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        結直腸癌組織轉錄因子E2F2、黏蛋白樣受體2水平與病人臨床病理特征的關系及對淋巴結轉移的診斷價值

        2023-07-20 00:43:56柳萬忠龍煊鄧志剛
        臨床外科雜志 2023年6期
        關鍵詞:陽性率淋巴結陽性

        柳萬忠 龍煊 鄧志剛

        結直腸癌(CRC)是最常見的癌癥之一[1],CRC病人的預后相對差,根治性手術后復發(fā)率仍然較高[2]。因此,需要尋找CRC預后相關基因,為CRC病人的預后判斷提供依據(jù)。轉錄因子E2F2在控制細胞增殖和癌基因介導的轉化中發(fā)揮重要作用[3]。Zhou等[4]報道,E2F2可能是卵巢癌的特異性治療靶點候選。有研究表明,E2F2和B-Myb在CRC細胞中呈正相關表達,并相互影響,二者之間微妙的相互協(xié)作和相互交叉調節(jié)導致CRC的惡化[5]。黏蛋白樣受體2(EMR2)在早期食管癌腫瘤中過表達,被證明與疾病侵襲性有關[6-7]。本研究檢測CRC組織和癌旁組織E2F2、EMR2mRNA表達,分析二者表達與臨床病理特征的關系并判斷其對淋巴結轉移的診斷價值。

        對象與方法

        一、對象

        2018年1月~2020年12月間住院手術的88例CRC病人術中切除的CRC組織標本及癌旁組織標本,年齡44~74歲,平均年齡(59.14±7.79)歲。收集整理CRC病人臨床資料。納入標準:(1)經(jīng)影像學、實驗室檢查確診,且符合《惡性腫瘤TNM分期圖譜》[8];(2)本人或家屬完全了解研究內容并能配合研究;(3)隨訪資料齊全。排除標準:其他惡性腫瘤;心、肺、肝、腎或其他臟器功能嚴重損傷;自身免疫性疾病。

        二、方法

        1.E2F2mRNA、EMR2mRNA表達水平檢測:術中CRC組織和癌旁組織于液氮中保存,迅速轉移至-80 ℃冰箱保存,待測。按照Trizol試劑(上海酶聯(lián))操作步驟分離提取組織總RNA,按逆轉錄試劑盒(文韌生物)操作步驟逆轉錄合成cDNA,采用ABI 7500型qRT-PCR儀(美國ABI)檢測組織中E2F2mRNA、EMR2mRNA相對表達水平,內參為β-actin,引物經(jīng)設計軟件設計后由上海生工生物工程有限公司合成。采用2-ΔΔCt算法計算相對表達量。

        2.鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化氫酶連結法(SP法)檢測CRC組織和癌旁組織E2F2、EMR2蛋白表達:CRC組織及相應癌旁正常組織進行5 μm連續(xù)切片,免疫組織化學試劑盒檢測E2F2、EMR2蛋白表達。采用半定量方法,<3分陰性表達,≥3分陽性表達。

        三、統(tǒng)計學分析

        結果

        1.CRC組織和癌旁組織E2F2、EMR2陽性率比較:與癌旁組織相比,CRC組織中E2F2、EMR2陽性率明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1,圖1,圖2。

        圖1 E2F2在CRC組織及癌旁組織中的表達(SP×200)

        圖2 EMR2在CRC組織及癌旁組織中的表達(SP×200)

        2.CRC組織E2F2、EMR2表達與病人臨床病理特征的關系:CRC組織E2F2、EMR2表達與病人TNM分期、淋巴結轉移及浸潤深度相關(P<0.05)。見表2。

        表2 CRC組織E2F2、EMR2表達與病人臨床病理特征的關系(例,%)

        3.有無淋巴結轉移病人CRC組織E2F2mRNA、EMR2mRNA表達水平:與無淋巴結轉移病人相比,有淋巴結轉移病人CRC組織中E2F2mRNA、EMR2mRNA表達水平明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

