馮陽　關秀春　葛忠凱　周忠號　丁樹龍

摘 要：雞胚免疫技術特指在孵化后期對雞胚進行免疫接種，使得雛雞一出生便獲得主動免疫的技術。作為一種腫瘤性疾病，雞馬立克氏病（Mareks disease，MD）可引起雞淋巴增生、各種器官和肌膚發(fā)生腫瘤病灶等。近年來，隨著雞養(yǎng)殖行業(yè)規(guī)模化、集約化的發(fā)展，雞群飼養(yǎng)密度的不斷增加，雞馬立克氏病的發(fā)生概率逐年攀升。此外，該病廣泛流行于全世界，傳染性強，危害大，與亞洲雞瘟和傳染性法氏囊病被列為阻礙養(yǎng)雞行業(yè)發(fā)展的三大疾病，嚴重影響著我國養(yǎng)雞業(yè)的健康發(fā)展。目前，對雞馬立克氏病尚無有效的治療藥物，主要依靠疫苗接種防治此病，故實現雞馬立克氏病的有效免疫具有重要意義。本文詳細介紹雞馬立克氏病的特點及綜合防控措施，系統(tǒng)剖析雞胚免疫技術的優(yōu)缺點及其在各個領域的應用情況，旨在為相關從業(yè)人員提供參考。

關鍵詞：雞；馬立克氏??；免疫

中圖分類號：S858.31? ? ?文獻標識碼：A文章編號：1673-1085（2023）07-0070-05

雞馬立克氏病是一種傳染性極強的淋巴組織增生性腫瘤病，對禽類健康危害較大，發(fā)病癥狀多樣，急性型MD（神經或腫瘤）控制不好會愈發(fā)嚴重，發(fā)病率、死亡率極高，給養(yǎng)雞業(yè)帶來巨大經濟損失。目前，對雞馬立克氏病沒有針對性的治療藥物，依靠疫苗接種能有效控制此病，因此雞馬立克氏病成為第一個可以通過疫苗預防的致癌性疾病。同傳統(tǒng)的雛雞免疫接種相比，采用雞馬立克氏病疫苗單獨或聯(lián)合胚胎免疫接種17～18日齡的雞胚，能夠填補免疫空白期，免疫效果要好于雛雞免疫，是控制雞馬立克氏病早期感染的有效方法之一。這種方法被國內外廣泛認可，成為防治馬立克氏病的新途徑。本文就雞馬立克氏病的概述、綜合防控措施、雞胚免疫技術及應用進行闡述，旨在降低馬立克氏病的發(fā)病率，保證養(yǎng)雞企業(yè)及養(yǎng)殖戶的經濟效益。

1 雞馬立克氏病概述

MD是由雞馬立克氏病病毒（Mareks disease virus，MDV）感染引發(fā)的一種傳染性高的T細胞增生性腫瘤性疾病，MDV會不斷攻擊T細胞、B細胞、巨噬細胞等免疫細胞[1]，造成免疫抑制和T細胞淋巴瘤，進而引起機體繼發(fā)感染多種疾病。本病主要感染雞，普通火雞、山雞、鵪鶉、越雉等禽類雖可感染，但罕見發(fā)病。不同品種的雞均可感染，但易感性、感染率有差異，我國地方品種雞易感性較高，來航雞的易感性較其他品種的雞低，肉雞發(fā)病率高于蛋雞。雞的易感性不受日齡限制，但日齡越大，易感性越低，臨床多發(fā)生于5～8周齡的雞，發(fā)病高峰多見于12～30周齡的雞；另外，感染日齡不同，雞發(fā)病程度也有很大不同，2周齡的感染雞發(fā)病率較高，成年雞感染后一般只帶毒、排毒而不發(fā)病，因此控制或預防早期感染對防止雞馬立克氏病的發(fā)生至關重要。

