、蛋白酶抑制劑(貨號(hào):MD912893)、二抗(貨號(hào):MD932477),均購自北京Medical Discovery Leader公司;核因子κB一抗(貨號(hào):AF5006)、SIRT1一抗(貨號(hào):DF6033)、PCG-1α一抗(貨號(hào):AF5395),均購自江蘇親科生科研究中心有限公司;IL-1β酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒(武漢Elabscience公司,貨號(hào):E-EL-R0012 c);IL-8酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒(上海Thermo Fisher公司,貨號(hào):KAC1301);IL-4酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒(貨號(hào):SEA077Ra)、IL-6酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒(貨號(hào):SEA079Ra)、IL-10酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒(貨號(hào):SEA056Ra)、TNF-α化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒(貨號(hào):SCA133Ra),均購自武漢cloud-clone corp公司。

分光光度儀(Mettler Toledo,瑞士,型號(hào):UV5);電泳儀(北京百晶生物技術(shù)有限公司,型號(hào):BG-subMIDI);離心機(jī)(Eppendorf公司,德國,型號(hào):Centrifuge5415D);凝膠成像儀(Bio-rad,美國,型號(hào):GelDoc Go);實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(Applied biosystems,美國,型號(hào):QuantStudio 3);全波長掃描酶標(biāo)儀(Thermo Scientific,美國,型號(hào):Multiskan GO51119200)。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,從32只大鼠隨機(jī)選取8只作為正常組,正常飼養(yǎng),不進(jìn)行任何干預(yù),其余3組大鼠采用CUMS方法建立抑郁癥大鼠模型。造模刺激包括束縛3 h、45 ℃熱烘5 min、孤籠飼養(yǎng)24 h、陌生物體刺激24 h、85 dB白噪聲5 h、45°籠具傾斜24 h、夾尾1 min、禁食禁水24 h等。按照隨機(jī)數(shù)字表法分配,使大鼠不能預(yù)料刺激的發(fā)生,造模共持續(xù)7周[5]。在造模第3周末將造模的24只大鼠隨機(jī)分為模型組、振腹組、氟西汀組,每組8只。

1.2.2 干預(yù)方法 造模完成后開始進(jìn)行手法和藥物干預(yù),正常組不進(jìn)行CUMS造模刺激,按照1 mL/100 g給予去離子水灌胃,1次/d,共計(jì)4周;模型組進(jìn)行CUMS造模刺激,以1 mL/100 g去離子水灌胃,1次/d,共4周;振腹組進(jìn)行CUMS造模刺激,進(jìn)行振腹推拿手法干預(yù),1次/d,共4周;氟西汀組進(jìn)行CUMS造模刺激,同時(shí)給予氟西汀懸濁液灌胃,根據(jù)成人服用20 mg/d氟西汀換算,給藥量為2.083 mg/100 g體質(zhì)量,灌胃總量為11 mL/100 g,1次/d,共4周。振腹推拿操作方法:以神闕穴為中心,行三指振腹手法15 min,頻率300次/min(神闕穴定位:參考《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》《實(shí)驗(yàn)推拿學(xué)》及相關(guān)文獻(xiàn),以劍突至恥骨聯(lián)合上緣上2/3與下1/3交界處為穴)。

1.2.3 標(biāo)本采集 于第7周末完成干預(yù)和行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死大鼠并進(jìn)行組織取材。處死方法:給予3%戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔注射麻醉后斷頭處死,剝離雙下肢腓腸肌-80 ℃保存?zhèn)溆?。分別檢測(cè)炎癥介質(zhì)IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α的含量,SIRT1、PCG-1α、核因子κB蛋白及mRNA的含量。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.3.1 宏觀表征 每天觀察各組大鼠的精神狀態(tài)、皮毛的光澤度、給予不同刺激時(shí)產(chǎn)生的反應(yīng)劇烈程度以及便質(zhì)等情況,觀察各組大鼠中這些表現(xiàn)是否隨著造模時(shí)間的推移發(fā)生了明顯的變化。

