李東哲,陳 希,楊明華

(1.浙江中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院,浙江 杭州 310053;2.建德市第一人民醫(yī)院 藥劑科,浙江 淳安 311600;3.浙江省中藥研究所 糖尿病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,浙江 杭州 310023)

萎縮性胃炎合并糜爛又稱為急性胃黏膜病變,其發(fā)生機(jī)制尚不能完全闡述,可能與外源性及內(nèi)源性損傷引起的黏膜血流減少或胃黏膜防御機(jī)制被破壞而導(dǎo)致胃酸及胃蛋白酶損傷胃黏膜相關(guān)。有研究顯示[1],萎縮性胃炎合并糜爛有癌變傾向。目前西醫(yī)臨床多以保護(hù)胃黏膜、藥物抑酸等方法治療,但治療進(jìn)程緩慢,且長(zhǎng)期抑酸藥物的使用引發(fā)的不良反應(yīng)較多,臨床效果并不理想?？祻?fù)新液是蜚蠊科美洲大蠊干燥蟲體,經(jīng)乙醇提取并凝練的動(dòng)物中成藥,可化瘀破積聚、通利血脈[2]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示[3]:康復(fù)新液可有效改善局部微循環(huán),抗炎活血消腫,能夠加速受損組織的修復(fù),促進(jìn)血管及肉芽組織生長(zhǎng),并能夠促進(jìn)壞死細(xì)胞組織的脫落。目前康復(fù)新液常用于外傷所致創(chuàng)面的修復(fù)治療,對(duì)消化道類疾病的研究尚有不足。本研究應(yīng)用康復(fù)新液治療萎縮性胃炎合并糜爛大鼠,觀察其效果,望為拓展更多臨床用藥選擇提供參考。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 健康SPF級(jí)SD大鼠100只,雌雄各占一半,體質(zhì)量180～230 g,由上海上藥第一生化藥業(yè)有限公司提供(生產(chǎn)許可SCXK(滬)2021-0005),由北京百奧思科動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)(倫理批號(hào)MDL-2022-09-16-09),飼養(yǎng)于專門動(dòng)物飼養(yǎng)籠內(nèi)(雌雄分籠),籠內(nèi)通風(fēng)隔音,使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物配方喂養(yǎng),自由進(jìn)食進(jìn)水。光照及黑暗12 h交替,室內(nèi)溫度控制在(24.37±2.01)℃內(nèi),空氣的相對(duì)濕度為40%～55%,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周。本實(shí)驗(yàn)研究符合中國(guó)倫理委員會(huì)有關(guān)動(dòng)物研究指導(dǎo)原則。

1.2 主要藥物與試劑 康復(fù)新液(四川好醫(yī)生攀西藥業(yè)有限責(zé)任公司,國(guó)藥準(zhǔn)字Z51021834);水合氯醛(青島宇龍海藻有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H37022673);水楊酸鈉(四川省維克奇生物科技有限公司,規(guī)格:20 mg);精密pH試紙(上海三愛思試劑有限公司);大鼠血清胃蛋白酶原-Ⅱ(PGⅠ、PGⅡ)、胃動(dòng)素(MTL)、胃泌素(GAS )ELISA試劑盒(上海酶聯(lián)生物科技有限公司,貨號(hào)分別為mlsh0487、ml058957-1、ml059375-1)。

1.3 動(dòng)物模型建立[4-5]取20只大鼠作為空白對(duì)照組,余80只隨機(jī)分為模型對(duì)照組和治療A組、B組、C組,每組20只,按照相關(guān)文獻(xiàn)[4-5]建立萎縮性胃炎合并糜爛模型。造模后1周,各組隨機(jī)抽取1只(共計(jì)4只)大鼠行麻醉后脫臼處死,HE切片觀察病灶是否發(fā)生腺體消失、炎癥細(xì)胞壞死或浸潤(rùn)等,確定是否造模成功。

1.4 分組及給藥方式 確定建模成功后,參照《中藥藥理研究方法學(xué)》[6],根據(jù)大鼠和人體表面積折算系數(shù),計(jì)算大鼠的給藥劑量為10 mL/kg。治療A、B、C組采用康復(fù)新液灌胃,濃度分別為0.10、0.05、0.025 g/mL;空白對(duì)照組及模型對(duì)照組給予蒸餾水灌胃;各組灌胃1次/d,連續(xù)8周。末次灌胃后,使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物配方繼續(xù)飼養(yǎng)7周。

