陳卉，肖海娟

南京醫(yī)科大學(xué)康達學(xué)院附屬漣水縣人民醫(yī)院檢驗科，江蘇漣水 223400

金黃色葡萄球菌屬于臨床中比較常見的一種高病毒性致病菌，通過將多種細胞外毒素，如溶血素、腸毒素等釋放出來，而表現(xiàn)出比較強的致病力[1-2]。于社區(qū)獲得性感染或者醫(yī)源性感染等病灶中比較常見，除此以外，軟組織及皮膚感染也比較常見，也可以將其視為中毒性休克及敗血癥等疾病的致病菌。金黃色葡萄球菌被視為一種“超級病菌”，一旦感染后便會很難控制[3]。因此，及時且準(zhǔn)確地對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（dumethicillinresistant staphylococcus aureus, MRSA）及甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（methicillin-sensitive staphylococcus aureus, MSSA）進行鑒定極為重要，并實時對MRSA 的流行情況展開監(jiān)測，利于及時提供給臨床有效的治療方案及控制感染措施。由于質(zhì)譜技術(shù)鑒定速度較快且具有極高的準(zhǔn)確率，受到更多人的關(guān)注，且被更多醫(yī)務(wù)人員廣泛應(yīng)用于細菌的快速鑒定及耐藥性研究[4-5]。為對質(zhì)譜技術(shù)的應(yīng)用效果展開進一步探究，本文共從2022年1 月—2023年1 月期間于南京醫(yī)科大學(xué)康達學(xué)院附屬漣水縣人民醫(yī)院檢驗科接受治療的患者中隨機選擇80 例作為研究對象，探究耐MRSA 及MSSA 快速鑒定中梅里埃VTIEK MS 質(zhì)譜儀的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

從本院收治的骨科患者中隨機選擇80 例作為研究對象，均接受迪爾96L 及藥敏板、梅里埃VITEK MS 質(zhì)譜鑒定。男35 例，女45 例；年齡40～60歲，平均（50.25±3.17）周歲。本研究已通過本院倫理委員會審核。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①意識清晰者；②臨床資料完整者；③統(tǒng)一加入本研究并簽署知情同意書者。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①診療依從性較差者；②患有嚴重臟器疾病者；③患有血液系統(tǒng)疾病者；④患有腫瘤疾病者；⑤患有傳染性疾病者。

1.3 方法

分離出致病菌后，采用全自動微生物鑒定和藥敏分析系統(tǒng)進行分析，最終確定金黃色葡萄球菌。所有樣本放在溫度為35℃的CO2溫箱內(nèi)進行孵育，孵育時間為24 h。分別給予所收集到樣本同時使用DL-96llX 細菌藥敏檢定儀、梅里埃VITEK MS 質(zhì)譜儀進行鑒定。

①挑取純菌落，涂布靶板，加基質(zhì)液，放置于梅里埃VITEK MS 質(zhì)譜儀中讀取，同時間觀察特征峰出現(xiàn)的峰值，并記錄。

②菌懸液制備：挑取純培養(yǎng)單個菌落于稀釋液瓶內(nèi)壁研磨呈細菌懸液（0.5 M）。吸菌懸液50 μl，加至M-H 肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，充分混勻，繼續(xù)加入試劑板的其余各孔[所有抗菌藥物常規(guī)藥敏定量試驗（MIC）法測定試驗孔及生長對照孔C]，100 ul∕孔。用連續(xù)移液器（配無菌移液吸頭）吸取該菌懸液加入試劑板A1-A12 和B1-B10 孔內(nèi)，100 ul∕孔。在A1～A3 孔分別滴加無菌石蠟油2 滴。撕開不干膠對齊貼于試劑板，35～37℃孵育24 h（個別生長緩慢者可延長至36～48 h）后判讀結(jié)果，將苯唑西林MIC 值≥4∕mL 作為MRSA 判定標(biāo)準(zhǔn)，苯唑西林MIC 值≤2∕mL作為MSSA 判定標(biāo)準(zhǔn)。

③將分離后得到的金黃色葡萄球菌菌株進行編號，利用無菌濾紙將其收集好，并放置于-80°C 冰箱內(nèi)凍存。

1.4 觀察指標(biāo)

采用布魯克公司所提供的Clinpro Tools（3.3.0版本）軟件建立模型并進行驗證。建立Clinpro Tools 模型，特異峰納入標(biāo)準(zhǔn)：所有菌株中，峰值分析分類值均超過70.00%、峰值強度超過2 000。對MRSA 及MSSA 特征圖譜重合率及峰質(zhì)荷比展開分析。

1.5 統(tǒng)計方法

采用SPSS 26.0 統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料采用[n(%)]表示，差異比較進行χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 梅里埃VITEK MS 質(zhì)譜法與MIC 法對比

所有患者隨機分離出來80 株金黃色葡萄球菌，其中MRSA 42 株（52.50%），MSSA 38 株（47.50%）。分別從分離出來的金黃色葡萄球菌中抽取MRSA 22 株、MSSA 20 株，建立ClinPro Tools 模型，按照上述納入標(biāo)準(zhǔn)找出MRSA 主要特征峰質(zhì)荷比，共找出兩個，即2 305.6 Da 和3 007.3 Da。利用其他的MRSA 20 株、MSSA 20 株驗證該模型。比對MIC 法，結(jié)果提示特征峰1 靈敏度為78.95%，特異度為76.19%；特征峰2 靈敏度為82.35%，特異度為73.91%；聯(lián)合兩點靈敏度為73.91%，特異度為82.35%，見表1。