1.3.2 糖水偏好實(shí)驗(yàn) 在造模及干預(yù)結(jié)束后,先對(duì)大鼠進(jìn)行糖水訓(xùn)練,共3 d。第1天給予每只大鼠2瓶糖水,訓(xùn)練持續(xù)時(shí)間為24 h,第2天將其中1瓶糖水換成去離子水,訓(xùn)練時(shí)間同樣為24 h。2次糖水訓(xùn)練結(jié)束之后,第3天給予每組大鼠禁食禁水24 h處理,之后正式進(jìn)行糖水偏好實(shí)驗(yàn)。準(zhǔn)備與大鼠數(shù)量相等的糖水瓶和去離子水瓶,并相應(yīng)裝入一定量的糖水和去離子水,然后對(duì)糖水瓶和去離子水瓶進(jìn)行稱重和編號(hào),將每只大鼠單獨(dú)放入1個(gè)小籠,然后每只大鼠分別給予1瓶糖水和1瓶去離子水,1 h后將糖水瓶和去離子水瓶取下,稱量剩余量,計(jì)算出實(shí)驗(yàn)前后糖水瓶和去離子水瓶的重量變化。糖水消耗率=糖水消耗量/(糖水消耗量+去離子水消耗量)×100%。

1.3.3 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)分為2步進(jìn)行,首先在實(shí)驗(yàn)前1 d將每只大鼠單獨(dú)放入1個(gè)透明玻璃圓筒中(直徑40 cm,高50 cm),其中倒入(22±1)℃常溫純水,水深20 cm,使其游泳15 min作為正式實(shí)驗(yàn)前的訓(xùn)練。訓(xùn)練完成24 h后進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn),保持實(shí)驗(yàn)環(huán)境安靜,測(cè)試時(shí)將大鼠頭部正面朝壁緩慢放入塑料桶內(nèi)使其自由游泳6 min,以大鼠放棄掙扎、露出口鼻、保持漂浮所需的最小運(yùn)動(dòng)外肢體的停止運(yùn)動(dòng)作為不動(dòng)標(biāo)準(zhǔn),用秒表記錄大鼠停止掙扎不動(dòng)或無任何活動(dòng)的時(shí)間,每只大鼠強(qiáng)迫游泳6 min,其中包括適應(yīng)性游泳1 min,記錄后5 min內(nèi)大鼠的累計(jì)不動(dòng)時(shí)間(s),并且在每只大鼠游泳之后進(jìn)行換水,以免對(duì)下1只大鼠行為有影響。通過該試驗(yàn)?zāi)M抑郁癥核心癥狀之一的“行為絕望”。

1.3.4 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn) 在操作間的正中放置曠場(chǎng)箱,曠場(chǎng)箱高40 cm,底邊長50 cm,底面平均分為25個(gè)小方格,中央9個(gè)小格為中央?yún)^(qū)。根據(jù)曠場(chǎng)箱正中格的位置,在其正上方安置攝像頭并連接電腦錄像,使整個(gè)曠場(chǎng)區(qū)域能夠清晰地出現(xiàn)在視野中,并對(duì)操作間進(jìn)行避光處理,實(shí)驗(yàn)期間保持安靜。先將大鼠放置于操作間的黑暗環(huán)境中適應(yīng)5～10 min。開始實(shí)驗(yàn)時(shí)將大鼠從籠子中拿出放在曠場(chǎng)箱的正中格內(nèi),同時(shí)計(jì)時(shí)并開始錄像,觀察并記錄5 min內(nèi)大鼠活動(dòng)情況。5 min后取出大鼠,先用衛(wèi)生紙把大鼠遺留的尿液和糞便擦拭干凈,最后用毛巾蘸低濃度乙醇徹底擦拭箱底,消除上1只大鼠遺留氣味后,將下1只大鼠按照以上步驟處理。運(yùn)用Etho Vision 3.0行為學(xué)分析軟件對(duì)各組大鼠的運(yùn)動(dòng)情況進(jìn)行分析,所統(tǒng)計(jì)觀察的內(nèi)容包括總運(yùn)動(dòng)距離、中央?yún)^(qū)進(jìn)入次數(shù)、中央停留時(shí)間以及穿格次數(shù)。