典型MD主要侵害神經系統(tǒng)，死亡率較低。常見的急性型MD主要侵害雞內臟器官等，淋巴細胞增生產生淋巴瘤，一般發(fā)病率在10%～15%，流行時高達70%，死亡率會迅速增加。臨床上，發(fā)病雞表現出食欲不振、呼吸困難、抑郁，腿、翅膀和脖子發(fā)生癱瘓，最后嚴重者死亡。病理剖檢可見內臟器官、肌肉、皮膚上有單個或多個大小不等的灰白色或黃色瘤樣結節(jié)性病灶；此外，還觀察到脾臟、肝臟、腎臟和坐骨神經腫大。本病具有高度接觸傳染性，一旦養(yǎng)殖場雞群發(fā)病，患病雞和帶毒雞是主要傳染源，其次是病雞和帶毒雞的分泌物、排泄物及其污染的飼料、飲水等，這些都可能成為污染源。

雞馬立克氏病的病毒（MDV）是一種細胞結合性皰疹病毒，主要存在于細胞核，少量存在于細胞外間隙或細胞漿中[2]。MDV以無囊膜的裸病毒和有囊膜的完全病毒兩種形式存在，裸病毒對外界抵抗力差，有囊膜的病毒則具有較強的適應力和抵抗力。MDV分為弱毒、強毒、超強毒和特超強毒4種不同毒力的致病毒株，其引起雞的腫瘤率以及死亡率逐漸增強。研究顯示，石夢雅[3]對2017～2019年間廣西地區(qū)的養(yǎng)殖場MDV進行分子流行病學調查和基因序列分析，結果顯示，所分離的毒株主要以中國強毒分離株為主，有中國超強或特超強毒株。MDV毒株毒力的增強，是導致臨床免疫失敗的原因之一。

2? 雞馬立克氏病的綜合防控措施

在國內，當前對雞馬立克氏病沒有針對性的治療藥物，采用疫苗接種已成為預防該病最有效的方式。目前，已知國內廣泛使用的馬立克氏病活疫苗主要包括雞馬立克氏病CA126細胞活疫苗、CA126+SB1雙價細胞活疫苗、Rismavac液氮苗、Rismavac+CA126雙價細胞活疫苗以及馬立克氏病-傳染性法氏囊病二聯(lián)多價活疫苗等[4]。近幾年通過廣泛的疫苗接種，雞馬立克氏病很少發(fā)生，整體控制較好。

為避免雞馬立克氏病在養(yǎng)殖場內發(fā)生，除接種疫苗外，做好雞群的生物安全防控工作和加強綜合防疫措施十分重要。對外，避免“引進”患病雞或帶毒雞，堅持自繁自養(yǎng)；對內，一旦發(fā)現病雞，應及時做好隔離、診斷、撲殺工作以及凈化雞群，對可能污染的環(huán)境及物品進行消毒與無害化處理，做好區(qū)域防疫管理，以防雞馬立克氏病原擴散。同時，關注雞群的營養(yǎng)需求、定時對環(huán)境和用具消毒以及采取其他嚴格的管理措施。

3 雞胚免疫技術

3.1 雞胚免疫技術介紹

雞胚免疫技術是指對具備組織學基礎的雞胚進行疫苗免疫，一般是指在孵化末期對雞胚進行免疫，使其在出殼時或出殼后數日內獲取特異性主動免疫力的一種手段。這種免疫接種技術因能避免雛雞早期感染特定傳染病受到國內外學者的關注。通過動態(tài)監(jiān)測雞胚期母源抗體變化，對18胚齡雞胚進行疫苗接種正好可以避開母源抗體的峰值，減少母源抗體對后期免疫效果的干擾； 經過多年研究，科學家發(fā)現在雞胚孵化的中后期，18胚齡時，雞胚的免疫器官胸腺、法氏囊、脾臟基本發(fā)育成熟，可以在外界抗原刺激下建立主動免疫。這些就為雞胚免疫提供了理論基礎。目前，雞胚免疫只適合肉雞接種，臨床上雞胚免疫接種的最佳胚齡是18胚齡的雞胚，最適的接種途徑為羊膜腔接種。

傳統(tǒng)雛雞免疫方式是在育雛期進行接種，雛雞可能由于早期感染、母源抗體等多種原因，導致免疫失敗，存在一定時間的免疫空白期。而雞胚免疫使雛雞一出生就獲得特異性抵抗力，填補了免疫空白期，并且有免疫效果顯著的優(yōu)點。馬巍陵等[5]研究表明，雞胚免疫與雛雞免疫相比，提高了血清中抗體滴度，提高了與抗病毒能力相關的細胞因子IFN-γ水平及與誘導活化免疫細胞相關的IL-4水平，確實有效提高了MD疫苗的免疫效果，使MD發(fā)病率更低。相比于傳統(tǒng)的雛雞免疫接種技術（喂食、飲水、氣霧、滴鼻、注射等），雞胚免疫接種具有填補免疫空白期、批量化、節(jié)省人力和物力的優(yōu)點。

