張博 劉賀 顧貴波 蘭德松 李寅博 王哲 祁思霖 姚偉 高原

摘要 通過觀察清原馬鹿發(fā)情時的表現(xiàn)，并建立動物模型，通過比較多種發(fā)情鑒定方法來確定最佳人工輸精時間。通過比較不同發(fā)情鑒定方法受胎率的差異，篩選出受胎率最高的發(fā)情鑒定方法。結(jié)果表明：母鹿拒絕公鹿爬跨后2 h為最佳輸精時間；CIDR+PMSG+A3同期發(fā)情方法的受胎率高達(dá)91.7%，是最適合清原馬鹿人工輸精的發(fā)情鑒定方法。

關(guān)鍵詞 清原馬鹿；發(fā)情鑒定；人工輸精；受胎率

中圖分類號 S 825? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A

文章編號 0517-6611（2023）12-0082-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.12.018

Estrus Identification of Qingyuan Wapiti and Its Effects on Sperm Delivery Efficiency

ZHANG Bo1，LIU He1，GU Gui-bo2 et al

（1.Centre for Modern Agriculture， Poverty Alleviation and Development in Fushun City， Fushun， Liaoning 113006;2. Centre for Agricultural Development Service in Liaoning Province， Shenyang， Liaoning? 110031）

Abstract The performance of Qingyuan Wapiti was observed during estrus，? animal models were established. Through comparing a variety of estrus identification methods， the optimum time point of artificial insemination was confirmed. By comparing the difference of conception rate under different estrus identification methods， the estrus identification method with the highest conception rate was screened out. The results showed that the optimum insemination time was 2 hours after the female deer refused to fuck with the male deer. The conception rate of CIDR+PMSG+A3 synchronized estrus reached 91.7%， CIDR+PMSG+A3 synchronized estrus method was the most suitable estrous identification method for Qingyuan Wapiti before artificial insemination.

Key words Qingyuan Wapiti;Estrus identification;Artificial insemination;Conception rate

基金項目 撫順市“撫順英才計劃”項目（FSYC202104002）。

作者簡介 張博（1987—），女，遼寧撫順人，高級獸醫(yī)師，碩士，從事動物疫病防控和畜牧技術(shù)推廣工作。*通信作者，正高級獸醫(yī)師，碩士，從事獸醫(yī)產(chǎn)科學(xué)、疫病防控與畜牧技術(shù)研究和推廣工作。

收稿日期 2022-07-06

馬鹿屬于大型鹿科動物，具有采食飼料種類廣泛、對飼養(yǎng)管理和飼養(yǎng)環(huán)境要求低以及抗病性強等特點，成年雄性馬鹿的鹿茸具有可再生的特性［1］。清原馬鹿為天山馬鹿的人工馴養(yǎng)品種，多分布于東北地區(qū)，至今有30多年的發(fā)展歷史，由于地理環(huán)境因素和飼養(yǎng)方式的改變，在外貌和鹿茸產(chǎn)量上都有所改變。清原馬鹿與純種的天山馬鹿相比具有早期豐產(chǎn)、高產(chǎn)期長、產(chǎn)仔成活率高、耐寒性強以及鹿茸枝頭大、肥嫩、雙門樁小、根細(xì)等特點［2-3］，是目前產(chǎn)茸量最高的馬鹿品種，具有較高的藥用價值和經(jīng)濟價值。

鹿類養(yǎng)殖作為我國畜牧業(yè)的一部分，其養(yǎng)殖技術(shù)與豬、牛、羊、禽類等傳統(tǒng)家畜相比存在很大差距，對馬鹿尤其是清原馬鹿的研究存在基礎(chǔ)薄弱、技術(shù)能力不足等問題［4］。筆者通過觀察清原馬鹿發(fā)情時的表現(xiàn)，并建立動物模型，采用多種發(fā)情鑒定方法來確定最佳人工輸精時間，通過比較不同發(fā)情鑒定方法的受胎率，篩選出受胎率最高的發(fā)情鑒定方法，旨在為解決清原馬鹿在實際養(yǎng)殖中受胎率浮動性較大、產(chǎn)仔率不穩(wěn)定等問題提供理論基礎(chǔ)和研究思路。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

