楊紅梅,鄒 昕,馬思飛,虞 茜,許 飛,徐 立

江蘇省常州市中心血站/常州市臨床輸血重點(diǎn)專科實(shí)驗(yàn)室,江蘇常州 213000

自身免疫性溶血性貧血、腫瘤患者體內(nèi)的自身抗體和同種抗體往往同時(shí)存在且呈泛反應(yīng)現(xiàn)象。而此類患者大多數(shù)直接抗人球蛋白試驗(yàn)(簡稱直抗)呈陽性。而直抗陽性的自身抗體或輸血引起的同種抗體大部分被吸附在紅細(xì)胞上,其特異性需通過特殊細(xì)胞或吸收放散試驗(yàn)來鑒別[1-2]。因自身抗體干擾,直抗陽性患者同種抗體可能會(huì)被泛反應(yīng)現(xiàn)象所掩蓋,存在急性或遲發(fā)性輸血反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)。因此區(qū)分出同種抗體、自身抗體、類同種特異性自身抗體(類抗體)就顯得非常關(guān)鍵。類抗體是在同種抗體和自身抗體之間存在的一種兼有二者特征的抗體,其具有同種抗體特異性,又可以被相應(yīng)抗原陰性紅細(xì)胞吸收放散[3-4]。大部分類抗體伴自身抗體產(chǎn)生的患者可以有或沒有抗體對應(yīng)的抗原。本研究對直抗陽性患者采用酸放散稀釋技術(shù)對紅細(xì)胞放散液進(jìn)行抗體特異性鑒定,結(jié)果顯示該方法在類抗體鑒定中具有一定可操作性及實(shí)用性,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2020年4月至2021年12月江蘇省常州市各醫(yī)療機(jī)構(gòu)送本站輸血研究室進(jìn)行疑難配血標(biāo)本342例,其中直抗陽性109例。排除14 d內(nèi)采用抗生素或靶向藥物治療及半年有輸血史情況者,選取血清經(jīng)抗體特異性鑒定譜細(xì)胞呈泛反應(yīng)性的45例患者為研究對象。

1.2儀器與試劑 久保田KA-2200血型血清學(xué)專用離心機(jī)、貝索2020-2低速離心機(jī)、37 ℃恒溫水浴箱、長春博研FYQ型試劑卡孵育器、長春博研TD-A醫(yī)用離心機(jī)、ORTHO離心機(jī)、貝索毛細(xì)管離心機(jī)2403等?？?A/B單克隆抗體(上海血液生物;批號:20200609)、抗-D(IgM)單克隆抗體、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e(上海血液生物;部分批號為20203002、20203002、20203102、20203202、20203301)、抗-Jka(德國CEOJKAM 226-3)、抗體篩選細(xì)胞(批號:702101、702121等)、進(jìn)口譜細(xì)胞(批號:732115、732119等)、Sanquin譜細(xì)胞(批號:8000453184、8000454945等)、抗人球蛋白檢測卡(強(qiáng)生公司;批號:AHC228H、AHC234J。長春博迅;批號:20211004等)、抗人球蛋白試劑、抗-IgG、抗-C3d試劑(上海血液生物;批號分別為20205001、20215103、20215202等)、酸放散試劑(上海申型醫(yī)學(xué)科技公司;批號:20212101等)、聚凝胺試劑(珠海貝索;批號:A211203等)。

1.3方法 采用試管法進(jìn)行ABO血型鑒定、Rh血型抗原檢測、抗-IgG及抗-C3d試驗(yàn);采用酸放散稀釋法對患者血清和紅細(xì)胞吸附的抗體進(jìn)行特異性鑒定試驗(yàn)。對于呈泛反應(yīng)性的放散液進(jìn)行稀釋,尋找合適稀釋倍數(shù)(放散液稀釋后出現(xiàn)反應(yīng)格局),再次進(jìn)行抗體特異性鑒定。凝集強(qiáng)度判讀以抗人球蛋白檢測卡試劑說明書為準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2.145例患者各血型、直抗、Rh分型及抗體特異性試驗(yàn)檢測結(jié)果 45例患者各血型比例分別為A型48.9%(22/45)、B型17.8%(8/45)、O型26.7%(12/45)、AB型6.7%(3/45);Rh血型抗原分型比例分別為CCee 51.1%(23/45)、CcEe 33.3%(15/45)、Ccee 8.9%(4/45)、ccEE 6.7%(3/45)。45例患者紅細(xì)胞酸放散原液中檢出1例抗-Jka抗體,1例抗-E同種抗體,1例類抗-C抗體,3例為陰性,其他(39例)酸放散液均呈1～4個(gè)“+”泛反應(yīng)。通過酸放散稀釋技術(shù)對39例患者紅細(xì)胞放散液鑒定,檢出類抗體伴自身抗體14例,無特異性自身抗體25例。

