卜華虎 王曉清 肖建紅 張寧 楊慧珍 任志強

摘要 通過對4份Lancaster種質(zhì)進(jìn)行雙列雜交和統(tǒng)計分析，研究含有DH系的基礎(chǔ)材料對單倍體誘導(dǎo)率、散粉率和自然加倍率的影響。結(jié)果表明，不同基因型材料的誘導(dǎo)率為3.6%～11.4%，散粉率為11.4%～40.0%，自然加倍結(jié)實率為3.4%～14.1%；來源不同的單倍體株系的誘導(dǎo)率、散粉率以及結(jié)實率均表現(xiàn)出相同的趨勢，由高到低排序依次為雙親都為DH系的基礎(chǔ)材料、雙親有1個為DH系的基礎(chǔ)材料、雙親無DH系的基礎(chǔ)材料。以含有DH系的基礎(chǔ)材料具有較高的誘導(dǎo)率、散粉率和結(jié)實率。將優(yōu)秀自交系與選育的DH系進(jìn)行雜交，有助于提高誘導(dǎo)效率和加倍效率，使優(yōu)良基因充分聚合，實現(xiàn)輪回上升式改良種質(zhì)的目標(biāo)，旨在為提高單倍體育種效率提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞 單倍體；誘導(dǎo)率；自然加倍；雙列雜交

中圖分類號 S513? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A? 文章編號 0517-6611（2023）13-0033-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.13.008

Effects of DH Blood Relationship on Haploid Induction Efficiency and Natural Doubling of Maize

BU Hua-hu1， WANG Xiao-qing2， XIAO Jian-hong1 et al

（1.Shanxi Institute of Organic Dryland Farming， Shanxi Agricultural University， Taiyuan， Shanxi 030031; 2. College of Life Sciences， Shanxi Agricultural University， Taiyuan， Shanxi 030031）

Abstract Through diallel hybridization and statistical analysis of four Lancaster germplasms， the effects of basic materials containing DH lines on haploid induction rate， pollen dispersal rate and natural doubling rate were studied. The results showed that the induction rate of different genotypes was 3.6%-11.4%， the loose pollen rate was 11.4%-40.0%， and the natural doubling seed setting rate was 3.4%-14.1%. The induction rate， pollen dispersal rate and seed setting rate of haploid lines from different sources showed the same trend， both parents were in the order of basic material of DH line > one parent was the basic material of DH line > both parents had no basic material of DH line. The basic materials containing DH lines had high induction rate， pollen dispersal rate and seed setting rate. Based on the analysis results， crossing the excellent inbred lines with the selected DH lines would help to improve the induction efficiency and doubling efficiency， to make the excellent genes fully aggregate， and to achieve the goal of improving Germplasm in a cyclical upward manner， aiming to provide a theoretical basis for improving the efficiency of haploid breeding.

Key words Haploid;Induction rate;Natural doubling;Diallel hybridization

基金項目 生物育種工程項目“中熟、耐旱玉米種質(zhì)資源創(chuàng)新及新品種選育”（YZGC145）；有機旱作農(nóng)業(yè)研發(fā)專項“抗旱玉米種質(zhì)創(chuàng)新及新品種選育”（YCX2020404）。

作者簡介 卜華虎（1986—），男，安徽滁州人，副研究員，碩士，從事作物遺傳育種、資源創(chuàng)新以及生化和分子生物學(xué)研究工作。通信作者，研究員，碩士，從事玉米遺傳研究工作。

收稿日期 2022-08-31

玉米是我國的第一大作物，2020年我國玉米種植面積達(dá)4 126萬hm2，總產(chǎn)量達(dá)到26 067萬t，而單產(chǎn)僅是國際先進(jìn)水平的2/3，具有相當(dāng)大的提升空間。玉米的傳統(tǒng)育種技術(shù)需要經(jīng)過6～10代的自交選擇，耗時長，見效慢。近年來，單倍體育種技術(shù)越來越受到育種家的重視，與分子標(biāo)記輔助育種、轉(zhuǎn)基因育種并稱現(xiàn)代玉米育種的核心技術(shù)［1-5］。單倍體育種能夠顯著縮短育種年限，一般只需要1代自交即可獲得純合自交系。單倍體技術(shù)的推廣應(yīng)用已突破了傳統(tǒng)的育種技術(shù)模式，使我國在該領(lǐng)域?qū)崿F(xiàn)了從無到有再到優(yōu)的跨越式發(fā)展［6］。

