陳 琳,唐桂瑩

南京市江寧醫(yī)院病理科,江蘇南京 210000

肺癌是我國發(fā)病率、死亡率最高的惡性腫瘤,相關(guān)資料顯示,我國肺癌的年發(fā)病率約為35/10萬人,嚴(yán)重威脅了人們的身體健康與生命安全[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì),全部肺癌病例類型中有將近80%為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)[2]。雖然目前臨床已發(fā)現(xiàn)多種肺癌分子標(biāo)志物,如細(xì)胞角蛋白-19、組織蛋白酶D、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶等在肺癌的發(fā)生、發(fā)展中具有重大影響,但是臨床治療療效仍需提高,迫切需要尋找新的分子標(biāo)志物。細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶活化激酶(CAK)是細(xì)胞生長、增殖事件中級(jí)聯(lián)反應(yīng)的重要調(diào)節(jié)因子,可參與癌細(xì)胞形成。細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶活化激酶組成因子1(MNAT1)對(duì)CAK起到“開關(guān)作用”[3-4]。已有研究表明,MNAT1可能參與了NSCLC的發(fā)生發(fā)展過程[5]。本研究探討早期NSCLC組織中MNAT1表達(dá)及其與臨床病理特征及患者預(yù)后的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 將南京市江寧醫(yī)院2018年1月至2020年10月收治的96例Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者納入研究,男59例,女37例;年齡31～77歲,平均(50.34±7.12);29例發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;41例發(fā)生胸膜浸潤;38例發(fā)生氣道內(nèi)擴(kuò)散;腫瘤最大徑1.1～6.8 cm,平均(3.68±0.53)cm。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)經(jīng)病理學(xué)檢查確診為NSCLC[6];(2)臨床分期I～ⅡB期;(3)符合手術(shù)切除指征,且實(shí)施該術(shù)式;(4)隨訪至少2年。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)手術(shù)切除前接受放化療等抗腫瘤治療者;(2)復(fù)發(fā)NSCLC患者或其他部位惡性腫瘤轉(zhuǎn)移至肺部者;(3)失訪者;(4)隨訪期間意外死亡者;(5)有精神障礙或診療依從性差者;(6)臨床資料不完整者。的臨床資料進(jìn)行回顧性分析,見表1。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審批通過。

表1 入選患者的基本資料

1.2方法

1.2.1取材與處理 所有患者均于手術(shù)中切取病變及其周圍組織,距癌組織邊緣≥2 cm的組織為癌旁組織。

1.2.2MNAT1蛋白表達(dá)檢測 采取免疫組化法對(duì)MNAT1蛋白表達(dá)檢測。標(biāo)本首先4%甲醛溶液固定,經(jīng)石蠟包埋后切片,微波抗原修復(fù),抗體均由Lecia Novocastra公司提供,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作。添加鼠抗人單克隆抗體,4 ℃孵育過夜,沖洗,滴加兔抗鼠多克隆抗體,室溫孵育40 min,沖洗,滴入二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色液(四川海諾威科技有限公司),復(fù)染、脫水、封片。MNAT1主要表達(dá)于細(xì)胞核,將淡棕色、棕色、棕褐色記為陽性染色,將陽性染色細(xì)胞≥20%記為蛋白陽性表達(dá)。

1.2.3隨訪 所有患者術(shù)后均隨訪2年。

1.3觀察指標(biāo) 觀察癌組織MNAT1蛋白表達(dá)的變化,探討MNAT1蛋白陽性表達(dá)與不同臨床病理特征以及患者預(yù)后的關(guān)系。

2 結(jié) 果

2.1癌組織和癌旁組織中MNAT1蛋白陽性表達(dá)率的比較 癌組織MNAT1蛋白陽性表達(dá)率為51.04%(49/96),癌旁組織為10.42%(10/96),前者高于后者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=37.216,P<0.001,見圖1。

注:A為癌組織MNAT1蛋白陽性表達(dá);B為癌旁組織MNAT1蛋白陰性表達(dá)。

2.2MNAT1蛋白陽性表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系 癌組織MNAT 蛋白陽性表達(dá)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、胸膜浸潤和氣道內(nèi)播散有關(guān),而與患者性別、年齡、最大腫瘤直徑、病理類型、生長類型無關(guān)(P>0.05),見表2。

表2 不同臨床病理特征患者癌組織MNAT1蛋白陽性表達(dá)率對(duì)比結(jié)果[n(%)]

2.3癌組織MNAT1蛋白陽性表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系 醫(yī)院收治的96例Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者術(shù)后1年內(nèi)有29例(30.21%)復(fù)發(fā),2年內(nèi)有76例(79.17%)復(fù)發(fā)。癌組織MNAT1蛋白陽性表達(dá)患者術(shù)后1年內(nèi)和2年內(nèi)復(fù)發(fā)率均高于癌組織MNAT1蛋白陰性表達(dá)患者(χ2=29.418、17.029,P<0.001)。

