許利軍 鄭金環(huán) 常麗云 徐 靜 宣鳳苓 侯建庫 侯 斐 陳 輝

（1.保定市畜牧工作站，河北 保定 071000；2.唐山師范學(xué)院生命科學(xué)系，河北 唐山 063000；3.河北省承德市興隆縣第一中學(xué)，河北 承德 067300；4.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河北 保定 071000；5.保定市順平縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，河北 保定 072250）

雞球蟲病主要是由艾美耳屬球蟲（Eimeriacoccidia）感染腸道，從而引起雞腹瀉甚至死亡的寄生蟲性傳染病，其中以雛雞的發(fā)病率最高[1]。臨床中常使用化學(xué)藥物防治雞球蟲病，肉、蛋中能夠檢測到藥物殘留，降低了肉、蛋產(chǎn)品的質(zhì)量和安全性，給人類健康帶來潛在的危害[2]。近年來，雞球蟲病免疫預(yù)防的研究工作取得了一定進(jìn)展，但仍存在一些問題，因此需要尋找一種有效、健康、環(huán)保的制劑防治球蟲病。

大蒜精油具有天然性、多功能性、無毒副作用和無抗藥性等優(yōu)點(diǎn)[3-4]，能夠促進(jìn)動(dòng)物采食，具有抗氧化[5-7]、抗菌消炎[8-9]、免疫調(diào)節(jié)[10-11]等功能，已廣泛應(yīng)用于畜禽疾病預(yù)防和治療[12]。研究表明，大蒜精油可治療由各種細(xì)菌、病毒和腸道寄生蟲引起的疾病[13]。王建華等[14]研究發(fā)現(xiàn)，全程使用大蒜精油的肉雞未出現(xiàn)黃白痢、球蟲、腸毒綜合征等疾病。但柯淇勻等[15]使用大蒜素治療肉雞球蟲時(shí)，發(fā)現(xiàn)10 g/kg大蒜素對(duì)減少球蟲卵囊效果并不明顯。徐靜等[16]發(fā)現(xiàn)，在0～4周齡蛋雛雞飲水中添加大蒜精油能夠有效改善十二指腸環(huán)境，促進(jìn)腸道對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，提高蛋雛雞生產(chǎn)性能。王文利等[17]指出，在產(chǎn)蛋雞飼糧中添加不同水平的大蒜素能夠增加機(jī)體抗氧化能力，提高機(jī)體的免疫力。目前，天然大蒜精油在蛋雛雞中的應(yīng)用較少，尤其是用于防治蛋雛雞腸道寄生蟲病鮮有報(bào)道。本試驗(yàn)研究飲水中添加不同劑量天然大蒜精油對(duì)蛋雛雞感染球蟲后免疫指標(biāo)的影響，以期為使用天然大蒜精油防治蛋雞球蟲病提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

柔嫩艾美耳球蟲卵囊由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)寄生蟲教研室保存；天然大蒜精油（大蒜素含量為7.5%）由達(dá)農(nóng)威生物發(fā)酵工程技術(shù)（深圳）有限公司提供；地克珠利（20170504023）由合肥中龍神力動(dòng)物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1 日齡農(nóng)大3 號(hào)節(jié)糧蛋雛雞450 只。飼養(yǎng)蛋雛雞前，雞舍經(jīng)甲醛、高錳酸鉀熏蒸消毒24 h，通風(fēng)3 d。所用飼糧應(yīng)為全價(jià)雛雞飼糧，且不含抗球蟲藥物，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇健康狀況良好、體重相近的1 日齡蛋雛雞400 只，隨機(jī)分為5 組，每組4 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20 只，即健康對(duì)照組（HC 組）、感染組（IN 組）以及天然大蒜精油低（L 組）、中（M 組）、高劑量組（H 組），大蒜精油組分別在飲水中添加0.04、0.06、0.08 mL/L大蒜精油，雛雞飼養(yǎng)至23日齡。16日齡時(shí)，經(jīng)糞便檢查確認(rèn)無球蟲感染后，除健康對(duì)照組外，其他各組分別口服柔嫩艾美爾球蟲卵囊5×104個(gè)/只。攻毒期為7 d（16～22 日齡），試驗(yàn)期共23 d（1～23日齡）。

1.3 測定指標(biāo)及方法

1.3.1 生長性能

分別于雛雞16 日齡和23 日齡8：00，試驗(yàn)雞空腹稱重，計(jì)算各組平日增重和相對(duì)增重率。

1.3.2 糞便卵囊計(jì)數(shù)

于雛雞20、21、22日齡收集糞便，按照McMaster's法計(jì)算卵囊數(shù)，以每克糞便卵囊數(shù)為單位。每天隨機(jī)取5個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集新鮮糞便，攪拌均勻，進(jìn)行卵囊計(jì)數(shù)，取2 g糞便，加58 mL飽和食鹽水?dāng)嚢杈鶆?，使?0目銅篩過濾。濾液稀釋至60 mL，使用麥?zhǔn)嫌?jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，求平均值，平均值即為當(dāng)天卵囊數(shù)。

