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        結(jié)直腸癌組織轉(zhuǎn)錄因子E2F2、黏蛋白樣受體2水平與病人臨床病理特征的關(guān)系及對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值

        2023-07-20 00:43:56柳萬(wàn)忠龍煊鄧志剛
        臨床外科雜志 2023年6期
        關(guān)鍵詞:陽(yáng)性率淋巴結(jié)陽(yáng)性

        柳萬(wàn)忠 龍煊 鄧志剛

        結(jié)直腸癌(CRC)是最常見(jiàn)的癌癥之一[1],CRC病人的預(yù)后相對(duì)差,根治性手術(shù)后復(fù)發(fā)率仍然較高[2]。因此,需要尋找CRC預(yù)后相關(guān)基因,為CRC病人的預(yù)后判斷提供依據(jù)。轉(zhuǎn)錄因子E2F2在控制細(xì)胞增殖和癌基因介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化中發(fā)揮重要作用[3]。Zhou等[4]報(bào)道,E2F2可能是卵巢癌的特異性治療靶點(diǎn)候選。有研究表明,E2F2和B-Myb在CRC細(xì)胞中呈正相關(guān)表達(dá),并相互影響,二者之間微妙的相互協(xié)作和相互交叉調(diào)節(jié)導(dǎo)致CRC的惡化[5]。黏蛋白樣受體2(EMR2)在早期食管癌腫瘤中過(guò)表達(dá),被證明與疾病侵襲性有關(guān)[6-7]。本研究檢測(cè)CRC組織和癌旁組織E2F2、EMR2mRNA表達(dá),分析二者表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系并判斷其對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值。

        對(duì)象與方法

        一、對(duì)象

        2018年1月~2020年12月間住院手術(shù)的88例CRC病人術(shù)中切除的CRC組織標(biāo)本及癌旁組織標(biāo)本,年齡44~74歲,平均年齡(59.14±7.79)歲。收集整理CRC病人臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)經(jīng)影像學(xué)、實(shí)驗(yàn)室檢查確診,且符合《惡性腫瘤TNM分期圖譜》[8];(2)本人或家屬完全了解研究?jī)?nèi)容并能配合研究;(3)隨訪(fǎng)資料齊全。排除標(biāo)準(zhǔn):其他惡性腫瘤;心、肺、肝、腎或其他臟器功能?chē)?yán)重?fù)p傷;自身免疫性疾病。

        二、方法

        1.E2F2mRNA、EMR2mRNA表達(dá)水平檢測(cè):術(shù)中CRC組織和癌旁組織于液氮中保存,迅速轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱保存,待測(cè)。按照Trizol試劑(上海酶聯(lián))操作步驟分離提取組織總RNA,按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(文韌生物)操作步驟逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,采用ABI 7500型qRT-PCR儀(美國(guó)ABI)檢測(cè)組織中E2F2mRNA、EMR2mRNA相對(duì)表達(dá)水平,內(nèi)參為β-actin,引物經(jīng)設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)后由上海生工生物工程有限公司合成。采用2-ΔΔCt算法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。

        2.鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化氫酶連結(jié)法(SP法)檢測(cè)CRC組織和癌旁組織E2F2、EMR2蛋白表達(dá):CRC組織及相應(yīng)癌旁正常組織進(jìn)行5 μm連續(xù)切片,免疫組織化學(xué)試劑盒檢測(cè)E2F2、EMR2蛋白表達(dá)。采用半定量方法,<3分陰性表達(dá),≥3分陽(yáng)性表達(dá)。

        三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

        結(jié)果

        1.CRC組織和癌旁組織E2F2、EMR2陽(yáng)性率比較:與癌旁組織相比,CRC組織中E2F2、EMR2陽(yáng)性率明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1,圖1,圖2。

        圖1 E2F2在CRC組織及癌旁組織中的表達(dá)(SP×200)

        圖2 EMR2在CRC組織及癌旁組織中的表達(dá)(SP×200)

        2.CRC組織E2F2、EMR2表達(dá)與病人臨床病理特征的關(guān)系:CRC組織E2F2、EMR2表達(dá)與病人TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)深度相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表2。

        表2 CRC組織E2F2、EMR2表達(dá)與病人臨床病理特征的關(guān)系(例,%)

        3.有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病人CRC組織E2F2mRNA、EMR2mRNA表達(dá)水平:與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病人相比,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病人CRC組織中E2F2mRNA、EMR2mRNA表達(dá)水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