表1 梅里埃VITEK MS 質(zhì)譜法與MIC 法對比

2.2 MRSA 及MSSA 質(zhì)譜峰圖分析

選擇梅里埃VITEK MS 質(zhì)譜儀分析MRSA 及MSSA 所產(chǎn)生的質(zhì)譜儀m∕z，質(zhì)譜m∕z 為322 000、263 000 即金黃色葡萄球菌特征峰，MSSA 組質(zhì)譜峰m∕z在2 637 時小于MRSA 組，MRSA 質(zhì)譜峰m∕z 為4 308時大于MSSA 組，菌株不同MRSA 的質(zhì)譜峰稍有差異，MRSA 標(biāo)本菌株來源于分泌物、血及痰；MSSA標(biāo)本菌株來源于血、分泌物。見圖1、圖2。

圖1 部分MRSA 及MSSA 在2 000～7 000 質(zhì)譜峰圖

圖2 部分MRSA 及MSSA 在2 000～7 500 質(zhì)譜峰圖

3 討論

金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌致病菌，極易誘發(fā)肺炎、化膿感染、偽膜性腸炎，甚至?xí)T發(fā)膿毒癥及敗血癥等全身感染[6]。于1961年，MRSA 首次被發(fā)現(xiàn)，感染幾乎遍及到全球，感染率也呈現(xiàn)出逐年增加趨勢[7]。近幾年，臨床中由于金黃色葡萄球菌所誘發(fā)的感染性疾病逐漸增多，抗生素的應(yīng)用也更加廣泛，耐藥菌株也日益增多，尤其是MRSA 具備多重耐藥性，對臨床中比較常用的抗生素，如四環(huán)素、大環(huán)內(nèi)酯類、氯霉素及氨基糖苷類等均存在比較明顯的耐藥性[8-10]。曾有文件介紹，MRSA 對所有β 內(nèi)酰胺酶藥物均表現(xiàn)耐藥[11]。值得注意的是，誘發(fā)感染的金黃色葡萄球菌不但包含MRSA，還含有MSSA，兩種治療方式并不相同，合理應(yīng)用抗生素可以促使耐藥菌的產(chǎn)生有所延緩[12-13]。既往傳統(tǒng)診斷病原菌微生物的方式存在流程復(fù)雜及耗時長等局限性，且診斷后也會產(chǎn)生一定的誤差概率，不僅會在判斷微生物中產(chǎn)生差錯事件，診療方案的制訂和臨床療效的判斷均會受到一定影響[14-15]。因此，對以金黃色葡萄球菌為代表的病原菌微生物診療方案展開制訂，臨床應(yīng)用價值較為顯著[16]。質(zhì)譜技術(shù)為臨床中應(yīng)用最為廣泛的一種優(yōu)質(zhì)鑒定方式，其具備通量高、敏感性高及準(zhǔn)確率高等特點，基于蛋白質(zhì)峰值的差異展開細菌判讀，并將其廣泛應(yīng)用于食物檢驗及臨床檢驗等各領(lǐng)域中[17]。本研究結(jié)果提示，患者隨機選擇分離出來80 株金黃色葡萄球菌，其中MRSA 42 株（52.50%），MSSA 38 株（47.50%）。分別從分離出來的金黃色葡萄球菌中抽取MRSA 22 株、MSSA 20 株，共找出兩個MRSA主要特征峰，即2 305.6 Da 和3 007.3 Da。利用其他的MRSA 20 株、MSSA 20 株驗證該模型。比對MIC 法，結(jié)果提示特征峰1 靈敏度為78.95%，特異度為76.19%；特征峰2 靈敏度為82.35%，特異度為73.91%；聯(lián)合兩點靈敏度為73.91%，特異度為82.35%。吳文強等[18]在其研究中選擇1 153 例患者作為研究對象，通過對患者體液、血液和壞死性組織樣本進行檢測，分離出致病菌，通過利用全自動微生物鑒定及藥敏分析系統(tǒng)確定為金黃色葡萄球菌，利用質(zhì)譜儀鑒定分析細菌，與ClinPro Tools軟件建立模型聯(lián)合對MRSA 及MSSA 質(zhì)譜圖之間的差異展開分析，結(jié)果顯示，1 153 例患者共分離出100 株金黃色葡萄球菌，其中MRSA 58 株（58.00%）、MSSA 42 株（42.00%），分別從分離出來的金黃色葡萄球菌中抽取MRSA 26 株、MSSA 19株，共找出兩個MRSA 主要特征峰，即2 305.6 Da和3 007.3 Da。利用其他的MRSA 32 株、MSSA 23株驗證該模型。比對MIC 法，結(jié)果提示特征峰1靈敏度為71.9%，特異度為82.6%；特征峰2 靈敏度為68.8%，特異度為87%，與本研究結(jié)果相似。結(jié)果提示，質(zhì)譜對MRSA、MSSA 的鑒定價值良好，靈敏度高，且特異性較好。

綜上所述，MRSA 及MSSA 快速鑒定中，梅里埃VTIEK MS 質(zhì)譜儀特異性更好，且靈敏度更高。