供試動物為體態(tài)健康、繁殖性能和遺傳性能穩(wěn)定的清原馬鹿［5］，分別來自撫順市清林家庭農(nóng)場、長峰鹿場、北大林清原馬鹿場、良鄉(xiāng)鹿場、愛民鹿場，共馬鹿154頭，其中能繁母鹿144頭、公鹿10頭。

1.2 試驗材料

孕馬血清促性腺激素注射液（PMSG，購自杭州動物藥品廠，1 000 IU/支）；綿羊用孕酮陰道栓（CIDR，新西蘭進(jìn)口，孕酮含量100 mg/支）；三合激素注射液（上海第九制藥廠）；前列腺素F2α（PGF2α，成都興旺動物藥業(yè)有限公司）。

試驗精液為撫順市清原滿族自治縣清林家庭農(nóng)場種公鹿9號的凍精，公鹿3鋸后產(chǎn)茸量在24.3 kg/a以上，身體健康、無疾病，有效精子數(shù)量≥0.32億個/mL，精子活力≥50%，規(guī)格為0.25 mL/支。

1.3 發(fā)情表現(xiàn)的觀察

通過公鹿試情的方式，觀察發(fā)情初期、發(fā)情盛期、發(fā)情末期3個發(fā)情階段母鹿的表現(xiàn)和變化，包括行為表現(xiàn)、生殖器官的變化、卵巢的變化、陰道上皮細(xì)胞的變化［6］、陰道上皮細(xì)胞角質(zhì)化程度以及每個階段持續(xù)時間。

1.4 最佳輸精時間的確定

選擇長峰鹿場的馬鹿作為供試動物，觀察公鹿試情后母鹿的變化表現(xiàn)，以母鹿拒絕爬跨時間為臨界值，在母鹿拒絕爬跨后1～4 h進(jìn)行人工輸精，比較不同輸精時間下受胎率，確定最佳輸精時間。

1.5 不同發(fā)情鑒定方法對受胎率的影響分析

以自然發(fā)情本交法作為對照組，

試驗組采用其他發(fā)情鑒定方法，通過比較對照組和各試驗組的受胎率，分析不同發(fā)情鑒定方法對清原馬鹿人工輸精后受胎率的影響。

對照組：采用自然發(fā)情本交法，公母馬鹿的比例為1∶15。

試驗組Ⅰa：采用CIDR+PMSG 同期發(fā)情方法，即母鹿陰道埋入CIDR栓劑，12 d后麻醉取出，同時注射PMSG，60 h后進(jìn)行人工輸精。

試驗組Ⅰb：采用CIDR+PMSG+A3同期發(fā)情方法，即母鹿陰道埋入CIDR栓劑，12 d后麻醉取出，同時注射PMSG，取栓后48 h肌肉注射A3，12 h后進(jìn)行人工輸精，并再次注射A3。

試驗組Ⅰc：采用GnRH+AD+PG+GnRH+AD同期發(fā)情方法，即給母鹿注射GnRH和AD注射液，7 d后注射PG，48 h 后再次注射GnRH和AD注射液，24 h后進(jìn)行人工輸精。

試驗組Ⅰd：采用三合激素注射液注射的同期發(fā)情方法，即對母鹿肌肉注射三合激素注射液，48 h后進(jìn)行人工輸精。

試驗組Ⅰe：采用PGF2α+PMSG同期發(fā)情方法，即在母鹿前一次發(fā)情第9天注射PGF2α，次日再次注射PGF2α，第3天注射PMSG，3 d后進(jìn)行人工輸精。

試驗組 Ⅱ：采用公鹿試情法，定時驅(qū)趕公鹿到母鹿群，通過觀察母鹿對公鹿的反應(yīng)，從而判斷母鹿是否發(fā)情，按照公鹿試情后母鹿拒絕爬跨所確定的最佳輸精時間，進(jìn)行人工輸精。

試驗組Ⅲ：采用小圈公鹿試情觀察法，即將試情公鹿單獨飼養(yǎng)在小圈內(nèi)，公鹿和母鹿的圈舍相通，每天定時將公鹿放入母鹿圈舍尋找發(fā)情母鹿，通過觀察母鹿對公鹿的反應(yīng)表現(xiàn)判斷，發(fā)情母鹿從興奮轉(zhuǎn)為安靜后，對發(fā)情母鹿進(jìn)行人工輸精。