        表3 CRC組織E2F2mRNA、EMR2mRNA表達水平

        4.E2F2mRNA、EMR2mRNA表達水平對CRC病人淋巴結轉移的診斷價值:將CRC病人有無淋巴結轉移作為狀態(tài)變量(1=有、0=無),將血清E2F2mRNA、EMR2mRNA水平作為檢驗變量,繪制ROC曲線(圖3),結果發(fā)現(xiàn),CRC組織中E2F2mRNA、EMR2mRNA表達水平單獨及聯(lián)合診斷淋巴結轉移的AUC分別為0.782、0.844、0.877,E2F2mRNA聯(lián)合EMR2mRNA診斷淋巴結轉移的AUC高于二者分別單獨診斷,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表4,圖3。

        圖3 E2F2mRNA、EMR2mRNA表達水平診斷CRC病人淋巴結轉移的ROC曲線

        表4 E2F2mRNA、EMR2mRNA表達水平對CRC病人淋巴結轉移的診斷價值

        討論

        CRC早期治愈率較高,當癌癥轉移到淋巴結或其他遠處器官時,手術治療CRC的效果變差,預后不理想[9]。研究表明,淋巴結轉移是CRC病人預后的獨立危險因素[10]。

        E2F2通過激活ERK和AKT通路促進癌細胞增殖、細胞周期進程和運動性[4]。有證據(jù)表明,E2F2是重要的致癌因子,在多種腫瘤的進展中起著促進作用,如E2F2與卵巢癌的預后顯著相關[4]。本研究結果顯示,CRC組織中E2F2蛋白陽性率較癌旁組織高,與Fan等[5]研究結果一致,與Ma等[11]的結果有所區(qū)別,這種差異可能是癌癥異質性引起的。提示E2F2表達可能與CRC的發(fā)生有關。CRC組織中E2F2陽性表達與病人淋巴結轉移、TNM分期及浸潤深度有關,提示E2F2蛋白陽性表達可能參與調控CRC的分期狀態(tài)及淋巴結轉移,在CRC病情進展中具有一定作用。本研究還發(fā)現(xiàn),有淋巴結轉移的CRC病人組織中E2F2 mRNA表達水平較無淋巴結轉移病人顯著升高,ROC曲線顯示,E2F2 mRNA表達水平對診斷CRC病人淋巴結轉移具有一定的價值。因此,E2F2有可能成為提示CRC發(fā)生發(fā)展的生物學標志物,但關于其與CRC病人預后的相關性仍需進一步研究。

        研究表明,E2F2和EMR2在肺癌中存在正相關關系,二者是同一miRNA的靶基因[12]。EMR2已被證明介導細胞黏附、遷移和信號傳導[13]。EMR2介導膠質瘤侵襲,其表達增加與膠質瘤病人生存不良之間顯著關聯(lián),且EMR2陽性腫瘤具有更大的浸潤和轉移擴散能力[14]。本研究結果顯示,CRC組織中EMR2陽性率明顯升高,且EMR2與淋巴結轉移、TNM分期及浸潤深度相關,提示EMR2表達可能與CRC的發(fā)生有關,可能作為CRC淋巴結轉移重要生物標志物。術后腫瘤復發(fā)轉移的CRC病人體內腫瘤細胞再次呈現(xiàn)異常增殖,并向其他組織、器官侵襲轉移,導致結直腸上皮組織及其他正常細胞破壞,刺激新生血管生成,而EMR2能夠通過N-鈣黏蛋白調節(jié)基質金屬蛋白酶-9的表達來調節(jié)血管生成和內皮細胞的增殖、遷移和侵襲[1,15]。進一步分析結果顯示,與無淋巴結轉移CRC病人相較,EMR2 mRNA表達水平在有淋巴結轉移的CRC病人組織中顯著升高;ROC曲線提示,EMR2 mRNA表達水平診斷CRC病人淋巴結轉移的AUC為0.844,提示以EMR2為評估CRC病人淋巴結轉移與否的指標具有一定可行性。此外,本研究還顯示,E2F2 mRNA和EMR2 mRNA聯(lián)合診斷CRC病人淋巴結轉移的AUC為0.877,高于二者單獨診斷,提示同時檢測E2F2、EMR2表達可能對評估CRC病人是否發(fā)生淋巴結轉移效果更好。

        綜上所述,E2F2、EMR2與在CRC組織中陽性表達率高于癌旁組織,與病人TNM分期、淋巴結轉移及浸潤深度相關,二者聯(lián)合對淋巴結轉移具有一定診斷價值。但本研究納入病例較少,關于E2F2、EMR2如何在CRC進展中發(fā)揮作用,后續(xù)將擴大樣本量進一步開展研究。

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