楊愛(ài)榮

（山東省濟(jì)寧市任城區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 山東濟(jì)寧 272000）

隨著現(xiàn)在集約化、規(guī)模化、標(biāo)準(zhǔn)化養(yǎng)豬場(chǎng)的發(fā)展，養(yǎng)殖戶越來(lái)越多的應(yīng)用操作簡(jiǎn)單、受孕率較高、費(fèi)用較低的人工授精技術(shù)進(jìn)行配種繁殖，但是豬精液品質(zhì)的好壞直接影響了豬場(chǎng)的生產(chǎn)規(guī)模、經(jīng)濟(jì)效益等指標(biāo)。而在豬精液保存過(guò)程中最易降低精子質(zhì)量的因素之一就是氧化應(yīng)激，但是眾多研究表明?；撬峋哂姓{(diào)控生殖功能、提高精子抗氧化能力等作用。因此，本文作者在查閱相關(guān)資料和結(jié)合實(shí)際工作經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，從多個(gè)指標(biāo)分析了在低溫保存豬精液時(shí)，牛磺酸對(duì)其產(chǎn)生的影響，以期能夠進(jìn)一步推廣?；撬嶙鳛榫罕Ｗo(hù)劑在豬精液保存中的應(yīng)用，并且為廣大同行提供參考，保證精液品質(zhì)，提高養(yǎng)殖效益。

1 牛磺酸作用及機(jī)理

?；撬幔é?氨基乙磺酸）是一種在動(dòng)物體內(nèi)以游離形式存在的含硫氨基酸，雖然不參與蛋白質(zhì)合成代謝過(guò)程中的任何途徑，但是其不僅有藥物作用，還有營(yíng)養(yǎng)作用，具有較多的生理功能。例如：可以有效清除自由基、保護(hù)質(zhì)膜的完整性而增強(qiáng)細(xì)胞膜的抗氧化能力；通過(guò)保護(hù)視網(wǎng)膜，降低發(fā)生白內(nèi)障的風(fēng)險(xiǎn)，提高畜禽視力；通過(guò)中和細(xì)菌所產(chǎn)生的毒素，保護(hù)肝臟細(xì)胞膜，有效降低膽酸的毒性；通過(guò)與胰島素發(fā)揮協(xié)同作用，降低畜禽血糖；通過(guò)降低精子膜上脂質(zhì)過(guò)氧化損傷保護(hù)精子等。

?；撬岵粌H是精液中存在含量最多的游離氨基酸之一，而且也廣泛存在于雄性動(dòng)物的睪丸間質(zhì)細(xì)胞、平滑肌以及周圍血管內(nèi)皮細(xì)胞中，因此與雄性畜禽的生殖能力密切相關(guān)。?；撬釋?duì)豬精液品質(zhì)的作用機(jī)理，不僅體現(xiàn)在通過(guò)清除自由基降低精子膜脂質(zhì)的過(guò)氧化損傷；而且還可以抑制精子膜上磷脂甲基轉(zhuǎn)移酶的活性，進(jìn)而改變精子膜上鈉鉀離子ATP 酶的活性，從而在豬精液低溫保存中起到保護(hù)精液品質(zhì)的作用[1]。

2 對(duì)豬精液品質(zhì)指標(biāo)的影響

精液品質(zhì)的好壞直接影響了人工授精的成敗，影響了母豬妊娠率，還影響了養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)效益。在使用?；撬嶙鳛榫罕Ｗo(hù)劑時(shí)，必須有一些評(píng)價(jià)精液質(zhì)量的指標(biāo)來(lái)研究其對(duì)低溫條件下精液保存產(chǎn)生的影響。常用采精量、精子密度、精子活力、精子畸形率以及質(zhì)膜完整率、頂體完整率等指標(biāo)來(lái)作為評(píng)價(jià)精液質(zhì)量的指標(biāo)。

2.1 采精量

在采精時(shí)，一次收集到的豬只的精液總體積稱之為采精量，是評(píng)價(jià)精液品質(zhì)好壞的最直觀的指標(biāo)之一，在統(tǒng)計(jì)時(shí)，可以用帶有刻度的容器直接測(cè)量。但是，采精量也會(huì)受到豬只年齡、品種、個(gè)體差異以及所用牛磺酸濃度的影響。李方方等[1]通過(guò)比較是否在豬只飼料中添加?；撬嵋约疤砑拥呐；撬崴?，發(fā)現(xiàn)飼料中添加牛磺酸可以顯著增加種公豬的采精量，并且當(dāng)?；撬岬奶砑铀綖? g/kg時(shí)，1～45 d 以及46～90 d 的采精量均最大，分別可達(dá)250、280 mL，可能是由于飼料中添加?；撬釋?duì)精子的生成具有促進(jìn)作用，故顯著增加了采精量。