2.2酸放散稀釋法檢出類抗體結(jié)果 經(jīng)酸放散液稀釋法明確類抗體比例為35.9%(14/39)。特異性檢出標(biāo)本中酸放散液反應(yīng)強(qiáng)度多為4個(gè)“+”,占64.3%(9/14)。Rh表型多為CCDee,占71.4%(10/14)。類抗體以抗-C和抗-e為主,分別占35.7%(5/14)和50.0%(7/14)。見表1。

表1 酸放散稀釋法檢出類自身同種抗體結(jié)果

2.3酸放散稀釋法試驗(yàn)條件 從表1中可以看出患者酸放散原液的反應(yīng)強(qiáng)度與稀釋比例有關(guān):當(dāng)反應(yīng)強(qiáng)度≤2個(gè)“+”時(shí),稀釋比例為1∶2或1∶4;當(dāng)反應(yīng)強(qiáng)度>2個(gè)“+”時(shí),稀釋比例在1∶100～1∶4。實(shí)際操作時(shí)可從1∶32～1∶16進(jìn)行稀釋比例的探索。

3 討 論

由于獻(xiàn)血者與受血者之間抗原遺傳的多樣性,導(dǎo)致受血者對紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板抗原同種免疫。具有臨床意義的抗原誘導(dǎo)產(chǎn)生IgG同種抗體涉及Rh、Kell、Duffy、Kidd和 MNS血型系統(tǒng)。這些抗體在37 ℃時(shí)發(fā)生反應(yīng),并導(dǎo)致輸血患者溶血。紅細(xì)胞同種抗體的頻率和特異性因人群遺傳多樣性而異,一般人群中有0.3%～2.0%出現(xiàn)同種抗體[5-8]。交叉配血不合的原因很多,在輸血前血液檢測中不規(guī)則抗體篩選陽性是導(dǎo)致配血不合的常見原因,只有準(zhǔn)確鑒定出血清及放散液中存在的抗體,篩選出相應(yīng)抗原陰性的血液才能保證輸血安全、有效。但經(jīng)常會(huì)碰到泛反應(yīng)(凝集)現(xiàn)象導(dǎo)致無法區(qū)分有意義的同種抗體和其他自身抗體,使配血困難。在具有不明同種抗體的患者體內(nèi)普遍存在紅細(xì)胞同種抗體和溶血性輸血反應(yīng),提示存在泛反應(yīng)或自身抗體的情況下,應(yīng)采用特定的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)來鑒定同種抗體,以提高輸血安全性。因同種異體免疫與接種劑量、免疫原性和臨床治療等因素相關(guān),同時(shí)自身抗體會(huì)產(chǎn)生掩蔽同種抗體的效應(yīng),導(dǎo)致特異性抗體無法被檢測出來。而稀釋技術(shù)能排除自身抗體干擾,通過類同種異體抗體的特異性來鑒別自身抗體[9-11]。因此,在試驗(yàn)過程中尋找酸放散液合適的稀釋倍數(shù)至關(guān)重要。本研究優(yōu)化試驗(yàn)過程,大膽嘗試使用抗體篩選細(xì)胞對不同稀釋倍數(shù)的酸放散液進(jìn)行抗體篩查,尋找稀釋度,再用此稀釋倍數(shù)的酸放散液進(jìn)行抗體鑒定。此法不僅可以節(jié)約酸放散液和縮短試驗(yàn)時(shí)間,并且在一定程度上根據(jù)抗體篩選細(xì)胞格局表預(yù)判試驗(yàn)結(jié)果,建立更快、更安全的臨床輸血策略。

本研究在試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn),類抗體伴自身抗體現(xiàn)象比較常見,主要集中在Rh血型系統(tǒng)。目前本實(shí)驗(yàn)室未發(fā)現(xiàn)Kidd、Duffy等血型系統(tǒng)的類抗體現(xiàn)象。類抗體產(chǎn)生原因可能有:(1)在自身抗體存在的情況下,同種抗體的非特異性吸附所致;(2)自身免疫和同種免疫同時(shí)發(fā)生;(3)與B細(xì)胞調(diào)節(jié)失調(diào)有關(guān),如自身免疫性疾病;(4)藥物與某些自身抗體的產(chǎn)生有關(guān),可能是由于藥物相關(guān)的免疫機(jī)制的生化修飾作用所致。對于存在類抗體的患者,需結(jié)合貧血程度、基礎(chǔ)疾病、臨床癥狀、尋找對應(yīng)抗原陰性紅細(xì)胞的難易程度、后續(xù)輸血的可能性綜合考慮,謹(jǐn)慎進(jìn)行輸血決策。運(yùn)用抗體效價(jià)與酸放散技術(shù)相結(jié)合鑒定出特異性抗體后,患者選擇避開類抗體還是選擇同型抗原輸注的輸血策略及輸血效果還需后續(xù)進(jìn)一步研究。