李冬梅，邊夢霓，侯毅杰，董永和，馬俊兵，邱敏，楊征

（包頭醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014040）

高血壓已成為威脅全球公共衛(wèi)生安全的重大隱患之一。長期高血壓容易誘發(fā)各種心腦血管疾病，造成心、腦、腎等重要靶器官損害，最終導(dǎo)致器官衰竭。目前經(jīng)典的降壓藥無法滿足難治性高血壓人群的降壓目標(biāo)值。因此，迫切需要進一步探索高血壓發(fā)生發(fā)展的新機制和更有效的降壓藥物。

萘哌地爾為國內(nèi)批準(zhǔn)的一類降壓藥，通過特異性α1腎上腺素受體拮抗、鈣離子通道阻斷、5-HT1A激活等作用介導(dǎo)血管擴張，發(fā)揮降壓作用[1，2]。鑒于其降壓作用有限，中國科學(xué)院貴州省天然藥物化學(xué)重點實驗室通過加工修飾萘哌地爾側(cè)鏈，人工合成萘哌地爾衍生物YMⅢ，如圖1 所示（R 為保密基團）。本課題組前期研究表明YMⅢ具有拮抗α1-AR及抑制VSMC 增殖的作用[3，4]，對于其降壓機制的系統(tǒng)性研究報道國內(nèi)外罕見。作為當(dāng)前熱門的新興學(xué)科，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是以網(wǎng)絡(luò)生物學(xué)、藥理學(xué)、生物信息學(xué)、系統(tǒng)生物學(xué)等相關(guān)學(xué)科為基礎(chǔ)，通過構(gòu)建生物網(wǎng)絡(luò)來研究疾病發(fā)病機制，并全面剖析藥物干預(yù)疾病的分子關(guān)聯(lián)機制，破除了傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)“一靶標(biāo)一疾病一藥物”治療模式的局限性，為疾病高效治療和新藥開發(fā)提供新思路新方法[5，6]。本課題運用網(wǎng)路藥理學(xué)方法，闡述YMⅢ在高血壓治療中發(fā)揮關(guān)鍵作用的靶點、分子途徑和生物過程，分析YMⅢ的降壓機制，并通過實驗加以驗證，為推進新型降壓藥物的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用提供參考。

圖1 YMⅢ結(jié)構(gòu)圖Fig.1 YMⅢstructure diagram

1 材料與方法

1.1 化合物靶點預(yù)測

從PubChem（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）數(shù)據(jù)庫下載萘哌地爾2D 格式化學(xué)結(jié)構(gòu)，輸入到Swiss Target Prediction（Gfeller et al.，2013；Daina et al.，2019）（http：//www.swisstargetprediction.ch/），經(jīng)去支鏈、保主鏈處理（即為YMⅢ主要研究結(jié)構(gòu)），物種選擇“智人”，取預(yù)測分數(shù)大于0的靶點作為YMⅢ藥理靶點。SwissADME（swissadme.ch）為檢索化合物物理化學(xué)性質(zhì)、藥代動力學(xué)、藥物相似性和藥物化學(xué)友好性的網(wǎng)絡(luò)工具，為新藥的開發(fā)和臨床應(yīng)用提供重要信息[7]。通常藥代動力學(xué)分析，胃腸道吸收高和藥物相似性分析中超過3 個“是”，“0”違規(guī)，證明該化合物具有活性[8]。將藥物靶點導(dǎo)入UniProt（https：//www.UniProt.org/）數(shù)據(jù)庫，規(guī)范基因名稱。

1.2 疾病相關(guān)靶點識別

以Gene Cards（http：//www.genecards.org/）人類基因數(shù)據(jù)庫作為搜索疾病靶點工具，以“高血壓”為關(guān)鍵詞，篩選高血壓靶點，再以前述同樣方式經(jīng)UniProt規(guī)范基因名稱。

1.3 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將篩選的疾病和藥物靶點導(dǎo)入Draw Venn Diagram（http：// bioinformmatics.psb.ugent. be/webtools/venn/）獲取交集靶點。STRING 數(shù)據(jù)庫（https：//STRINGdb.org/）用來檢索已知和預(yù)測的蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間關(guān)聯(lián)，將交集基因?qū)朐摂?shù)據(jù)庫，物種選擇“智人”，最高置信度蛋白互交參數(shù)評分值＞0.4，默認其他參數(shù)設(shè)置，去掉網(wǎng)絡(luò)中的游離節(jié)點后，將蛋白互作數(shù)據(jù)傳入Cytoscape 3.8.2 進行拓撲分析并構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，預(yù)測YMⅢ抗高血壓的重要靶點。