1.3.5 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)炎癥介質(zhì)含量 取適量組織塊,制備細(xì)胞裂解液,4 ℃條件下1 000×g,離心20 min,分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔、空白孔。依次加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品及稀釋液,余孔加待測(cè)樣品100 μL,37 ℃溫育1 h。每孔加檢測(cè)溶液A工作液100 μL,37 ℃溫育1 h。棄去孔內(nèi)液體,每孔用350 μL的洗滌液洗滌,浸泡1～2 min,重復(fù)洗板3次。每孔加檢測(cè)溶液B工作液100 μL,37 ℃溫育30 min。每孔加TMB底物溶液90 μL,37 ℃避光顯色。加終止溶液終止反應(yīng)。450 nm波長測(cè)量各孔的光密度值(Optical Density,OD)。

1.3.6 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)蛋白表達(dá) 取組織裂解提取蛋白,BCA試劑盒測(cè)定蛋白含量;取30 μL蛋白電泳分離,轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯(Polyvinylidene Fluoride,PVDF)膜,脫脂奶粉封閉1 h;加入對(duì)應(yīng)一抗,4 ℃孵育過夜;加入二抗孵育1 h,TBST緩沖液清洗;電致化學(xué)發(fā)光(Electrochemiluminescence,ECL)顯影,以β-機(jī)動(dòng)蛋白為內(nèi)參計(jì)算蛋白相對(duì)表達(dá)。

1.3.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)mRNA表達(dá) 實(shí)時(shí)熒光定量PCR提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄為cDNA,以β-機(jī)動(dòng)蛋白為內(nèi)參,反應(yīng)條件:95 ℃預(yù)變性5 min,95 ℃變性10 s,58 ℃退火20 s,72 ℃延伸20 s,共40個(gè)循環(huán)。引物設(shè)計(jì)合成見表1。

表1 檢測(cè)mRNA的引物設(shè)計(jì)合成

2 結(jié)果

2.1 模型評(píng)價(jià)

2.1.1 宏觀表現(xiàn) 造模開始前,所有大鼠均表現(xiàn)活躍、動(dòng)作靈敏、精神狀況良好、毛發(fā)光澤整齊,大便形態(tài)正常,干濕適中。隨著每日造模的持續(xù)進(jìn)行,與正常組大鼠比較,造模刺激后的大鼠對(duì)外界應(yīng)激的反應(yīng)度逐漸下降,對(duì)寒冷等外界刺激的抵抗能力下降,對(duì)外界環(huán)境的改變和給予的刺激反應(yīng)遲鈍,活躍程度明顯降低,精神萎靡,毛發(fā)雜亂色澤暗淡無光澤,宏觀表現(xiàn)與正常組大鼠比較出現(xiàn)明顯差異,并且糞便外觀不成形;造模3周后開始對(duì)振腹組與氟西汀組大鼠進(jìn)行干預(yù)直至第7周結(jié)束,經(jīng)過干預(yù)后的大鼠活躍程度逐漸恢復(fù),與模型組比較,在日常造模過程中對(duì)外界刺激的抵抗程度顯著增強(qiáng),抵抗寒冷等外界刺激的抵抗力增強(qiáng),并且振腹組大鼠的糞便質(zhì)地改善明顯。