2.4癌組織MNAT1蛋白陽性表達(dá)與患者術(shù)后死亡的關(guān)系 96例患者中術(shù)后2年內(nèi)共有11例死亡,病死率為11.46%。死亡患者癌組織MNAT1蛋白陽性表達(dá)率為100.00%(11/11),生存患者為44.71%(38/85),提示癌組織MNAT1蛋白陽性表達(dá)與患者術(shù)后2年生存有關(guān)(χ2=11.795,P=0.001),生存曲線見圖3。

圖3 癌組織MNAT1蛋白陽性與陰性表達(dá)患者Kaplan-Meier生存曲線

3 討 論

MNAT1是CAK的組配因子,也是CAK的重要組成部分,對(duì)CAK的活性起到重要作用,CAK可通過磷酸化調(diào)控機(jī)體細(xì)胞周期進(jìn)程[8-9]。故MNAT1對(duì)細(xì)胞周期進(jìn)展具有重大作用,推測很可能能夠影響惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。

本次研究旨在探討早期NSCLC癌組織中MNAT1的表達(dá)及其臨床意義,發(fā)現(xiàn)Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者手術(shù)切除的癌組織中存在MNAT1蛋白表達(dá)偏高。相關(guān)研究表明[10-11],CAK可通過磷酸化CDK上的殘基,進(jìn)而控制機(jī)體細(xì)胞周期進(jìn)程,對(duì)細(xì)胞的增殖、代謝、存活、轉(zhuǎn)錄調(diào)控等生物過程具有重要作用,也與腫瘤細(xì)胞的生長、增殖緊密相關(guān)。siRNA沉默肺癌細(xì)胞株A549的MNAT1表達(dá),發(fā)現(xiàn)其增殖、遷移活性均下降,且Akt/p21信號(hào)傳導(dǎo)通路被抑制,推測MNAT1表達(dá)升高可能是通過激活A(yù)kt/p21通路促進(jìn)肺癌的發(fā)展,增強(qiáng)腫瘤的浸潤與轉(zhuǎn)移能力的[12]。本研究中癌組織中MNAT1蛋白陽性表達(dá)率高,推測很可能是通過調(diào)控細(xì)胞生長、增殖等途徑參與NSCLC的發(fā)生。

另外,本研究還發(fā)現(xiàn),96例Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者術(shù)后1年復(fù)發(fā)率為30.21%、術(shù)后2年復(fù)發(fā)率為79.17%,證實(shí)Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者術(shù)后存在極大復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn);Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者癌組織MNAT蛋白陽性表達(dá)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、胸膜浸潤、氣道內(nèi)播散均有關(guān),可知該蛋白陽性表達(dá)很可能參與NSCLC病情進(jìn)展。MNAT1 蛋白陽性表達(dá)可通過增強(qiáng)細(xì)胞的增殖能力促進(jìn)惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展,與惡性腫瘤的部分臨床特征、預(yù)后緊密相關(guān)[13-14]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[9],在NSCLC患者的癌組織中MNAT1表達(dá)高于正常肺組織,MNAT1表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移成正相關(guān)。此外,本研究中癌組織MNAT1蛋白陽性表達(dá)與Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者術(shù)后1年復(fù)發(fā)有關(guān),提示該蛋白陽性表達(dá)很可能能夠增加患者術(shù)后復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。相關(guān)研究表明[15],低MNAT1表達(dá)可對(duì)細(xì)胞遷移產(chǎn)生抑制作用,高M(jìn)NAT1表達(dá)可促進(jìn)細(xì)胞的遷移,降低MNAT1表達(dá)可降低使癌細(xì)胞的增殖能力,使細(xì)胞周期處于G1期,高表達(dá)則出現(xiàn)相反情況,即MNAT1可通過對(duì)Akt磷酸化的促進(jìn),進(jìn)而抑制p21表達(dá),使細(xì)胞增殖加快,導(dǎo)致細(xì)胞周期進(jìn)展加快,患者易復(fù)發(fā)。另外,本研究中癌組織MNAT1蛋白陽性表達(dá)與Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者術(shù)后2年生存有關(guān),與上述分析一致,這也印證了癌組織MNAT1蛋白陽性表達(dá)與Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者預(yù)后有關(guān)的結(jié)論。

綜上所述,在NSCLC癌組織中MNAT1蛋白陽性表達(dá)率高于癌旁組織,且癌組織MNAT1蛋白陽性表達(dá)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、胸膜浸潤、氣道內(nèi)播散、術(shù)后復(fù)發(fā)和術(shù)后2年生存均有關(guān),與術(shù)后1年生存無關(guān)。MNAT1能否成為NSCLC防控的新靶點(diǎn)需要進(jìn)一步研究。