1.4 GO和KEGG富集分析

通過DAVID（https：//DAVID.ncifc rf.gov/）進行基因本體（GO）功能富集分析、京都基因和基因組百科全書（KEGG）途徑富集分析，探索YMⅢ抗高血壓涉及的生物過程和相關(guān)信號通路，P＜0.05 視為參考范圍。通過微生信（http：//www.bioinformatics.com.cn）在線作圖工具直觀展示基因功能與通路富集結(jié)果。

1.5 分子對接

分子對接用于預(yù)測小分子化合物與目標(biāo)蛋白的結(jié)合能力。YMⅢ骨架結(jié)構(gòu)（去掉R 集團）作為小分子化合物獲取SDF 格式，其3D 結(jié)構(gòu)在RCSB PDB數(shù)據(jù)庫（http：//www.rcsb.org/）中獲取。分子對接所涉及的配體和蛋白質(zhì)由Auto Dock 軟件（http：//vina.scripps.edu/）實現(xiàn)，對目標(biāo)蛋白進行去除水分子、加氫、修飾氨基酸、優(yōu)化能量和調(diào)整力場參數(shù)，之后利用PyRx 軟件內(nèi)部的Vina 進行虛擬篩選，配體和受體間的結(jié)合能力通過Binding Affinity（kcal/mol）值表示，數(shù)值越低表示結(jié)合越穩(wěn)定，最后使用DS2019軟件作圖。

1.6 實驗藥品與試劑

YMⅢ：由中國科學(xué)院貴州省天然藥物化學(xué)重點實驗室提供，純度為99%，用無水乙醇超聲溶解，使用前用三蒸水稀釋配制成所需濃度;重酒石酸去甲腎上腺素（NA）、咖啡因（Caffeine）：美國Sigma 公司產(chǎn)品，純度均為99%，使用時用三蒸水配制；正常Krebs保養(yǎng)液的組成（mmol·L-1）：NaCl 120.0 mmol·L-1、KCl5.4mmol·L-1、CaCl22.2mmol·L-1、MgSO47.0mmol·L-1、H2O 1.0 mmol·L-1、NaHCO325.0 mmol·L-1、葡萄糖（C6H12O6）5.6 mmol·L-1、溶液pH 7.4；無鈣Krebs保養(yǎng)液的組成（mmol·L-1）：不含CaCl2，并加入EGTA 0.5 mmol·L-1，其他同正常Krebs保養(yǎng)液。

1.7 動脈血管條制備

家兔體質(zhì)量（2.3±0.4）kg，雌雄兼用。木棒擊頭致昏后即刻取出胸主動脈，用棉簽擦拭并去除內(nèi)膜，剪成約長20 mm、直徑2.5 mm 的螺旋條，投放于含有Krebs 營養(yǎng)液20 mL 的恒溫（37 ℃）水浴槽中，持續(xù)通入95 %O2＋5 %CO2混合氣體，pH 7.3～7.4，靜息負荷2 g，每隔15 min 更換營養(yǎng)液1 次，反復(fù)沖洗，平衡90 min 后給藥觀察。血管的收縮經(jīng)張力換能器連接于XWTD-204 臺式自動平衡記錄儀記錄之。實驗中所用藥物濃度均按最終浴槽濃度計算。

1.8 YMⅢ對NA 所致動脈血管收縮效應(yīng)的影響

在浴槽內(nèi)加入NA 10-6mol·L-1，待動脈條收縮至坪值后沖洗，平衡1 h 后，以同法加入同量的NA，重復(fù)數(shù)次至收縮高度前后兩次基本不變，視為動脈條的收縮已達穩(wěn)定。平衡1 h 后，用無Ca2+Krebs 沖洗，穩(wěn)定3 min，再加入NA 10-6mol·L-1，可見動脈條產(chǎn)生迅速而短暫的收縮。待其舒張平穩(wěn)后，累計加入CaCl21.1 mmol·L-1，2.2 mmol·L-1，可見隨Ca2+濃度增加，動脈條再次收縮并達峰值，此為藥前對照。然后用正常Krebs反復(fù)沖洗，平衡1 h，加入無Ca2+Krebs液，同時加入不同濃度YMⅢ（10-8、5×10-8、10-7mol·L-1），穩(wěn)定3 min，重復(fù)上述實驗。實驗結(jié)束前再做一次無Ca2+NA 收縮對照，將血管條收縮高度與給YMⅢ前基本一致的收入統(tǒng)計資料。