2.1.2 糖水偏好實(shí)驗(yàn) 第0周(即應(yīng)激前)末,各組大鼠的糖水偏好率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05);第3周(即應(yīng)激3周)末,與正常組比較,模型組、振腹組和氟西汀組大鼠的糖水偏好率顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01),模型組、振腹組和氟西汀組3組糖水偏好率組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05),經(jīng)過3周的CUMS造模刺激,模型組、振腹組和氟西汀組3組均已造模成功,且3組造模程度相似;第7周(即干預(yù)4周)末,與正常組比較,模型組大鼠的糖水偏好率顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),與模型組比較,振腹組、氟西汀組大鼠的糖水偏好率顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。見表2。

表2 各組大鼠糖水偏好率比較

2.1.3 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 第0周(即應(yīng)激前)末,各組大鼠的絕望時(shí)間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05);第3周(即應(yīng)激3周)末,與正常組比較,模型組、振腹組和氟西汀組大鼠的絕望時(shí)間均顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),模型組、振腹組和氟西汀組3組之間的絕望時(shí)間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05),經(jīng)過3周的CUMS造模刺激,模型組、振腹組和氟西汀組3組均已造模成功,且3組造模程度相似;第7周(即干預(yù)4周)末,與正常組比較,模型組大鼠的絕望時(shí)間顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),與模型組比較,振腹組、氟西汀組大鼠的絕望時(shí)間顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。見表3。

表3 各組大鼠絕望時(shí)間比較

2.1.4 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn) 經(jīng)過7周的造模刺激,與正常組比較,模型組大鼠的總移動(dòng)距離、中央進(jìn)入次數(shù)、中央停留時(shí)間和穿格次數(shù)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01);經(jīng)過4周的干預(yù),與模型組比較,振腹組、氟西汀組大鼠的總移動(dòng)距離、穿格次數(shù)顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01);與模型組比較,氟西汀組的中央進(jìn)入次數(shù)、中央停留時(shí)間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01),振腹組的中央進(jìn)入次數(shù)、中央停留時(shí)間與模型組比較有上升趨勢(shì)。見表4,圖1。

圖1 各組大鼠曠場(chǎng)行為學(xué)檢測(cè)

表4 各組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

2.2 各組大鼠炎癥介質(zhì)含量的比較 經(jīng)過7周的造模刺激,與正常組比較,模型組大鼠IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01),IL-4、IL-10含量降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01);經(jīng)過4周的干預(yù),與模型組比較,振腹組、氟西汀組大鼠IL-4、IL-10含量顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01),IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。見表5。

表5 各組大鼠炎癥介質(zhì)含量比較

2.3 各組大鼠核因子κB、SIRT1、PGC-1α含量的比較 經(jīng)過7周的造模刺激,與正常組比較,模型組大鼠的SIRT1蛋白含量、SIRT1mRNA含量顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01);經(jīng)過4周的干預(yù),與模型組比較,振腹組大鼠的SIRT1蛋白含量、SIRT1mRNA含量顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01),氟西汀組大鼠的SIRT1蛋白含量、SIRT1mRNA含量均顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。見圖2。

圖2 各組大鼠SIRT1蛋白和SIRT1mRNA水平注:與模型組比較,**P<0.01

經(jīng)過7周的造模刺激,與正常組比較,模型組大鼠的PGC-1α蛋白含量、PGC-1αmRNA含量均顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01);經(jīng)過4周的干預(yù),與模型組比較,振腹組大鼠的PGC-1α蛋白含量升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),振腹組的PGC-1α mRNA含量顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),氟西汀組大鼠的PGC-1α蛋白含量、PGC-1αmRNA含量均顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。見圖3。

圖3 各組大鼠PCG-1α蛋白和PCG-1αmRNA水平注:與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01

經(jīng)過7周的造模刺激,與正常組比較,模型組大鼠核因子κB的蛋白含量、mRNA含量均顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);經(jīng)過4周的干預(yù),與模型組比較,振腹組大鼠核因子κB的蛋白含量下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),振腹組的核因子κB mRNA含量顯著下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),氟西汀組大鼠核因子κB的蛋白含量、核因子κBmRNA含量均顯著下降,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。見圖4。