        表3 CRC組織E2F2mRNA、EMR2mRNA表達(dá)水平

        4.E2F2mRNA、EMR2mRNA表達(dá)水平對(duì)CRC病人淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值:將CRC病人有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移作為狀態(tài)變量(1=有、0=無(wú)),將血清E2F2mRNA、EMR2mRNA水平作為檢驗(yàn)變量,繪制ROC曲線(xiàn)(圖3),結(jié)果發(fā)現(xiàn),CRC組織中E2F2mRNA、EMR2mRNA表達(dá)水平單獨(dú)及聯(lián)合診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC分別為0.782、0.844、0.877,E2F2mRNA聯(lián)合EMR2mRNA診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC高于二者分別單獨(dú)診斷,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4,圖3。

        圖3 E2F2mRNA、EMR2mRNA表達(dá)水平診斷CRC病人淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的ROC曲線(xiàn)

        表4 E2F2mRNA、EMR2mRNA表達(dá)水平對(duì)CRC病人淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值

        討論

        CRC早期治愈率較高,當(dāng)癌癥轉(zhuǎn)移到淋巴結(jié)或其他遠(yuǎn)處器官時(shí),手術(shù)治療CRC的效果變差,預(yù)后不理想[9]。研究表明,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是CRC病人預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[10]。

        E2F2通過(guò)激活ERK和AKT通路促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期進(jìn)程和運(yùn)動(dòng)性[4]。有證據(jù)表明,E2F2是重要的致癌因子,在多種腫瘤的進(jìn)展中起著促進(jìn)作用,如E2F2與卵巢癌的預(yù)后顯著相關(guān)[4]。本研究結(jié)果顯示,CRC組織中E2F2蛋白陽(yáng)性率較癌旁組織高,與Fan等[5]研究結(jié)果一致,與Ma等[11]的結(jié)果有所區(qū)別,這種差異可能是癌癥異質(zhì)性引起的。提示E2F2表達(dá)可能與CRC的發(fā)生有關(guān)。CRC組織中E2F2陽(yáng)性表達(dá)與病人淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及浸潤(rùn)深度有關(guān),提示E2F2蛋白陽(yáng)性表達(dá)可能參與調(diào)控CRC的分期狀態(tài)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,在CRC病情進(jìn)展中具有一定作用。本研究還發(fā)現(xiàn),有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的CRC病人組織中E2F2 mRNA表達(dá)水平較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病人顯著升高,ROC曲線(xiàn)顯示,E2F2 mRNA表達(dá)水平對(duì)診斷CRC病人淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有一定的價(jià)值。因此,E2F2有可能成為提示CRC發(fā)生發(fā)展的生物學(xué)標(biāo)志物,但關(guān)于其與CRC病人預(yù)后的相關(guān)性仍需進(jìn)一步研究。

        研究表明,E2F2和EMR2在肺癌中存在正相關(guān)關(guān)系,二者是同一miRNA的靶基因[12]。EMR2已被證明介導(dǎo)細(xì)胞黏附、遷移和信號(hào)傳導(dǎo)[13]。EMR2介導(dǎo)膠質(zhì)瘤侵襲,其表達(dá)增加與膠質(zhì)瘤病人生存不良之間顯著關(guān)聯(lián),且EMR2陽(yáng)性腫瘤具有更大的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移擴(kuò)散能力[14]。本研究結(jié)果顯示,CRC組織中EMR2陽(yáng)性率明顯升高,且EMR2與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及浸潤(rùn)深度相關(guān),提示EMR2表達(dá)可能與CRC的發(fā)生有關(guān),可能作為CRC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移重要生物標(biāo)志物。術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的CRC病人體內(nèi)腫瘤細(xì)胞再次呈現(xiàn)異常增殖,并向其他組織、器官侵襲轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致結(jié)直腸上皮組織及其他正常細(xì)胞破壞,刺激新生血管生成,而EMR2能夠通過(guò)N-鈣黏蛋白調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)血管生成和內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲[1,15]。進(jìn)一步分析結(jié)果顯示,與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移CRC病人相較,EMR2 mRNA表達(dá)水平在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的CRC病人組織中顯著升高;ROC曲線(xiàn)提示,EMR2 mRNA表達(dá)水平診斷CRC病人淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC為0.844,提示以EMR2為評(píng)估CRC病人淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否的指標(biāo)具有一定可行性。此外,本研究還顯示,E2F2 mRNA和EMR2 mRNA聯(lián)合診斷CRC病人淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC為0.877,高于二者單獨(dú)診斷,提示同時(shí)檢測(cè)E2F2、EMR2表達(dá)可能對(duì)評(píng)估CRC病人是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移效果更好。

        綜上所述,E2F2、EMR2與在CRC組織中陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織,與病人TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)深度相關(guān),二者聯(lián)合對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有一定診斷價(jià)值。但本研究納入病例較少,關(guān)于E2F2、EMR2如何在CRC進(jìn)展中發(fā)揮作用,后續(xù)將擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步開(kāi)展研究。

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