雞胚免疫接種技術已經在30多個國家得到廣泛應用，在美國已有80%肉雞采用雞胚免疫方式預防馬立克氏病，因技術普及較晚，我國只有部分大型養(yǎng)殖企業(yè)采用雞胚免疫馬立克氏病疫苗，占比相對較少。隨著科技快速發(fā)展，國內外均已研發(fā)出用于雞胚接種的大型自動化設備，目前，意大利TKA公司生產的臺式半自動雞胚接種機與全自動接種收獲設備，經試驗驗證與人工接種和收獲相比具有較大優(yōu)勢，在國外受歡迎程度較高，能較好滿足大型養(yǎng)殖企業(yè)的免疫需求，國外的凱榮、賽諾菲巴斯德等以及國內的溫氏集團、新希望集團、立華牧業(yè)等大型養(yǎng)殖企業(yè)已采用雞胚免疫技術的機械化操作，可實現高通量接種，大大減少了人力、物力的耗費；但是自動化雞胚接種設備價格昂貴，大部分的養(yǎng)殖場無法承擔高昂成本，仍采用人工雞胚免疫方式。

3.2 雞胚免疫接種的優(yōu)勢及缺點

3.2.1 雞胚免疫接種的優(yōu)勢 首先，雞胚免疫能有效填補免疫空白期，使雛雞在一出生或出生后很短的一段時間內獲得主動免疫，極大填補了傳統(tǒng)免疫給雛雞帶來的空白期，降低病毒感染的概率[6]；其次，雞胚免疫效果均一。雞胚的組織細胞分化程度低，對病毒具有較高的易感性，病毒繁殖量高，能夠激發(fā)自主免疫。給雞接種弱毒疫苗，疫苗病毒進入機體自我復制、迅速繁殖，不斷刺激雞群體內的淋巴細胞與白細胞等免疫細胞產生特異性免疫活性物質，從而建立一個自主免疫過程。多項試驗研究表明，在雞胚免疫后，免疫接種組在疫苗保護效力方面、抗體水平差異方面、試驗攻毒保護率方面均高于未接種的對照組，這說明在雞胚免疫后，出生的雛雞體內已獲得抗體[7-8]。

3.2.2 雞胚免疫接種的缺點 首先，若接種的雞胚質量較差或操作方法不當，致使部分細菌、衣原體或病毒能夠從感染的母雞傳染給雞胚；其次，雞胚免疫局限性較大。目前，受限于國內外技術發(fā)展瓶頸，雞胚疫苗在市場中的種類較少，可防控的疾病有限；最后，因不同品種品系間的差異、宿主遺傳性和馬立克氏疫苗保護效力等方面的差異，免疫失敗的現象時有發(fā)生。據統(tǒng)計，在世界范圍內已獲得免疫的雞群中，雞馬立克氏病仍有10%左右的發(fā)病率。對于亞型眾多、變異較快的病毒，一種疫苗很難保證在疫期“從頭到尾”的保護雞群，由此可見，不能單純靠疫苗免疫來保障雞群的健康[6，9]。

3.3 雞胚免疫技術的應用

目前，雞胚的免疫接種技術隨著長期廣泛的應用而得到不斷發(fā)展，并日益成熟，除疫苗領域外，雞胚免疫也被嘗試用于疾病防控、營養(yǎng)補充等多個領域。

3.3.1 疫苗領域 目前，市場上安全可行的雞胚免疫疫苗是法氏囊、馬立克氏病疫苗，接種后不影響雞胚的孵化率和出雛率，而且可以使雛雞同時獲得這2種疾病的免疫力，降低發(fā)病概率。有專家認為雞胚免疫疫苗是否合格的一個重要決定因素就是疫苗毒株對雞胚的毒力。古飛霞等[8]曾嘗試將多種商品化新城疫（ND）弱毒疫苗分別接種不同品種的18胚齡雞胚，發(fā)現商品化ND疫苗對18胚齡雞胚均有較強的致病性，顯著降低了雞胚的孵化率和健雛率，不能用于雞胚免疫。但接種構建的重組疫苗會降低對雞胚的致病性，增強保護效果。Dilaveris 等[10]將新城疫疫苗 NDW與可表達細胞因子IFN-γ的質粒共同接種18胚齡SPF雞胚后，可顯著降低 NDW 對雞胚的致病性。