圖4 各組大鼠核因子κB蛋白含量和核因子κB mRNA水平注:與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01

3 討論

抑郁癥是一種由于神經(jīng)調(diào)節(jié)系統(tǒng)失調(diào)導(dǎo)致的疾病,目前研究發(fā)現(xiàn)其發(fā)病與中樞系統(tǒng)和外周系統(tǒng)的炎癥反應(yīng)密切相關(guān)[6]。臨床研究發(fā)現(xiàn),抑郁癥患者外周組織和中樞腦組織中炎癥介質(zhì)水平升高[7];還有研究發(fā)現(xiàn)炎癥介質(zhì)可以直接誘導(dǎo)人類和嚙齒動(dòng)物產(chǎn)生抑郁行為[8-10],這些都證明了外周組織的炎癥反應(yīng)是抑郁癥發(fā)病的重要環(huán)節(jié)。

研究發(fā)現(xiàn)增加骨骼肌組織中PGC-1α的含量,可以抑制IL-6、TNF-α等炎癥介質(zhì)的表達(dá)[11];相反,如果特異性敲除大鼠的骨骼肌PGC-1α,可以導(dǎo)致大鼠骨骼肌組織中IL-6和TNF-α等炎癥介質(zhì)的表達(dá)增加。此外,還有研究發(fā)現(xiàn),小鼠經(jīng)歷5周的慢性應(yīng)激后,骨骼肌特異性PGC-1α轉(zhuǎn)基因小鼠的抑郁程度明顯低于野生型小鼠,并且轉(zhuǎn)基因小鼠海馬組織中TNF-α、IL-1β、IL-6等炎癥介質(zhì)的mRNA含量降低,IL-10、IL-4等抑炎因子的mRNA含量升高。上述研究證明外周系統(tǒng)骨骼肌組織中的PCG-1α不僅可以改善骨骼肌組織的炎癥損傷,還可以調(diào)節(jié)中樞系統(tǒng)海馬組織中的炎癥反應(yīng),因此骨骼肌組織中PCG-1α的含量變化是抑郁癥發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因素[12]。此外,有研究表明PCG-1α的這一作用效應(yīng)可能與PGC-1α抑制p65的磷酸化,進(jìn)而抑制了p65對(duì)核因子κB基因的激活作用有關(guān)[13]。因此,研究認(rèn)為PGC-1α作為核因子κB的上游因子可以抑制核因子κB介導(dǎo)的信號(hào)通路的表達(dá),從而減少外周和中樞系統(tǒng)中炎癥介質(zhì)的表達(dá)和釋放,有利于緩解中樞系統(tǒng)的炎癥反應(yīng)[14]。SIRT1可使PGC-1α、核因子κB等核轉(zhuǎn)錄因子去乙?；?在調(diào)節(jié)線粒體損傷和炎癥損傷等方面具有重要作用[15]。研究發(fā)現(xiàn),SIRT1基因敲除后的小鼠產(chǎn)生了海馬基因表達(dá)變化、突觸可塑性缺失和樹突分支減少等表現(xiàn)[16],這可能與SIRT1介導(dǎo)的PGC-1α信號(hào)通路表達(dá)有關(guān)[17-19]。