1.9 YMⅢ對咖啡因所致動脈血管收縮效應(yīng)的影響

在正常Krebs 液浴槽內(nèi)加入KCl 50 mmol·L-1，使動脈條平滑肌細胞內(nèi)Ca2+負載，并產(chǎn)生一定的收縮，再用無Ca2+Krebs 液置換正常Krebs 液，3 min 后加入咖啡因60 mmol·L-1，見動脈條產(chǎn)生迅速而短暫的收縮，以此為藥前對照。用正常Krebs液反復(fù)沖洗并平衡1 h，重復(fù)上述實驗，但在加入無Ca2+Krebs液的同時加入YMⅢ，然后再加入等量咖啡因。實驗結(jié)束前再做一次無Ca2+咖啡因收縮對照，將血管條收縮高度與給YMⅢ前基本一致的收入統(tǒng)計資料。

1.10 統(tǒng)計學(xué)方法

全部資料的整理、分析均用SPSS 24.0統(tǒng)計學(xué)軟件。實驗數(shù)據(jù)以（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析。檢驗水準(zhǔn)為α=0.05，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 化合物靶點獲取

共獲得104 個YMⅢ預(yù)測靶點，且YMⅢ符合經(jīng)SwissADME 評估的藥代動力學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，具備成藥開發(fā)潛力。預(yù)測靶點在規(guī)范基因名后得到104 個YMⅢ藥理靶點，呈現(xiàn)的化合物-靶點網(wǎng)絡(luò)（見圖2a）有105 個節(jié)點（1 個化合物節(jié)點，104 個目標(biāo)節(jié)點）和104 條邊。

圖2 藥物-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)圖Fig.2 Drug-target-disease network diagrama 化合物-靶點網(wǎng)絡(luò)；b 疾病-靶點網(wǎng)絡(luò)；c YMⅢ和高血壓靶標(biāo)的venn 圖；d 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)。節(jié)點面積由大到小和顏色由深到淺代表度值的降序。a Compound-target network; b Disease-target network; c The Venn diagram of YMⅢand Hypertension targets;d Proteinprotein interaction network. The node area from large to small and color from dark to light represent the descending order of degree values.

2.2 高血壓靶點篩選

共得到8 968 個高血壓靶點，靶點相關(guān)性評分≥中位數(shù)為標(biāo)準(zhǔn)并連續(xù)篩選，最終確定“相關(guān)性評分＞1.074131489”為標(biāo)準(zhǔn)篩選疾病靶點，并通過Uniprot進行基因名稱規(guī)范，最終獲得2 286 個研究相關(guān)的高血壓靶點，見圖2b所示疾病-靶點網(wǎng)絡(luò)。

2.3 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建和關(guān)鍵靶點篩選

2286 個疾病靶點和104 個藥物靶點經(jīng)Venn 分析得到46 個交叉靶點（見圖2c），視為YMⅢ治療高血壓的潛在作用靶點。將交叉靶點導(dǎo)入STRING，去除游離節(jié)點UTS2R 和TACR3 后經(jīng)Cytoscape 軟件的“Analyze Network”模塊進行拓撲分析，計算網(wǎng)絡(luò)節(jié)點度值，構(gòu)建出擁有44 個節(jié)點、125 條邊的PPI網(wǎng)絡(luò)（見圖2d），節(jié)點顏色越深度值越大，表示節(jié)點越重要，度值較高的靶點依次是SLC6A4、SRC、SLC6A3、CHRNA7、EGFR、DRD2、PRKCB、HTR2A、JAK2、AR、PRKCD、ADRA2A、ADRA2C、HTR2A、HTR1A，可能在YMⅢ抗高血壓中發(fā)揮重要作用。