1.5 觀察指標(biāo)及檢驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)期間,每3周對(duì)大鼠的體重變化、飲食情況、活動(dòng)狀態(tài)等進(jìn)行觀察及測(cè)量。飼養(yǎng)15周后,大鼠禁食不禁水24 h后取大鼠腹腔主動(dòng)脈血2 mL分離血清至-80 ℃ 保存,采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢驗(yàn)胃蛋白酶原-Ⅱ(PGⅠ、PGⅡ)、胃動(dòng)素(MTL)、胃泌素(GAS)、腫瘤壞死因子(TNF-α)水平。隨后按照每100 g 0.2 mL 10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,切開大鼠腹腔結(jié)扎賁門及幽門并摘除全胃,取注射器吸取胃液,采用精密pH試紙檢測(cè)胃酸pH值;向胃中注入10%中性甲醛溶液5 mL進(jìn)行固定,并將全胃浸沒(méi)在10%中性甲醛溶液中,30 min后沿大彎側(cè)剪開胃部,用已預(yù)冷的PBS緩沖液緩慢沖洗,肉眼觀察胃部病變情況;取食管端至十二指腸端大彎側(cè)胃黏膜組織,制作石蠟包埋切片,HE染色后,在顯微鏡下觀察胃黏膜損傷程度,并用Guth等[7]標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算胃黏膜潰瘍指數(shù)(ulcer index,UI),并以累積積分制計(jì)算:斑點(diǎn)糜爛=1分;糜爛長(zhǎng)度<1 mm=2分,<2 mm =3分,<4 mm =4分,≥4 mm =5分;寬度超過(guò)2 mm以上分值均×2。

2 結(jié)果

2.1 大鼠一般情況 造模期間,模型對(duì)照組大鼠死亡3只,治療A、B、C組分別死亡2、1、3只;造模的各組主動(dòng)處死大鼠各1只。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,空白對(duì)照組大鼠活潑好動(dòng),毛發(fā)顏色潔白且有光澤,狀態(tài)一切正常;模型組大鼠自建模開始,逐漸出現(xiàn)毛發(fā)枯槁且稀疏易脫落,易疲倦不活躍,對(duì)移動(dòng)箱籠及投喂等活動(dòng)響應(yīng)度低;各治療組采用康復(fù)新液灌胃后,萎靡狀態(tài)逐漸改善,毛發(fā)光澤度、清潔度等均逐步恢復(fù)。

2.2 大鼠體質(zhì)量變化 飼養(yǎng)15周后,空白對(duì)照組大鼠體質(zhì)量持續(xù)上升;模型組自建模后體質(zhì)量持續(xù)下降,各治療組大鼠在康復(fù)新液灌胃后,體質(zhì)量逐步恢復(fù)并持續(xù)增加;治療A、B、C組間大鼠體質(zhì)量在第9周差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);第15周,各治療組大鼠體質(zhì)量與模型對(duì)照組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖1。

圖1 實(shí)驗(yàn)期間各組大鼠體質(zhì)量變化情況Figure 1 Changes in body mass of rats in each group during the experiment

2.3 大鼠胃組織病理表現(xiàn) 空白對(duì)照組大鼠胃部黏膜組織各層結(jié)構(gòu)清晰,腺體排列整齊且緊密,黏膜層無(wú)炎癥;模型對(duì)照組黏膜固有腺體大量減少且結(jié)構(gòu)松散,呈現(xiàn)出不同程度的萎縮狀態(tài),黏膜層內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞成團(tuán)浸潤(rùn),呈現(xiàn)輕中度炎癥;見封三圖2A、B。治療C組腺體排列緊密,黏膜有輕度炎癥表現(xiàn);治療A、B組可見胃組織結(jié)構(gòu)緊密,未有炎癥表現(xiàn);見封三圖2C、D、E。

2.4 各組大鼠UI及胃液pH值 各治療組的UI均低于模型對(duì)照組;且治療A組小于B、C組,B組小于C組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。各治療組胃液pH值均高于模型對(duì)照組,且治療A組高于B、C組,B組高于C組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠胃黏膜UI及胃液pH值比較

2.5 各組大鼠血清指標(biāo)比較 5組間、各治療組間及其與模型對(duì)照組的血清各指標(biāo)水平,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。模型組中,治療A組TNF-α水平最低,余各指標(biāo)水平均為最高。