本研究發(fā)現(xiàn),經(jīng)過4周的振腹推拿手法治療可以明顯改善CUMS誘導(dǎo)的抑郁癥模型大鼠對(duì)外界刺激的反應(yīng)、糞便質(zhì)地以及糖水偏好率、絕望時(shí)間和曠場(chǎng)試驗(yàn)的總移動(dòng)距離、穿格次數(shù),說明振腹推拿可以改善抑郁癥模型大鼠的糖水偏好、行為絕望和自主探索能力,改善抑郁癥狀,與之前的研究結(jié)果相同;前期研究發(fā)現(xiàn),振腹推拿手法干預(yù)可以改善抑郁癥模型大鼠的骨骼肌線粒體能量代謝異常的情況,緩解抑郁癥大鼠的低動(dòng)力癥狀[20]。在此基礎(chǔ)上本研究發(fā)現(xiàn),振腹推拿手法可以抑制骨骼肌組織IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等炎癥介質(zhì)的表達(dá),增加IL-4、IL-10等抑炎因子的含量,從而改善抑郁癥外周組織的炎癥反應(yīng);進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)振腹推拿是通過抑制核因子κB的蛋白表達(dá),促進(jìn)SIRT1、PGC-1α的蛋白表達(dá),從而改善抑郁癥模型大鼠骨骼肌炎癥損傷的,并進(jìn)一步推測(cè)振腹推拿手法可能是通過抑制骨骼肌炎癥損傷從而實(shí)現(xiàn)改善抑郁癥大鼠骨骼肌線粒體能量代謝的手法作用。

抑郁癥屬于中醫(yī)“郁病”范疇,中醫(yī)認(rèn)為其發(fā)病機(jī)制與思慮過度導(dǎo)致的肝失疏泄、脾失健運(yùn)、心失所養(yǎng)、臟腑氣血陰陽虧虛密切相關(guān),這與現(xiàn)代研究認(rèn)為抑郁癥病因是抑郁癥患者較為敏感、心思細(xì)膩、多思的觀點(diǎn)相符合[21-22]。振腹推拿以腹部為主要操作部位,腹部為十二經(jīng)脈匯聚之處,奇經(jīng)八脈中的任、督、沖3脈也皆起于腹部胞中,人體的主要經(jīng)脈均與腹部有著密切的關(guān)系?！妒?jì)總錄》記載:“五臟六腑之精華,皆見于目,上注于頭?！薄镀諠?jì)方》記載:“蓋頭者諸陽所會(huì),腦者物所受命?！闭f明五臟六腑的精華上輸于腦,腦正常的功能依賴于這些精華物質(zhì),而行于腹部的經(jīng)脈就是精華運(yùn)輸至腦的主要通道?！鹅`樞》中指出“胃氣上注于肺……上走空竅……入絡(luò)腦”,《重訂通俗傷寒論》記載“胃之支脈,上絡(luò)心腦……故昏不識(shí)人”,李東垣認(rèn)為“足陽明之別絡(luò)于腦”,通過眾多醫(yī)家的觀點(diǎn)可以發(fā)現(xiàn),在腹部循行的眾多經(jīng)脈中以足陽明胃經(jīng)、足太陰脾經(jīng)尤為重要,胃的受納、腐熟水谷的功能與脾的升清、運(yùn)化功能相配合,升降相濟(jì)的氣機(jī)運(yùn)行既能夠?qū)⒕⑽镔|(zhì)上輸至頭,又能使頭部的濁氣下降,可以帶動(dòng)全身的氣機(jī)運(yùn)行,從而運(yùn)送精華、傳導(dǎo)糟粕,對(duì)腦神的調(diào)節(jié)至關(guān)重要。振腹推拿利用作用于腹部的振動(dòng)刺激腹部經(jīng)絡(luò),增強(qiáng)腹部經(jīng)脈的調(diào)節(jié)功能,調(diào)暢氣機(jī),升清降濁,從而調(diào)治腦系疾病。

綜上所述,振腹推拿手法可以改善抑郁癥模型大鼠的癥狀,增強(qiáng)其自主探索能力,減少其絕望時(shí)間,而這一手法效應(yīng)可能是通過調(diào)節(jié)骨骼肌組織SIRT1/PCG-1α/NF-κB信號(hào)通路,降低IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等炎癥介質(zhì)的含量,增加IL-4、IL-10等抑炎因子的含量,緩解外周組織的炎癥損傷實(shí)現(xiàn)的。

利益沖突聲明:無。