近年來，國內(nèi)外育種公司已將玉米單倍體育種技術(shù)廣泛運用到商業(yè)化育種中，不斷提高玉米育種速度和效率［7-9］，玉米單倍體的加倍率、散粉率和結(jié)實率受到諸多因素的影響，自然和化學(xué)加倍法效率依然偏低［10］。誘導(dǎo)率低、散粉時間短、散粉量少、雌雄不協(xié)調(diào)、結(jié)實率低等成為限制單倍體育種技術(shù)發(fā)展的主要因素［10］。玉米單倍體自然加倍率低，多數(shù)材料自然加倍率低于5%，有些材料甚至不發(fā)生自然加倍［12-13］。近年來，相繼發(fā)現(xiàn)了用加倍功能的除草劑和其他化學(xué)試劑能夠提高單倍體加倍率，但綜合加倍效率低，在化學(xué)藥劑加倍的處理過程中，部分單倍體植株因受到藥害導(dǎo)致死亡。因而，誘導(dǎo)率和加倍率的提高成為影響單倍體育種效率的關(guān)鍵［14］。

“瑞德×蘭卡斯特”模式是世界第1對典型的雜種優(yōu)勢模式，蘭卡斯特類群是目前國內(nèi)外主要的雜種優(yōu)勢群之一［15-18］。研究表明，不同遺傳類型材料的誘導(dǎo)率有不同，其中蘭卡斯特類群材料產(chǎn)生的單倍體的頻率最高，要顯著高于瑞德、唐四平頭、旅大紅骨和其他種質(zhì)類群［19-20］。鑒于此，筆者研究了含有DH系的蘭卡斯特類群基礎(chǔ)材料對誘導(dǎo)率、散粉率和自然加倍率的影響，探索含有DH系的基礎(chǔ)材料組對單倍體育種的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料為本課題組保存的4種蘭卡斯特類群自交系：瑞普909F、WQ12、DH17-2-14和DH17-3-8，其中瑞普909F和WQ12為不含DH血緣的自交系，DH17-2-14和DH17-3-8為單倍體，4種自交系的來源見表1。

1.2 試驗方法

1.2.1 基礎(chǔ)群體的構(gòu)建。

將4種Lancaster血緣的玉米自交系瑞普909F、WQ12、DH17-2-14、DH17-3-8進(jìn)行雙列雜交，共計12種排列，授粉雜交后得到12個F1代，這12個F1代構(gòu)成試驗的基礎(chǔ)群體。

1.2.2

不同血緣單倍體的誘導(dǎo)。

將基礎(chǔ)群體中的12個F1代自交后，得到的F2代各種植3行，全部用農(nóng)大高誘5號進(jìn)行誘導(dǎo)，誘導(dǎo)獲得的果穗中選取6個果穗作為1組，共3次重復(fù)（表2）。基于R-nj遺傳標(biāo)記篩選系統(tǒng)，選取糊粉層為紫色、胚芽為白色的籽粒作為準(zhǔn)單倍體。所有供試誘導(dǎo)材料均為F1代，所有參試材料均種植在晉中市東陽試驗基地。

1.2.3 單倍體的識別與鑒定。

將所有的準(zhǔn)單倍體籽粒單粒播種于田間，種植密度為10.5萬株/hm2，根據(jù)苗期表型鑒定單倍體植株［6］。單倍體苗期鑒定方法為：在相同的管理條件下，單倍體植株往往比較矮小，葉片較少、狹窄、直立，生長緩慢；雜交植株則株型高大，生活力較強，長勢較為旺盛［21］，田間依此標(biāo)準(zhǔn)去除雜株。統(tǒng)計總籽粒數(shù)、準(zhǔn)單倍體數(shù)和田間雜株數(shù)。

1.2.4 田間加倍和授粉。

準(zhǔn)單倍體植株雌穗吐絲前及時給雌穗套袋防止授精，在雄穗散粉期仔細(xì)觀察雄穗，若有散粉跡象，提前對雌穗進(jìn)行剪花絲處理，一旦發(fā)現(xiàn)雄穗有散粉的情況，立刻授粉并掛牌，每個植株授粉3次［22］。統(tǒng)計散粉株數(shù)和結(jié)實株數(shù)。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用數(shù)據(jù)籽粒表型初篩和苗期形態(tài)學(xué)特征鑒定單倍體植株，計算實際誘導(dǎo)率、散粉率和結(jié)實率［23-24］，利用DPS數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行方差分析。

散粉率=散粉株數(shù)/單倍體總株數(shù)×100%；

結(jié)實率=單倍體自交結(jié)實株數(shù)/單倍體總株數(shù)×100%；

實際誘導(dǎo)率=單倍體植株/總雜交籽粒數(shù)×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同材料的單倍體誘導(dǎo)率