2.2 精子密度

每毫升精液中含有的精子數(shù)量稱之為精子密度。精子密度直接關(guān)系到精液稀釋的倍數(shù)以及對(duì)輸精過(guò)程中所用劑量的計(jì)算。精子密度越大，則稀釋倍數(shù)越大，在人工授精中用于配種的母豬越多。一般情況下，豬精液的濃度為3.0×107～5.0×107/ mL 時(shí)可以保證每頭母豬受精達(dá)3×109～4.0×109個(gè)精子，并且也能保證每只母豬使用80～100 mL 的精液用量。使用?；撬幔梢燥@著提高豬精液中的精子密度[2]。

2.3 精子活力

用精子活力表示精液中呈前進(jìn)狀態(tài)運(yùn)動(dòng)（這種精子才具備正常的生存能力、具備受精的能力）的精子數(shù)量占全部精子的百分比率。精子活力直接影響了精液的品質(zhì)和母豬的受胎率。劉琦[3]研究了在自己配制的精液稀釋液中添加不同劑量（0、0.5、1、5、10 mmol/L）的牛磺酸對(duì)精子活力的影響，發(fā)現(xiàn)精子活力隨添加的牛磺酸劑量在一定的范圍內(nèi)先升高后降低，說(shuō)明當(dāng)?；撬崽砑拥臐舛冗m宜時(shí)，可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞膜對(duì)Ca2+的通透性以及調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)外滲透壓來(lái)提高精子活力，但是若濃度過(guò)大，則可能會(huì)因影響精子質(zhì)膜的通透性進(jìn)而破環(huán)精子結(jié)構(gòu)。謝東淇等[4]研究了不同牛磺酸和抗生素復(fù)合劑對(duì)豬精液保存過(guò)程中精子活力的影響，發(fā)現(xiàn)當(dāng)向稀釋液中添加5 mmol/L ?；撬釙r(shí)，精液保存5 d 后的精子活力為64.11%，顯著高于不添加或者添加其他劑量的牛磺酸組的精子活力。

2.4 質(zhì)膜和頂體完整率

精子質(zhì)膜和頂體完整率也是評(píng)價(jià)精液質(zhì)量好壞的重要指標(biāo)之一，直接影響人工授精之后的受胎率。劉琦[3]研究發(fā)現(xiàn)在精子保存的不同天數(shù)，不同牛磺酸濃度對(duì)精子質(zhì)膜完整率的影響不同，當(dāng)保存天數(shù)為1～2 d 時(shí)，添加5 mmol/L ?；撬岬木淤|(zhì)膜完整率顯著高于其他添加劑量組；當(dāng)保存天數(shù)為3～5 d 時(shí)，添加1 或者5 mmol/L ?；撬岬木淤|(zhì)膜完整率高于其他添加劑量組，這個(gè)結(jié)果表明，在稀釋液中添加?；撬峥梢蕴岣呔淤|(zhì)膜完整率，但是具體添加劑量需要根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。對(duì)于精子頂體完整率，在一定程度上隨牛磺酸添加濃度的增加先升高后降低，但總體而言是添加5 mmol/L 時(shí)精子的頂體完整率最高，可達(dá)72.10%。

2.5 精子畸形率

當(dāng)精子出現(xiàn)畸形時(shí)（尤其是出現(xiàn)尾部打結(jié)、纏繞、卷曲等情況），會(huì)嚴(yán)重影響精子的正常運(yùn)動(dòng)以及降低精子的受精能力，因此，在保存精液過(guò)程中一定要有目的地降低精子的畸形率。王赫川等[5]通過(guò)研究向Modena 稀釋液中添加不同濃度的牛磺酸對(duì)豬精液保存效果的影響，發(fā)現(xiàn)當(dāng)向稀釋液中添加5 mmol/L 的?；撬釙r(shí)，保存11 d 時(shí)精子畸形率為31.2%，顯著低于不添加或者添加其他劑量組，說(shuō)明在精液稀釋劑中添加一定劑量的?；撬峥梢悦黠@改善精子發(fā)生畸形的概率，但是改善情況與保存天數(shù)等有關(guān)，因此，最佳使用劑量還要根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整，并且相關(guān)機(jī)制也要進(jìn)一步研究。