1.3.3 免疫器官指數(shù)

分別于雛雞20、23 日齡，每組隨機(jī)選取5 只雞翅下靜脈采血，3 500 r/min分離血清，-20 ℃冷凍保存。雛雞采血后屠宰，剝離免疫器官（胸腺、脾臟和法氏囊），使用濾紙吸除血液，剝離脂肪，稱重記錄，計(jì)算免疫器官指數(shù)。

1.3.4 血清生化指標(biāo)

使用酶標(biāo)儀測定血清免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG）、尿酸（UA）、總膽固醇（TC）、白蛋白（ALB）、總蛋白（TP）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）含量。所有檢測指標(biāo)均參照試劑盒（南京建成生物工程研究所）說明書。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

數(shù)據(jù)采用Excel 2019 軟件進(jìn)行初步整理，SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，Duncan's 法進(jìn)行多重比較。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 天然大蒜精油對(duì)蛋雛雞生長性能的影響（見表2）

由表2 可知，HC 組、M 組蛋雛雞的末重顯著高于IN 組、L 組和H 組（P＜0.05）。HC 組蛋雛雞的平均增重顯著高于其他組（P＜0.05），M組蛋雛雞的平均增重顯著高于IN 組、L 組和H 組（P＜0.05）。HC 組蛋雛雞的相對(duì)增重率最高，L組最低。結(jié)果表明，飲水中添加0.06 mL/L天然大蒜精油能夠緩解球蟲病給雞帶來的食欲不振等癥狀，減少生長性能的降低。

2.2 天然大蒜精油對(duì)蛋雛雞球蟲卵囊排出的影響（見表3）

表3 天然大蒜精油對(duì)蛋雛雞球蟲卵囊排出的影響

由表3 可知，20～22 日齡，HC 組均未檢出卵囊。20 日齡時(shí)，HC 組、M 組和H 組克卵囊數(shù)均顯著低于IN 組和L 組（P＜0.05），L 組顯著低于IN 組（P＜0.05）。21日齡時(shí)，HC組克卵囊數(shù)顯著低于IN組、L組、M組和H 組（P＜0.05），M 組顯著低于IN 組（P＜0.05）。22 日齡時(shí)，HC組、M組和H組克卵囊數(shù)均顯著低于IN組和L組（P＜0.05）；HC組顯著低于M組（P＜0.05）。HC組、L組、M組和H組卵囊總數(shù)均顯著低于IN組（P＜0.05），HC組、M組和H組均顯著低于L組（P＜0.05），HC組、M組均顯著低于H 組（P＜0.05），HC 組顯著低于M 組（P＜0.05）。IN 組和L 組卵囊值最高，均為40；HC 組卵囊值最低，為0。

結(jié)果表明，飲水中添加0.06 mL/L天然大蒜精油能夠減少球蟲卵囊的排出。

2.3 天然大蒜精油對(duì)蛋雛雞免疫器官指數(shù)的影響（見表4）

表4 天然大蒜精油對(duì)蛋雛雞免疫器官指數(shù)的影響 單位：%

由表4 可知，20 日齡時(shí)，M 組蛋雛雞胸腺指數(shù)顯著高于HC組、IN組、L組和H組（P＜0.05）。

2.4 天然大蒜精油對(duì)蛋雛雞血清生化指標(biāo)的影響（見表5）

表5 天然大蒜精油對(duì)蛋雛雞血清生化指標(biāo)的影響

由表5 可知，20 日齡時(shí)，M 組蛋雛雞血清IgM 含量顯著高于其他組（P＜0.05），H組血清IgM顯著高于HC組、IN 組和L 組（P＜0.05）；H 組蛋雛雞血清IgA 含量顯著高于其他組（P＜0.05），L 組和M 組顯著高于HC 和IN 組（P＜0.05）；M 組蛋雛雞血清IgG 含量顯著高于其他組（P＜0.05），L 組和H 組顯著高于HC 和IN 組（P＜0.05）；IN 組、L 組蛋雛雞血清UA 含量顯著高于HC 組（P＜0.05）；HC 組和M 組蛋雛雞血清ALB 含量顯著高于IN和L組（P＜0.05）。HC組、L組、M組和H組蛋雛雞血清TP含量顯著高于IN組（P＜0.05）；HC和H組蛋雛雞血清LDL-C含量顯著低于IN組、L組和M組（P＜0.05）。

23日齡時(shí)，M組蛋雛雞血清IgA含量顯著高于其他組（P＜0.05）。

結(jié)果表明，0.06 mL/L 天然大蒜精油組蛋雛雞血清IgM、IgG 和IgA 含量均較高，具有提高機(jī)體免疫力的趨勢。

3 討論

3.1 天然大蒜精油對(duì)蛋雛雞生長性能的影響

精神萎靡、食欲不振等是蛋雛雞感染球蟲后的典型癥狀，導(dǎo)致蛋雛雞營養(yǎng)不良、體重下降。大蒜精油由于氣味特殊，能夠誘導(dǎo)蛋雛雞進(jìn)食，有效調(diào)節(jié)腸道功能，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，改善患病蛋雛雞的體況[18]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，健康對(duì)照組和0.06 mL/L天然大蒜精油組蛋雛雞的平均末重和平均增重均顯著高于其他各組，表明0.06 mL/L天然大蒜精油能夠緩解球蟲病引起的蛋雛雞食欲不振。