試驗組Ⅵ：采用陰道上皮細(xì)胞檢查法，即選擇試驗組Ⅱ的發(fā)情母鹿，用無菌的棉拭子在其陰道深處擦拭，獲取陰道上皮細(xì)胞，再通過蘇木精-伊紅染色法染色后在顯微鏡下觀察。根據(jù)視野中的細(xì)胞形態(tài)來確定母鹿的發(fā)情階段，并進(jìn)行人工輸精。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)情表現(xiàn)

通過公鹿試情后母鹿在發(fā)情初期、發(fā)情盛期、發(fā)情末期3個發(fā)情階段的行為表現(xiàn)、生殖器官變化、卵巢變化、陰道上皮細(xì)胞變化、陰道上皮細(xì)胞角質(zhì)化程度以及每個階段持續(xù)時間均不同，詳見表1。

2.2 最佳輸精時間的確定

以母鹿拒絕爬跨時間為臨界值，在拒絕爬跨后1～4 h進(jìn)行人工輸精，其受胎率有所不同。拒絕爬跨后1～3 h進(jìn)行人工輸精，其受胎率均高于60.0%，而拒絕爬跨后2 h受胎率最高（80.0%），拒絕爬跨后4 h受胎率低于50.0%（表2）。由此可見，通過公鹿試情后進(jìn)行人工輸精的最佳時間是拒絕爬跨后2 h。

2.3 不同發(fā)情鑒定方法對清原馬鹿母鹿受胎率的影響

該試驗共采用4類共8種發(fā)情鑒定方法，根據(jù)發(fā)情鑒定方法的不同，清原馬鹿通過人工輸精后的受胎率有所不同，詳見表3～4。試驗組Ⅰ采用5種同期發(fā)情方法，受胎率為76.0%；公鹿試情法（試驗組Ⅱ）受胎率為76.9%；小圈公鹿試情觀察法（試驗組Ⅲ）的受胎率為50.0%；陰道上皮細(xì)胞檢查法（試驗組Ⅵ）受胎率為73.3%。4個試驗組的受胎率由高到低依次為試驗組Ⅱ>試驗組Ⅰ>試驗組Ⅵ>試驗組Ⅲ。通過對各試驗組發(fā)情鑒定方法的比較發(fā)現(xiàn)，對照組與試驗組Ⅰ、試驗組Ⅱ、試驗組Ⅵ受胎率差異不顯著，試驗組Ⅲ與其他組差異極顯著（表3）。

由表4可知，試驗組Ⅰa、Ⅰb、Ⅰc、Ⅰd、Ⅰe受胎率分別為63.6%、91.7%、90.9%、66.7%和62.5%，其中CIDR+PMSG+A3同期發(fā)情方法（試驗組Ⅰb）的受胎率最高（91.7%）。試驗組Ⅰ的受胎率由高到低依次為試驗組Ⅰb>試驗組Ⅰc>試驗組Ⅰd>試驗組Ⅰa>試驗組Ⅰe。除了試驗組Ⅰb、試驗組Ⅰc外，其他試驗Ⅰ組受胎率均低于對照組（80.0%）。試驗組Ⅰa、試驗組Ⅰd、試驗組Ⅰe與試驗組Ⅰb、試驗組Ⅰc間差異極顯著；試驗組Ⅰa、試驗組Ⅰd與試驗組Ⅰe間差異未達(dá)到顯著水平；試驗組Ⅰb與試驗組Ⅰc差異未達(dá)到顯著水平。

不同的發(fā)情鑒定方法在人工輸精后的受胎率存在一定差異，試驗組Ⅲ小圈公鹿試情觀察法的受胎率與對照組受胎率相差30.0百分點，與試驗組Ⅱ受胎率相差26.9百分點。對于同期發(fā)情鑒定方法，采用不同的方法受胎率也存在較大差異。試驗組Ib CIDR+PMSG+A3方法的受胎率高達(dá)91.7%，與試驗組Ie相比高29.2百分點。

以上結(jié)果表明，發(fā)情鑒定方法對清原馬鹿受胎率有重要的影響。在4類發(fā)情鑒定方法中，采用同期發(fā)情法后的受胎率較高，其中試驗組Ib （CIDR+PMSG+A3）的受胎率最高。