2.4 GO和KEGG富集分析和靶點-通路網(wǎng)絡(luò)搭建

將46 個交集靶點導(dǎo)入DAVID 數(shù)據(jù)庫，物種選擇“智人”。GO富集結(jié)果顯示，共有179 個生物過程（BP）、30 個細胞組分（CC）和50 個分子功能（MF）；共有42 條具有統(tǒng)計學(xué)意義的KEGG富集通路。根據(jù)P值大小取前10 個條目經(jīng)微生信在線作圖（見圖3）。結(jié)果顯示，YMⅢ的降壓作用主要通過目標(biāo)靶點對腺苷酸環(huán)化酶激活腎上腺素能受體信號通路、MAPK級聯(lián)的正調(diào)節(jié)、突觸囊泡胞吐作用調(diào)控、胞漿鈣離子濃度正調(diào)節(jié)、細胞鈣離子穩(wěn)態(tài)、對藥物的反應(yīng)、血管收縮的正調(diào)節(jié)等生物過程的調(diào)節(jié)實現(xiàn)。這些生物過程的調(diào)節(jié)主要由神經(jīng)活性受體配體相互作用、鈣信號通路、縫隙連接、TRP 通道的炎癥介質(zhì)調(diào)節(jié)、多巴胺能突觸等信號通路介導(dǎo)完成，為了直觀展現(xiàn)目標(biāo)靶點與主要信號通路的相互作用關(guān)系，構(gòu)建圖4所示的靶點-通路圖，我們發(fā)現(xiàn)神經(jīng)活性受體配體相互作用通路與目標(biāo)靶點關(guān)聯(lián)最多，可能是YMⅢ治療高血壓的關(guān)鍵通路。

圖3 GO和KEGG富集分析Fig.3 GO and KEGG enrichment analysisa GO富集分析（BP：生物過程，cc：細胞組分，MF：分子功能）；b KEGG富集分析。a GO enrichment analysis(BP:Biological Process,cc:Cellular Component,MF:MolecularFunction);bKEGGenrichmentanalysis.

圖4 靶點-通路網(wǎng)絡(luò)圖Fig.4 Targets-pathways network diagram黃色節(jié)點代表靶點，紫色節(jié)點代表作用通路。yellow nodes represent targets,and purple nodes represent pathways of action.

2.5 分子對接

YMⅢ骨架結(jié)構(gòu)作為小分子化合物，交集基因中選取度值≥7 的13 個關(guān)鍵靶點作為對接受體（未找到SLC6A3蛋白結(jié)構(gòu)，不納入受體組），對接結(jié)果證實化合物能夠與關(guān)鍵靶點緊密結(jié)合（見表1、圖5），進一步驗證了YMⅢ的抗高血壓作用。

表1 化合物與關(guān)鍵靶點的對接結(jié)果Tab.1 Docking results of compounds to key targets

圖5 YMⅢ和關(guān)鍵靶點分子對接結(jié)果Fig.5 Docking results of YMⅢand key target moleculesa 溶質(zhì)載體家族6 成員4；b 原癌基因酪氨酸蛋白激酶SRC；c 膽堿能受體煙堿α；d 表皮生長因子受體；e 多巴胺受體D2；f 蛋白激酶C，β；g Janus激酶2；h 雄激素受體；i 蛋白激酶C，δ；j 5-羥色胺受體2A；k 腎上腺素受體α2A；l 腎上腺素受體α2c；m 5-羥色胺受體1A。a SLC6A4;b SRC;c CHRNA7;d EGFR；e DRD2;f PRKCβ;g JAK2; h AR；i PRKCδ；j HTR2A; k ADRA2A；l ADRA2C; m HTR1A.