3.2 天然大蒜精油對(duì)蛋雛雞球蟲卵囊排出的影響

El-Latif等[19]使用1×104個(gè)艾美耳球蟲卵囊/只感染肉仔雞，在飲水中添加不同水平的大蒜素，14 d 后發(fā)現(xiàn)與其他組相比，10 g/L的大蒜素添加組卵囊總數(shù)明顯降低。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，與感染組相比，各組卵囊總數(shù)均極顯著降低，且以0.06 mL/L 天然大蒜精油組卵囊總數(shù)最低，表明飲水中添加不同濃度的天然大蒜精油能夠減少球蟲卵囊的排出，與上述試驗(yàn)結(jié)果一致?？赡苁怯捎诖笏饩湍軌蛲ㄟ^滲透到卵囊壁，對(duì)球蟲卵囊產(chǎn)生抑制或殺滅作用[20]，從而減少卵囊的排出量。

3.3 天然大蒜精油對(duì)蛋雛雞免疫器官指數(shù)的影響

脾臟、法氏囊和胸腺是蛋雛雞重要的免疫器官，是T、B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生、發(fā)育和成熟的場所，因此免疫器官的發(fā)育狀況直接影響蛋雛雞的免疫能力。研究表明，禽類免疫器官指數(shù)與機(jī)體免疫機(jī)能呈正相關(guān)關(guān)系[21]。夏倫斌等[22]指出，大蒜素可提高肉仔雞的免疫器官指數(shù)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，天然大蒜精油不同劑量組免疫器官指數(shù)均高于感染組，表明天然大蒜精油具有提高蛋雛雞免疫機(jī)能的趨勢。

3.4 天然大蒜精油對(duì)蛋雛雞血清免疫球蛋白含量的影響

血清中免疫球蛋白含量反映了蛋雛雞機(jī)體的抗病力，其中IgM、IgA 和IgG 在免疫過程中發(fā)揮主要作用[23]。王文利等[17]發(fā)現(xiàn)，大蒜素能夠使畜禽機(jī)體免疫力增強(qiáng)，降低發(fā)病率。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，20日齡時(shí)，與感染組相比，添加0.06、0.08 mL/L 天然大蒜精油組蛋雛雞血清IgM、IgG和IgA含量均顯著升高；23日齡時(shí)，各組蛋雛雞血清IgM、IgG 含量差異不顯著，0.06 mL/L 天然大蒜精油組IgA 含量顯著高于其他組。本試驗(yàn)結(jié)果表明，0.06 mL/L天然大蒜精油能使蛋雛雞機(jī)體特異性抗體含量升高，提高蛋雛雞免疫力。

3.5 天然大蒜精油對(duì)蛋雛雞血清生化指標(biāo)的影響

UA 含量反映了蛋雛雞對(duì)蛋白質(zhì)吸收利用的狀況，UA 含量較低時(shí)，雞體內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定[24]，UA 含量升高則與腎小管功能障礙有關(guān)[25]。蛋雛雞感染球蟲后，由于腎小管功能出現(xiàn)障礙，尿酸含量也隨之發(fā)生變化。蛋雛雞感染1×105個(gè)球蟲卵囊后第4～6 d，UA 有明顯升高，在感染第7 d 尿酸值回歸正常[26]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，20 日齡時(shí)，感染組、0.04 mL/L天然大蒜精油組蛋雛雞尿酸含量顯著升高；23 日齡時(shí)，各組UA 含量差異均不顯著，與上述研究結(jié)果相似。趙瑞平[27]使用復(fù)方中草藥（青蒿、常山、仙鶴草、白頭翁、肉桂）治療雛雞柔嫩艾美耳球蟲病，發(fā)現(xiàn)感染第8 d，各組雛雞血清ALB 和TP 含量有顯著差異。但本試驗(yàn)表明，20 日齡時(shí)，添加0.06、0.08 mL/L 天然大蒜精油組蛋雛雞血清ALB 和TP 含量高于感染組，23 日齡時(shí)，各組ALB 和TP 含量差異均不顯著，推測可能是由于選用雛雞品種及藥物不同所致。蛋雛雞感染球蟲后血清ALB和TP含量下降，由于病雞腸道功能受阻，從而引起肝臟蛋白質(zhì)合成量降低。因此，本試驗(yàn)表明天然大蒜精油能夠在一定程度上修復(fù)肝臟、腎臟受損功能。

4 結(jié)論

本研究表明，飲水中添加0.06 mL/L天然大蒜精油能夠有效減少卵囊排出量，具有抗球蟲效果；促進(jìn)了免疫球蛋白的分泌和蛋白質(zhì)的產(chǎn)生及利用，提高了蛋雛雞免疫能力。