STEEL 等[11]將表達新城疫和禽流感免疫源性的重組疫苗接種于18胚齡雞胚，對NDV和H5N1保護效果分別達到了90%、80%。只要疫苗合適，雞胚接種免疫完全可行。黨海斌等[12]將柔嫩艾美耳球蟲和堆形艾美耳球蟲接種18胚齡雞胚，結果顯示球蟲疫苗單一或混合接種都能誘導機體產生較強的免疫保護率。另外，未來隨著分子生物學和免疫學技術的發(fā)展，含有佐劑的滅活病毒疫苗、亞單位疫苗、重組疫苗、DNA疫苗及非病毒雞胚免疫疫苗等有望成為雞胚接種試驗的重要工具[13]。尤其是抵抗多數或全部疫病的多價雞胚接種疫苗以及對雞胚安全的重組或亞單位疫苗可能會用于家禽生產，將大大提高免疫效率。

3.3.2 其他領域 雞胚免疫可以促進雛雞免疫系統(tǒng)的發(fā)育和成熟。李福生等[14]研究發(fā)現，用新城疫F系和I系疫苗氣室接種8胚齡雞胚，發(fā)現雞胚不致死且能促進雞胚免疫器官的發(fā)育成熟。國外學者[15]通過在雞胚中接種空腸彎曲桿菌外膜囊泡，結果發(fā)現接種后的雞群對胃腸炎有一定的抵抗效果。此外，對14胚齡雞胚羊膜腔注射葡萄糖、果糖或核糖等糖類化合物，可以給雞胚增加營養(yǎng)，顯著促進雞胚的后期發(fā)育，并且有助于提高體液免疫和細胞免疫功能和效率[16]。另外，隨著雞胚接種技術的發(fā)展，也會擴散應用到其他領域，如采用雞胚接種技術還可以注射細胞素、可溶性佐劑和競爭性排斥的微生態(tài)制劑等，可以有效調節(jié)雞體的免疫力，促進雛雞腸道發(fā)育，大大提高其生長性能。

4 小結

雞馬立克氏病危害嚴重、傳播能力強，給我國雞養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的損失。雞胚免疫技術作為當前熱門的預防雞馬立克氏病的一種有效技術手段，優(yōu)勢明顯且在各個領域得以廣泛應用，但不能單純靠疫苗免疫來保障雞群的健康。養(yǎng)雞行業(yè)的從業(yè)者們應加強疾病的防控，以預防為主、治療為輔有效確保雞群的健康，進而推動我國家禽產業(yè)的健康發(fā)展。

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Application of Chicken Embryo Immunization Technique for Chicken Malik's Disease Vaccine

FENG Yang， GUAN Xiuchun， GE Zhongkai， ZHOU Zhonghao， DING Shulong

（Qingdao Yebio Engineering Co.， Qingdao? 266108，Shandong ，China）

Abstract：? Embryo immunization technology refers to the immunization of chicken embryos at the late stage of hatching so that the chicks are actively immunized from birth. Chicken Marek's disease （MD） is a neoplastic disease that can cause lymphatic hyperplasia， tumor lesions in various organs and skin， etc. in chickens. In recent years， with the development of the chicken breeding industry on a large scale and intensification， and the increasing density of chicken rearing， the probability of chicken MD has been rising year by year. In addition， the disease is widely prevalent in the world， highly contagious and harmful， and Newcastle disease and infectious bursal disease are listed as the three major epidemics affecting the healthy development of the chicken industry， seriously affecting the healthy development of China's chicken breeding industry. At present， there is no effective treatment drug for chicken MD， mainly relying on vaccination to prevent and control the disease， so it is important to achieve effective immunization of chicken MD.Here，this research introduced the disease characteristics and preventive measures of chicken MD. then， the research introduced the advantages and limitation of in－ovo vaccination and its application， aiming to provide reference imformations for relevant practitioners.

Keywords：? Marek's disease; Breeding industry; Immunity