從圖1和表2可以看出，不同基礎(chǔ)群體材料之間誘導(dǎo)率存在差異，平均誘導(dǎo)率最高的是DH17-2-14×DH17-3-8，為11.93%；平均誘導(dǎo)率最低的是WQ12×瑞普909F，為3.63%。其中雙親都為DH系的誘導(dǎo)率最高，平均誘導(dǎo)率為11.92%，雙親有一個為DH系的平均誘導(dǎo)率為7.26%，雙親無單倍體誘導(dǎo)率最低，平均誘導(dǎo)率為4.00%。其中利用雙親DH系建立基礎(chǔ)群體的后代誘導(dǎo)率高于單個DH系建立的基礎(chǔ)群體，普通群體建立的基礎(chǔ)群體誘導(dǎo)率較低，三者有顯著差異，不同材料組成的基礎(chǔ)材料也具有顯著性差異。

2.2 不同材料的散粉率

從圖2和表3可以看出，不同基礎(chǔ)群體材料之間散粉率存在差異，平均散粉率最高的是DH17-2-14×DH17-3-8，為41.20%；平均散粉率最低的是瑞普909F×WQ12，為11.40%。其中雙親都為DH系的散粉率最高，平均散粉率為41.02%，雙親有1個為DH系的平均散粉率為29.45%，雙親無單倍體散粉率最低，平均散粉率為11.97%。其中利用雙親DH系建立基礎(chǔ)群體的后代散粉率高于單個DH系建立的基礎(chǔ)群體，而普通群體建立的基礎(chǔ)群體散粉率較低，3者有顯著性差異。

2.3 不同材料的自然加倍率結(jié)實率

從圖3和表4可以看出，不同基礎(chǔ)群體材料之間結(jié)實率存在差異，平均結(jié)實率最高的是DH17-3-8×DH17-2-14，為14.07%；平均結(jié)實率最低的是瑞普909F×WQ12，為3.43%。其中雙親為DH系的結(jié)實率最高，平均結(jié)實率為13.99%，雙親有1個為DH系的平均結(jié)實率為9.23%，雙親無單倍體結(jié)實率最低，平均結(jié)實率為3.47%。其中，利用雙親DH系建立基礎(chǔ)群體的后代結(jié)實率高于單個DH系建立的基礎(chǔ)群體，而普通群體建立的基礎(chǔ)群體較低，3者有顯著性差異，不同材料組成的基礎(chǔ)材料也具有顯著性差異。

3 結(jié)論與討論

單倍體植株往往長勢弱，自然散粉結(jié)實率低。張曉慧等［25］對77份玉米材料進(jìn)行單倍體誘導(dǎo)、自然加倍等方面研究表明，平均誘導(dǎo)率為9%～16%，雄穗加倍率2.8%～48.4%，雌穗加倍率90%左右，自交結(jié)實株率0～14.9%，平均結(jié)實率為3.5%左右，授粉結(jié)實株率20.7%～31.3%。孫瑞等［26］通過研究高誘5號平均誘導(dǎo)率為3.13%。大多數(shù)育種材料自然加倍率僅在0～10%［27-28］。徐國良等［29］研究表明，不同材料單倍體的雌穗自然加倍率為84.30%～97.44%；雄穗自然加倍率較低，加倍率為5.62%～19.19%。劉治先等［30］認(rèn)為，單倍體誘導(dǎo)率不因基礎(chǔ)材料的不同而異。Eder等［31］研究表明，母體基因型對誘導(dǎo)率有顯著影響。祁志云等［32］研究也表明，相同誘導(dǎo)系對不同母本材料誘導(dǎo)率差別明顯；黎亮等［33］也得出相同的結(jié)論。

4 結(jié)論

通過對含有DH系血緣材料組成的基礎(chǔ)材料誘導(dǎo)率、散粉率和自然加倍率研究，結(jié)果表明農(nóng)大高誘5號平均誘導(dǎo)率為7.5%，平均散粉率為28.5%，平均結(jié)實率為9.1%。且不同基礎(chǔ)材料的誘導(dǎo)率、散粉率和結(jié)實率不同，達(dá)到顯著性差異，與前人研究結(jié)果相似。DH系血緣材料組成的基礎(chǔ)材料表現(xiàn)出雙親都為DH系的基礎(chǔ)材料優(yōu)于雙親有1個為DH系的基礎(chǔ)材料，而雙親無DH系的基礎(chǔ)材料表現(xiàn)較差。普通玉米種質(zhì)不論在誘導(dǎo)率、散粉率和結(jié)實率都較低，不利于大規(guī)模商業(yè)化運用，而利用DH系組建基礎(chǔ)材料，能夠顯著增加誘導(dǎo)率、散粉率和結(jié)實率，利用DH系經(jīng)過2輪輪回選擇，再經(jīng)過雜交誘導(dǎo)所獲得的單倍體雄穗散粉率和結(jié)實率分別是原始群體直接誘導(dǎo)單倍體的6.99和9.86倍［34］?？梢酝ㄟ^組建DH基礎(chǔ)材料，使目標(biāo)性狀相關(guān)有益基因頻率逐步累加，達(dá)到輪回上升式育種，明確育種目標(biāo)，提高育種速率，為加快單倍體育種提供理論依據(jù)。

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