王鑫 楊柳 王瀟翊

（1.商丘市第一人民醫(yī)院分子生物實驗室，河南 商丘 476000；2.商丘市第一人民醫(yī)院輸血科，河南商丘 476000）

巨細胞病毒感染由人類巨細胞病毒（Human cytomegalovirus，HCMV）感染引起，我國為HCMV感染高發(fā)地區(qū)，多于兒童時期獲得。早期多數(shù)感染者無明顯癥狀，但先天感染和免疫抑制個體可引起嚴重疾病，嬰幼兒期感染常累及肝臟，故及時診斷對患兒治療具有重要意義[1]。由于HCMV感染無典型的臨床癥狀，僅靠臨床表現(xiàn)無法完全明確診斷，需結(jié)合其他方法進行診斷。隨著實驗室檢驗技術(shù)發(fā)展，用于HCMV檢測方法也在與時俱進，主要包括血液學(xué)檢查、尿液檢查、腦脊液檢查。但由于國內(nèi)大部分醫(yī)院并未完全普及病毒分離培養(yǎng)法診斷HCMV感染；同時嬰幼兒兒童產(chǎn)生免疫球蛋白（IgM）抗體能力薄弱，使用酶聯(lián)免疫吸附法檢測HCMV-IgM準確率低，而IgM陰性不代表患兒無HCMV感染的可能性[2]。這些因素給HCMV感染的診斷帶來了一定難度。

國外有學(xué)者認為由于病毒DNA的出現(xiàn)通常早于病毒感染的臨床癥狀或血清學(xué)反應(yīng)，因此，熒光定量PCR技術(shù)目前已成為一種能早期、敏感地發(fā)現(xiàn)HCMV感染的診斷方法[3]。基于此，本文旨在分析尿液HCMV-DNA聯(lián)合血清HCMV-IgM檢測在患兒HCMV感染中的診斷效能。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2019年7月-2022年8月收治HCMV感染患兒112例為研究對象。112例感染患兒中，男55例，女57例，年齡3d-12 m，平均年齡99.17±10.59d。根據(jù)主訴、體格檢查及第一臨床診斷可將HCMV感染患兒進一步分為肺炎組（n=68）、肝炎組（n=26）及其他組（n=18，主訴主要為發(fā)熱、腹瀉等）。其中肝炎組男36例，女32例，年齡3d-89 d，平均年齡76.53±8.16 d；肺炎組男11例，女15例，年齡30d-210 d，平均年齡（112.43±9.04）d；其他組男8例，女10例，年齡53d-360 d，平均年齡112.43±9.04 d。納入標(biāo)準：經(jīng)臨床確診為HCMV感染；臨床相關(guān)資料完整；排除標(biāo)準：合并遺傳性疾病者；合并其他器官并發(fā)癥者；近期使用過抗HCMV藥物者。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準，且患者及家屬同意本研究。

1.2 方法

1.2.1 尿液HCMV-DNA

早上收集研究對象3-5ml的尿液，放入無菌離心管中，離心（12000 rpm，10 min），棄上清，加入50 μL核酸釋放劑，與沉淀震蕩混勻，備用。取備用樣本10 μL，加入40μLPCR反應(yīng)混合物中，擴增條件：93℃，2 min，預(yù)變性；93℃45 s-55℃，15 min，10個循環(huán)；93℃30 s—55℃45 s，30個循環(huán)。HCMV陽性參考2012年中華醫(yī)學(xué)會兒科分會制訂的《HCMV感染診斷和防治指南》，反應(yīng)在上海宏石SLAN-96P全自動熒光定量PCR儀上進行，根據(jù)標(biāo)準曲線分析并計算HCMV—DNA拷貝數(shù)[4]。

1.2.2 血清HCMV-IgM

研究對象于晨起抽取空腹靜脈血2 mL，行離心（15000 rpm，10 min），取上清液，放置-20℃保存，采用化學(xué)發(fā)光法檢測血清HCMV-IgM，試劑盒來自德國Roche公司提供，操作嚴格按照說明書進行。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）HCMV感染患兒尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM的檢測結(jié)果；（2）不同性別HCMV感染患兒尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM檢測結(jié)果（3）不同疾病組尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM檢測結(jié)果；（4）不同年齡HCMV感染患兒尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM檢測結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

本研究數(shù)據(jù)均采用SPSS21.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析，計量資料用（±SD）表示，比較采用t檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HCMV感染患兒的尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM檢測結(jié)果

尿液HCMV-DNA陽性率為30.35%，血清HCMV-IgM陽性率為33.03%，兩者聯(lián)合檢測陽性率為87.50%；聯(lián)合檢測水平高于單一檢測。表1。

表1 尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM檢測陽性率比較

2.2 不同性別HCMV感染患兒尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM檢測結(jié)果

觀察組不同性別之間HCMV感染患兒尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及兩者聯(lián)合檢測結(jié)果均無統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=0.082，0.004，0.413；P＞0.05）。