3 對(duì)精液抗氧化能力的影響

選擇?；撬嶙鳛榫罕４孢^(guò)程中稀釋液的保護(hù)劑，一定程度上是因?yàn)榕；撬峋哂休^強(qiáng)的抗氧化作用，主要通過(guò)參與清除自由基、維持應(yīng)激狀態(tài)下供能細(xì)胞器線粒體電子傳遞鏈的完整性、維持生物膜系統(tǒng)的穩(wěn)定性以及有效抑制畜禽體內(nèi)特定ROS 產(chǎn)生酶類這4 個(gè)方面發(fā)揮抗氧化功能。用T-AOC（總抗氧化能力）以及MAD（丙二醛）作為評(píng)價(jià)?；撬嶙鳛榭寡趸瘎┰诰罕４嬷邪l(fā)揮作用的指標(biāo)。

3.1 T-AOC

作為反映畜禽體內(nèi)總抗氧化能力的指標(biāo)，T-AOC 可以直接反映出精子對(duì)抗自由基攻擊的能力，也就是精子的抗氧化水平。當(dāng)在豬精液稀釋劑中添加不同劑量的?；撬釙r(shí)，T-AOC 的活性先隨著添加劑量的增大而增大，隨后急劇下降，當(dāng)添加劑量為5 mmol/L 時(shí)抗氧化效果最佳。王赫川等[5]研究0、1、5、10 mmol/L 的牛磺酸對(duì)豬精子中T-AOC 的影響，發(fā)現(xiàn)只要添加牛磺酸就可以顯著提高TAOC 的濃度，但是使用效果也會(huì)受到精液保存天數(shù)的影響，故對(duì)于不同保存天數(shù)的精液可能所需添加的牛磺酸的劑量不同。

3.2 MAD

MAD 是脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程中產(chǎn)生的氧化產(chǎn)物。正常情況下，精子呼吸和新陳代謝過(guò)程中產(chǎn)生的ROS 會(huì)被抗氧化酶消除，但是過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的精液保存破環(huán)了其內(nèi)部的環(huán)境，降低了精液中抗氧化酶的活性進(jìn)而導(dǎo)致ROS 增加，故產(chǎn)生的MAD 也會(huì)增多。當(dāng)牛磺酸作為一種抗氧化劑添加到保存的豬精液中時(shí)，會(huì)顯著降低精液中MAD的產(chǎn)生速率。當(dāng)向精液中添加0.5 mmol/L ?；撬釙r(shí)不能降低MAD的濃度，但是添加1、5 mmol/L 時(shí)就能顯著降低MAD 的濃度，說(shuō)明在精液中添加?；撬峥梢酝ㄟ^(guò)消除氧自由基、提高抗氧化酶活性發(fā)揮作用，但是必須要達(dá)到一定的添加劑量，并且抗氧化的能力有限，使用時(shí)要多加注意。

4 其他因素對(duì)豬精液保存的影響

精液保存過(guò)程中受到多種因素的影響，除了關(guān)注?；撬嶙鳛橐环N精液保存過(guò)程中的抗氧化劑，可以有效提高精液質(zhì)量外，還要考慮到其他因素對(duì)精液產(chǎn)生的影響。

4.1 pH 值

pH 值是衡量精子生存環(huán)境的重要指標(biāo)之一，過(guò)酸過(guò)堿的環(huán)境都可能造成精子的死亡。因此，在精液保存過(guò)程中，一定要注意其pH 的變化。多數(shù)人認(rèn)為，精子在保存過(guò)程中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物是酸性的，為了保持精液保存過(guò)程中的中性環(huán)境，必須要在精液中加入適量的堿性稀釋液可以增加精子保存后的效果。

4.2 稀釋液

稀釋液是精子保存過(guò)程中主要能量來(lái)源，并且為精子提供了一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的環(huán)境，因此，稀釋液的配制以及所需試劑的選擇均會(huì)影響精液保存質(zhì)量的好壞。在配制精液稀釋液時(shí)，一般情況下要考慮到營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（葡萄糖、糖蜜）為其提供能量，緩沖物質(zhì)（HEPES、MOPS）為其提供相對(duì)穩(wěn)定的pH，無(wú)機(jī)鹽離子（Na+、K+）維持精子的正常形態(tài)以及活動(dòng)，抗生素為其提供相對(duì)無(wú)菌的環(huán)境等。

5 小結(jié)

?；撬嶙鳛樨i精液保存過(guò)程中的抗氧化劑之一，在一定程度上可以通過(guò)提高采精量、精子密度、精子活力、質(zhì)膜和頂體完整率，降低精子畸形率，提高總抗氧化能力，降低丙二醛濃度從而達(dá)到提高精液質(zhì)量的目的，在豬精液保存中有廣闊應(yīng)用前景。