2.6 萘哌地爾衍生物YMⅢ對NA 所致動脈血管收縮效應(yīng)的影響

結(jié)果表明，與無Ca2+液中NA所致血管條短暫收縮對比，YMⅢ10-8、5×10-8、10-7mol·L-1組對血管條的收縮均呈顯著抑制作用，對復(fù)Ca2+后NA誘發(fā)的血管條持續(xù)收縮，同量的YMⅢ組對血管條收縮也有抑制效應(yīng)（P＜0.05）（見圖6）。

圖6 YMⅢ對NA所致動脈血管收縮效應(yīng)的影響Fig.6Effect of YMⅢon NA-induced arterialvasoconstriction effecta NA組和YMIII組在無Ca2+和復(fù)Ca2+條件下的血管收縮曲線圖；b 無Ca2+條件下YMⅢ對NA引起動脈血管收縮的影響；c 1.1 mmol·L-1 Ca2+條件下YMⅢ對NA引起動脈血管收縮的影響；d 2.2 mmol·L-1 Ca2+條件下YMⅢ對NA引起動脈血管收縮的影響，*P＜0.05；**P＜0.01。a Vasoconstriction curves in the NA and YMⅢgroups under Ca2+-free and Ca2+-loading conditions；b Effect of YMⅢon NAinduced arterial vasoconstriction under Ca2+-free conditions；c Effect of YM Ⅲon NA-induced arterial vasoconstriction under 1.1 mmol·L- 1 Ca2 +conditions；d Effect of YMⅢon NA-induced arterial vasoconstriction under 2.2 mmol·L- 1 Ca2 + conditions，*P＜0.05；**P＜0.01.

2.7 萘哌地爾衍生物YMⅢ對咖啡因所致動脈血管收縮效應(yīng)的影響

結(jié)果顯示，在無Ca2+液中咖啡因可使血管條收縮，加入YMⅢ10-5mol·L-1后對血管條收縮沒有抑制作用（P＞0.05）（見圖7）。

圖7 YMⅢ對咖啡因所致動脈血管收縮效應(yīng)的影響Fig.7Effect of YMⅢon caffeine-induced arterial vasoconstriction effecta 咖啡因組和YMⅢ組在無Ca2+條件下的血管收縮曲線圖；b 無Ca2+條件下YMⅢ對咖啡因引起動脈血管收縮的影響，ns：差異無統(tǒng)計學(xué)意義。a Vasoconstriction curves in the caffeine group and the YMⅢgroup under Ca2+-free；b Effect of YMⅢon caffeine-induced arterial vasoconstriction under Ca2+-free conditions，ns：Not statistically significant.

3 討論

高血壓是一種常見的由神經(jīng)、體液、免疫炎癥、胰島素抵抗等多因素共同參與形成的慢性疾病。其特點是血管持續(xù)收縮、血容量增多、內(nèi)皮功能障礙和動脈硬化。因此，降低交感活性、抑制RASS 系統(tǒng)和免疫調(diào)節(jié)等方式成為高血壓治療的關(guān)鍵。雖然針對特定發(fā)病機制的降壓藥物不斷涌現(xiàn)，但目前全世界僅有不足14%的高血壓群體降壓達標(biāo)[9]，因此迫切需要開發(fā)可調(diào)控多種高血壓發(fā)生發(fā)展機制的具有高效降壓特點的新型降壓藥。而網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法具有挖掘尚未開發(fā)物質(zhì)與疾病之間復(fù)雜關(guān)系的特性，因此，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)成為新藥開發(fā)的重要手段。

前期研究表明YMⅢ具有抗α1-AR 及抗VSMC增殖作用，血管平滑肌細胞增殖和血管高收縮性與高血壓發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[10]，由此認為YMⅢ可能具有抗高血壓作用，但目前關(guān)于YMⅢ降壓機制的闡述尚未完全明確。因此，本課題組通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)深度挖掘YMⅢ與高血壓之間的復(fù)雜關(guān)系，分析其降壓機制，并通過實驗來驗證預(yù)測。

經(jīng)數(shù)據(jù)庫篩選共獲得104 個YMⅢ靶點和2 286個高血壓靶點，確定了46 個潛在的治療靶點。圖2d 所示，SRC、SLC6A4、SLC6A3、CHRNA7、EGFR、PRKCB、JAK2、DRD2、HTR2A、AR、PRKCD、ADRA2A、ADRA2C、HTR1A、HTR2A 節(jié)點度值較大，是YMⅢ抗高血壓的重要治療靶點。分子對接進一步證實YMⅢ與重要靶點緊密對接以發(fā)揮其藥理作用。為進一步闡明46 個潛在治療靶點的功能及分子途徑，進行了GO和KEGG富集分析。結(jié)果顯示，YMⅢ通過調(diào)節(jié)多條信號通路介導(dǎo)的多種生物過程干預(yù)高血壓，其中神經(jīng)活性配體受體相互作用通路可能是YMⅢ控制血壓的最關(guān)鍵通路。綜上所述，YMⅢ能夠通過多靶點、多途徑作用于高血壓的多個病理生理機制，表現(xiàn)出YMⅢ降壓的全面性。