2.3 不同疾病組HCMV感染患兒尿液HCMVDNA、血清HCMV-IgM檢測結(jié)果

肝炎組尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及兩者聯(lián)合檢出陽性率均高于肺炎組和其他組；且其他組尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及兩者聯(lián)合檢出陽性率低于肺炎組（χ2=24.243，24.727，27.645；P＜0.05）。見表3。

表3 不同疾病組尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM檢測結(jié)果[n(%)]

2.4 不同年齡HCMV感染患兒尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM檢測結(jié)果

＞180 d尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及兩者聯(lián)合檢出陽性率均高于＜90 d和90 d-180 d；且90 d-180 d尿液HCMV-DNA、血清HCMVIgM及兩者聯(lián)合檢出陽性率均高于＜90d（χ2=14.133，6.114，8.189；P＜0.05）。見表3。

表4 不同年齡HCMV感染患兒尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM檢測結(jié)果[n(%)]

3 討論

HCMV感染十分普遍，除少數(shù)原發(fā)性感染發(fā)生原發(fā)性單核細胞增多癥外，極大多數(shù)為隱性感染；HCMV感染可導(dǎo)致多個器官出現(xiàn)損傷，如肝臟發(fā)生炎癥、泌尿生殖系統(tǒng)感染、引發(fā)肺、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和血液循環(huán)發(fā)生病變[5]。然而HCMV感染臨床表現(xiàn)缺乏特異性，僅靠其并不能完全提供診斷依據(jù)，需依靠實驗室檢查進行輔助診斷。

在出生最初3 w的新生兒尿液、呼吸道分泌物或者其他體液分離出HCMV是先天性感染最敏感和特異的確診依據(jù)[6]。PCR在用于監(jiān)測免疫抑制病人的HCMV感染時，其敏感性高于病毒分離和抗原血清檢測，而尿液所含的病毒量較高，因此為首選的標(biāo)本[7]。本次研究應(yīng)用PCR技術(shù)對HCMV感染患兒檢查尿液HCMV-DNA，發(fā)現(xiàn)觀察組尿液HCMV-DNA陽性率為30.35%（34/112），說明HCMV感染普遍存在。有研究表明HCMVDNA陽性可早期預(yù)測HCMV感染存在，但僅此無法完全區(qū)別潛伏感染和活動性感染，其原因在于HCMV-DNA拷貝數(shù)重疊范圍廣，尚未明確DNA拷貝界限[7,8]。目前臨床常檢測血清HCMV IgM作為HCMV近期感染的重要依據(jù)。已有充分臨床證據(jù)證實抗HCMV IgM抗體檢測陽性表明機體近期存在活動性感染，如果同時抗HCMVIgG抗體陰性，則表明是HCMV原發(fā)性感染[7,8]。HCMV-IgG抗體陽性表明有既往感染，血清IgG抗體陽性轉(zhuǎn)化表明是原發(fā)感染，而連續(xù)監(jiān)測IgG滴度急劇升高表明存在HCMV活動性感染[7,8]。本次研究顯示觀察組血清HCMV-IgM陽性率為33.03%（37/112），說明其可準確判斷HCMV感染狀態(tài)，為治療提供一定依據(jù)；但其抗體本身代謝規(guī)律及檢測方法具有一定局限性。而本次結(jié)果顯示尿液兩者聯(lián)合檢測陽性率為87.50%，說明兩者結(jié)合檢測陽性率高于單一檢測，且可全面評估患兒HCMV感染狀態(tài)。HCMV的感染可通過改變宿主細胞的凋亡、增殖和免疫反應(yīng)等方式來破壞內(nèi)穩(wěn)態(tài)平衡，進而參與多種疾病的發(fā)生。嬰兒免疫系統(tǒng)薄弱，抑制HCMV入侵能力低下，極易受到感染，且感染后大部分患兒易出現(xiàn)不同程度的肝膽受損和間質(zhì)性肺炎[9]。本次研究顯示肝炎組尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及兩者聯(lián)合檢出陽性率均高于肺炎組和其他組；說明肝臟極大可能是患兒易受到巨細胞病毒感染的器官。

有研究表明年齡越低的嬰幼兒免疫系統(tǒng)不成熟，其產(chǎn)生IgM的能力也越低，故其假陰性多[7-9]。鑒于此，本文猜想通過尿液HCMV-DNA聯(lián)合血清HCMV-IgM檢測巨細胞病毒感染，發(fā)現(xiàn)＞180d尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及兩者聯(lián)合檢出陽性率均高于＜90 d和90 d-180 d，且其中兩者檢測陽性率高于單一檢測，提示尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM與年齡具有一定聯(lián)系，且再次間接證實兩者聯(lián)合檢測陽性率更高，原因可能是隨著孩子年齡的增長，腎臟較強的濃縮能力與接觸病原菌的概率增加相關(guān)[9,10]。

綜上所述，尿液HCMV-DNA聯(lián)合血清HCMV-IgM檢測在患兒HCMV感染中的診斷效能高，結(jié)合臨床表現(xiàn)可全面判斷患兒HCMV感染狀態(tài)。