表2 各組大鼠血清指標(biāo)比較

3 討論

萎縮性胃炎伴糜爛內(nèi)鏡下表現(xiàn)為胃部臍狀凹陷而深,胃小凹之間隆起分布不均,細(xì)胞增生脫落呈網(wǎng)狀,絨毛增多增長(zhǎng)呈地毯樣外觀;病理組織切片表現(xiàn)為黏膜變薄,固有腺體減少或消失,亦或部分被纖維組織替代等[8]。王鳴等[9]研究顯示,環(huán)氧合酶-2和Ki-67基因在胃炎伴糜爛及胃癌組織中均呈高表達(dá)。目前該病的西醫(yī)臨床治療方案并不統(tǒng)一,多以制酸、保護(hù)胃黏膜為主,但臨床效果不盡人意。

中醫(yī)認(rèn)為胃損傷可與多種因素相關(guān),如情志不舒、飲食不節(jié)、外邪入侵、藥物損傷以及先天不足等。脾胃不調(diào)、水谷精微不化,受納失常,使各器官氣血生化能力下降,遂痰濕阻滯、氣血不暢、脾胃氣機(jī)更加阻礙。故應(yīng)予以健脾和胃,調(diào)節(jié)氣機(jī),活血通脈[8]。中藥典籍記載,蜚蠊可清熱解毒消積、活血化瘀生肌[10];現(xiàn)代藥理研究[11]顯示,美洲大蠊乙醇提取物含有多種活性物質(zhì),包括氨基酸、多元醇及表皮生長(zhǎng)因子等,并能有效降低腫瘤壞死因子(TNF-α)等炎性因子水平,有效改善炎癥反應(yīng)。本研究采用水楊酸鈉灌胃結(jié)合單雙日斷食、飽食刺激,模擬人類不正常飲食及生活習(xí)慣,使胃黏膜處于反復(fù)的刺激損害中,更貼近人類的發(fā)病機(jī)制。建模成功后,模型組大鼠均呈現(xiàn)出毛發(fā)變稀疏、脫落、活躍度差、應(yīng)激反應(yīng)慢等狀態(tài),而治療組在康復(fù)新液灌胃后,萎靡狀態(tài)逐漸改善。

本實(shí)驗(yàn)中病理組織顯示治療A、B組無(wú)明顯炎癥表現(xiàn),治療C組有輕微炎癥,模型對(duì)照組有輕、中度炎癥;治療組血清TNF-α水平低于模型對(duì)照組。提示康復(fù)新液確實(shí)可提高糜爛組織的修復(fù)作用,改善胃黏膜炎性狀態(tài)。胃腸激素主要由胃腸黏膜的化學(xué)信使細(xì)胞分泌,是調(diào)節(jié)消化器官的重要肽類物質(zhì),包括蛋白酶原(PG)、GAS、MTL、生長(zhǎng)抑素、5-羥色胺等。PG是胃蛋白酶的無(wú)活性前體,而其PGⅠ、PGⅡ具有保護(hù)胃腸道結(jié)構(gòu)及功能完整的作用。當(dāng)胃出現(xiàn)炎性或萎縮等病理變化時(shí),PGⅠ波動(dòng)較大,PGⅡ相對(duì)穩(wěn)定。康復(fù)新液可抑制黏膜炎性因子滲出,增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬作用,促進(jìn)潰瘍創(chuàng)面的愈合和新生肉芽組織的生長(zhǎng),使PGⅠ等物質(zhì)分泌恢復(fù)正常水平[11]。GAS可促進(jìn)胃腸分泌,營(yíng)養(yǎng)及保護(hù)胃黏膜,增加胃動(dòng)力[12]。胃酸增加會(huì)刺激交感神經(jīng)興奮,GAS分泌受到抑制。MTL可促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng),調(diào)節(jié)胃腸道水電解質(zhì)的運(yùn)輸。研究[2]表示,萎縮性胃炎的發(fā)生與胃腸激素分泌降低。通過(guò)康復(fù)新液干預(yù)后,胃腸激素可明顯上調(diào),消化功能明顯提高。本研究結(jié)果亦顯示,治療組的PGⅠ、PGⅡ、GAS、MTL均高于模型對(duì)照組,且治療A、B、C三組水平依次降低。提示了康復(fù)新液對(duì)提高胃腸激素的水平具有優(yōu)勢(shì),且1.00 g/mL濃度表現(xiàn)最優(yōu)。

綜上所述,康復(fù)新液治療大鼠萎縮性胃炎合并糜爛的效果顯著,可有效減少胃部糜爛組織,降低血清腫瘤壞死因子水平,改善胃腸激素分泌,提高消化能力。