如圖4 所示，主要信號通路密切相關(guān)的靶點有PRKCB、PRKCD、SRC、ADRB1、ADRA1D、ADRA1A、ADRA1B、DRD1、DRD2、DRD5、HTR2A、EGFR、MAPK14、PTGER2、CHRNA7。其中ADRA1D、ADRA1A、ADRA1B 是α1-AR 的三種亞基因型，對維持血壓穩(wěn)定至關(guān)重要，α1a-AR 在阻力動脈中顯著表達，發(fā)揮明顯升壓作用[11]。ADRA1D、ADRA1A、ADRA1B 是神經(jīng)活性配體受體相互作用通路中的關(guān)鍵基因，廣泛存在于血管平滑肌細胞。其作為G 蛋白偶聯(lián)受體超家族成員，激活PLC-IP3 信號通路，使細胞內(nèi)Ca2+含量增加，收縮血管[12～14]。在高血壓疾病中，各種因素導(dǎo)致交感神經(jīng)系統(tǒng)過度激活，通過α-AR 介導(dǎo)血管收縮，增加血壓[15]。因此，預(yù)測YMⅢ通過調(diào)節(jié)α 腎上腺能受體-配體間的相互作用發(fā)揮降壓功能。

血管平滑肌細胞內(nèi)Ca2+濃度上調(diào)主要通過肌質(zhì)網(wǎng)鈣釋放和細胞外Ca2+內(nèi)流兩種方式，PLC 激活相關(guān)IP3受體和Ca2+，誘導(dǎo)Ca2+釋放（CICR）相關(guān)的蘭尼堿受體（RyR）是肌質(zhì)網(wǎng)重要的兩種Ca2+釋放通道[16，17]。本實驗中，YMⅢ抑制無鈣液中NA 誘導(dǎo)的血管收縮，對咖啡因誘導(dǎo)蘭尼堿受體（RyR）激活介導(dǎo)的血管收縮無抑制作用，說明YMⅢ可能對響應(yīng)于腎上腺素能受體的PLC-IP3 介導(dǎo)的Ca2+釋放有抑制作用；復(fù)Ca2+后NA 介導(dǎo)血管持續(xù)收縮，該過程中激動劑誘導(dǎo)GPCR-PLCβ 信號通路激活并形成IP3、DAG，IP3、DAG參與調(diào)控受體操作Ca2+通道（ROCC）和存儲操作Ca2+通道（SOCC）并介導(dǎo)細胞外鈣內(nèi)流，維持血管平滑肌持續(xù)活化[18～20]，YMⅢ抑制復(fù)Ca2+后的血管收縮，說明YMⅢ對腎上腺素受體激活依賴的維持細胞內(nèi)Ca2+穩(wěn)態(tài)所必需的Ca2+內(nèi)流通路也有抑制作用。因此，考慮YMⅢ可能通過對腎上腺素受體-配體結(jié)合的抑制，調(diào)節(jié)細胞內(nèi)的Ca2+穩(wěn)態(tài)，從而調(diào)節(jié)血管收縮和血壓，同時也驗證了網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的預(yù)測。

該實驗僅對YMⅢ抗高血壓的單一途徑進行驗證，鈣信號通路、縫隙連接、TRP 通道的炎癥介質(zhì)調(diào)節(jié)、多巴胺能突觸等信號通路與高血壓的治療密切相關(guān)，還需要進一步的實驗驗證。

4 結(jié)論

我們通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究和分子對接驗證，YMⅢ通過多靶點、多途徑干預(yù)高血壓的發(fā)生發(fā)展，體外實驗進一步證實YMⅢ主要通過調(diào)節(jié)α 腎上腺素受體參與的神經(jīng)活性受體配體相互作用信號通路發(fā)揮降壓作用，為YMⅢ抗高血壓作用提供了理論依據(jù)，并為高血壓的治療提供新思路。