3 討論

近年來，隨著馬鹿飼養(yǎng)繁殖技術(shù)的日趨成熟，人工輸精已成為馬鹿保種和良種推廣的重要技術(shù)手段。對于國內(nèi)養(yǎng)殖量較少的清原馬鹿，在生產(chǎn)實踐中仍然存在諸多問題，其中母鹿的發(fā)情鑒定不準(zhǔn)確是人工輸精技術(shù)推廣應(yīng)用的制約因素之一［7-8］。

（1）母畜的行為表現(xiàn)、生殖器官的變化、卵巢的變化以及陰道上皮細(xì)胞的變化是觀察家畜發(fā)情鑒定的重要依據(jù)［9］。發(fā)情鑒定準(zhǔn)確與否關(guān)系到輸精時間是否準(zhǔn)確，而確定最佳輸精時間是提高母畜受胎率的前提。通過比較不同輸精時間下的受胎率發(fā)現(xiàn)，母鹿拒絕公鹿爬跨后2 h為最佳輸精時間。由于季節(jié)、氣候等自然因素以及飼料、營養(yǎng)水平等飼養(yǎng)管理因素不同，最佳輸精時間會因排卵的提前或延后而存在個體差異。因此，在生產(chǎn)實踐中不僅要充分利用拒絕公鹿爬跨后2 h這一最佳輸精時間，而且要結(jié)合實際情況來確定最佳輸精時間。

（2）采用不同的發(fā)情鑒定方法其受胎率存在一定的差異。通過對照組與4個試驗組的對比，自然本交法、同期發(fā)情法、公鹿試情法和陰道上皮細(xì)胞檢查法母鹿受胎率有所差異但未達(dá)到顯著差異。其中，自然本交法不用人為進(jìn)行發(fā)情鑒定，受胎率為80.0%，但不利于優(yōu)良品種的利用。同期發(fā)情法不需要進(jìn)行發(fā)情鑒定，且受胎率高達(dá)76.0%。通過激素的選擇和輸精程序的設(shè)定促使母鹿的發(fā)情相對集中，合理的同期發(fā)情方法便于管理，還可以大大提高母鹿的受胎率。公鹿試情法發(fā)情鑒定的準(zhǔn)確性高，受胎率較高（76.9%），但母鹿受到的應(yīng)激刺激較強，操作過程中需要更多的人力和物力，配種人員存在一定的不安全性。陰道上皮細(xì)胞檢查法的發(fā)情鑒定結(jié)果準(zhǔn)確，受胎率較高（73.3%），但陰道上皮細(xì)胞檢查法在操作和理論上都有較高要求，且工作強度相對較大，對于普通養(yǎng)殖戶來說存在一定的困難。通過綜合比較發(fā)現(xiàn)，同期發(fā)情法更適用于人工輸精前的發(fā)情鑒定。

（3）同期發(fā)情法是人為使用激素制劑來調(diào)整家畜的發(fā)情周期，使母畜發(fā)情相對集中，在家畜的繁殖育種方面得到了廣泛應(yīng)用。同期發(fā)情法可以在較短的時間和最大的范圍內(nèi)將

精液的效率提升至最高，集中配種、集中受孕、后期集中產(chǎn)崽和集中出售，節(jié)省了很多時間和費用［10-11］。該試驗采用5種同期發(fā)情方法，母鹿受胎率均高于60.0%，其中試驗組Ib、Ic的受胎率在90.0%以上，試驗組Ib（CIDR+PMSG+A3同期發(fā)情方法）的受胎率高達(dá)91.7%。由此可見，CIDR+PMSG+A3的受胎率最高，操作相對簡單，大大節(jié)省了人力和物力，最適于人工輸精前的發(fā)情鑒定。

（4）然而，馬鹿的同期發(fā)情人工輸精的成功與否受諸多因素的制約。一是確保母鹿處于健康狀態(tài)且具有良好的繁殖能力，在配種期間所采食的飼料要合理配比；二是要保證種公鹿的精液質(zhì)量，主要取決于凍精解凍程序、輸精的時間和輸精手法；三是馬鹿同期發(fā)情人工輸精過程中馬鹿需要經(jīng)歷多次麻醉，藥物種類較多［12］。同期發(fā)情使用的激素制劑消耗較大，因此為了保證不過多損耗母鹿和藥物成本，應(yīng)熟練掌握人工輸精操作程序，盡量避免人為失誤，減少麻醉藥

和激素制劑的損耗。

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