靳 藝，黎俊宏，石飛云

（常州市疾病預(yù)防控制中心，江蘇常州 213022）

蔬菜是人們普遍食用非常有營(yíng)養(yǎng)的一種食品，然而為了控制蔬菜的各種病蟲(chóng)害，在生產(chǎn)過(guò)程中不可避免地使用了農(nóng)藥。農(nóng)藥的超劑量、超范圍使用問(wèn)題日趨嚴(yán)重，因此準(zhǔn)確快速檢測(cè)出蔬菜中農(nóng)藥殘留成為人們十分關(guān)心的問(wèn)題[1]。盲樣考核是對(duì)未知樣品進(jìn)行測(cè)定，是考核實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制、組織管理和檢測(cè)能力的重要手段，能有效衡量整個(gè)實(shí)驗(yàn)室的運(yùn)作水平和質(zhì)量控制。它是中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)（China National Accreditation Service for Conformity Assessment，CNAS）和中國(guó)計(jì)量認(rèn)證（China Metrology Accreditation，CMA）認(rèn)證評(píng)審的重要內(nèi)容，能直接反映實(shí)驗(yàn)室的儀器設(shè)備和技術(shù)素質(zhì)的實(shí)際水平和出具報(bào)告能力[2]。本次盲樣評(píng)估是受國(guó)家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心委托，上海市疾病預(yù)防控制中心組織實(shí)施的2021年國(guó)家食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)質(zhì)量評(píng)估工作。目的是檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的農(nóng)藥殘留檢測(cè)能力，提高實(shí)驗(yàn)室在農(nóng)藥檢測(cè)技術(shù)上的競(jìng)爭(zhēng)力。本研究總結(jié)了該盲樣評(píng)估試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)過(guò)程及結(jié)果分析，以期為相關(guān)試驗(yàn)提供科學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

甲醇、乙腈均為色譜純；水為高純水；烯酰嗎啉、克百威、烯酰嗎啉D6、克百威D3標(biāo)準(zhǔn)品（ANPEL）：100.0 μg·mL-1。

LCMS8060液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，島津公司。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動(dòng)相：乙腈+含0.1%乙酸和20 mmol·L-1乙酸銨水溶液；梯度洗脫；流速：0.3 mL·min-1；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：5 μL。

1.2.2 工作曲線的制備

將克百威、烯酰嗎啉標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇配制成濃度為1 μg·mL-1的混標(biāo)作為儲(chǔ)備液，將克百威D3、烯酰嗎啉D6標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇配制成濃度為1 μg·mL-1的混標(biāo)，將2種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用甲醇逐級(jí)稀釋成0.01 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.20 μg·mL-1、0.40 μg·mL-1、0.80 μg·mL-1和1.00 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。分別向6支50 mL離心管中加入約1 g基質(zhì)、4 mL上述標(biāo)準(zhǔn)系列溶液、400 μL 1 μg·mL-1同位素混標(biāo)和10 mL乙腈，以上標(biāo)準(zhǔn)系列隨樣品一起進(jìn)行預(yù)處理。標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的質(zhì)量濃度系列分別為1 μg·L-1、10 μg·L-1、20 μg·L-1、40 μg·L-1、80 μg·L-1和100 μg·L-1，內(nèi)標(biāo)濃度為10 μg·L-1[3-4]。

1.2.3 樣品制備

稱約1 g樣品放入50 mL離心管中，加入內(nèi)標(biāo)400 μL，再加入乙腈10 mL，渦旋混合均勻后，超聲提取20 min，加入2.0 g氯化鈉和8.0 g無(wú)水硫酸鈉，渦旋后5 000 r·min-1離心5 min，取其上清液，用10 mL乙腈再重復(fù)提取一次，合并兩次提取的上層有機(jī)層，取2 mL加入0.25 g無(wú)水硫酸鈉和0.4 g PSA，渦旋后5 000 r·min-1離心2 min，取上清液0.5 mL，再用0.5 mL含0.1%乙酸和20 mmoL·L-1乙酸銨水溶液混勻，用0.22 μm濾膜過(guò)濾，最后取5 μL樣進(jìn)儀器，分析[5-10]。

2 結(jié)果與分析

2.1 流動(dòng)相的選擇

試驗(yàn)以20 mmoL·L-1乙酸銨水溶液、0.1%乙酸和甲醇為流動(dòng)相，以MS色譜圖為依據(jù)，考察了不同體積比的0.1%乙酸和20 mmoL·L-1乙酸銨水溶液和甲醇對(duì)試驗(yàn)的影響，綜合考慮烯酰嗎啉和克百威出峰時(shí)間、峰形、峰面積和靈敏度等因素，選擇的流動(dòng)相梯度比例如表1 所示，最終烯酰嗎啉、克百威的保留時(shí)間分別為10.57 min和6.59 min。其中烯酰嗎啉存在異構(gòu)體，因此是雙峰，含量以峰面積之和算?？税偻拖徇V圖如圖1所示。

圖1 克百威和烯酰嗎啉色譜圖

表1 流動(dòng)相的梯度比例

2.2 質(zhì)譜參數(shù)的選擇

電噴霧離子源（ESI）；正離子模式；碰撞氣為氬氣；霧化氣流量：3 L·min-1；加熱氣流量：10 L·min-1；干燥氣流量：10 L·min-1；接口溫度：300 ℃；脫溶劑溫度：526 ℃；脫溶劑管溫度：250 ℃；加熱塊溫度：400 ℃?？税偻⑾徇推湎鄳?yīng)的內(nèi)標(biāo)克百威D3、烯酰嗎啉D6的質(zhì)譜參數(shù)通過(guò)質(zhì)譜Q3 SCAN掃描、產(chǎn)物離子掃描和碰撞能量?jī)?yōu)化，結(jié)果如表2所示。

表2 克百威和烯酰嗎啉及其內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜參數(shù)

2.3 工作曲線和檢測(cè)限

運(yùn)用優(yōu)化后的條件，對(duì)不同濃度的克百威和烯酰嗎啉采用工作曲線內(nèi)標(biāo)法定量，結(jié)果表明其線性關(guān)系良好，以3倍的噪聲比確定最低檢測(cè)限如表3所示。

表3 克百威和烯酰嗎啉工作曲線及檢出限

2.4 方法應(yīng)用

采用已建立的方法對(duì)盲樣彩椒粉進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定結(jié)果分別為0.54 mg·kg-1、6.44 mg·kg-1，盲樣真值分別為0.62 mg·kg-1、6.39 mg·kg-1，回收率分別為87.1%、100.8%，Z值分別為-0.75和0.06，考核結(jié)果均為滿意。

3 結(jié)論

為檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的農(nóng)藥殘留檢測(cè)能力，提高實(shí)驗(yàn)室在農(nóng)藥檢測(cè)技術(shù)上的競(jìng)爭(zhēng)力，參加了2021年國(guó)家食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)質(zhì)量評(píng)估工作，采用高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)彩椒粉中農(nóng)藥殘留質(zhì)量。盲樣考核結(jié)果為滿意，表明本實(shí)驗(yàn)室的農(nóng)藥殘留檢測(cè)能力很好。