普婭麗，楊曉隆，倪艷琴，李 俊

（元江縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)站，云南玉溪 653300）

有機(jī)磷農(nóng)藥作為作物殺蟲(chóng)劑，價(jià)格便宜且效果好，因其廣譜和高效在農(nóng)業(yè)上被廣泛應(yīng)用，是世界上生產(chǎn)和使用最廣泛的農(nóng)藥種類[1]。因其急性毒性較強(qiáng)，若使用不當(dāng)易殘留在作物和環(huán)境中，而使人類身體健康受到影響[2]。近年來(lái)，農(nóng)藥在食品及農(nóng)產(chǎn)品中殘留超標(biāo)的事件時(shí)有發(fā)生，農(nóng)殘超標(biāo)不僅會(huì)影響我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品出口，也會(huì)影響到人們的身體健康[3]。因此，有必要加強(qiáng)農(nóng)藥檢測(cè)。目前，我國(guó)檢測(cè)機(jī)構(gòu)常參 照NY/T 761—2008[4]或GB 23200.116—2019[5]使用氣相色譜法[含火焰光度檢測(cè)器（Flame Photometric Detector，F(xiàn)PD）]進(jìn)行農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)，由于農(nóng)產(chǎn)品基質(zhì)背景復(fù)雜，采用氣相色譜法進(jìn)行農(nóng)殘檢測(cè)分析時(shí)會(huì)產(chǎn)生基質(zhì)效應(yīng)，進(jìn)而影響到農(nóng)殘檢測(cè)定量的準(zhǔn)確性。

基質(zhì)效應(yīng)是指樣品中除了待測(cè)物以外的其他基質(zhì)成分對(duì)待測(cè)物測(cè)定值的影響[6]?；|(zhì)效應(yīng)分為基質(zhì)減弱和基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，若陽(yáng)性樣品未檢出則是因?yàn)榛|(zhì)減弱效應(yīng)，若出現(xiàn)假陽(yáng)性樣品則是因?yàn)榛|(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，假陽(yáng)性樣品的檢出和陽(yáng)性樣品未檢出都會(huì)給檢測(cè)結(jié)果帶來(lái)很大的分析誤差[7]。大多數(shù)有機(jī)磷農(nóng)藥在實(shí)際分析中，樣品中的基質(zhì)會(huì)減少色譜系統(tǒng)活性位點(diǎn)與待測(cè)分子作用的機(jī)會(huì)，使待測(cè)物檢測(cè)信號(hào)增強(qiáng)，最終表現(xiàn)出基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)[8]。近幾年已有不少學(xué)者通過(guò)研究表明，氣相色譜法在測(cè)定農(nóng)殘時(shí)對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的測(cè)定影響較大[9-11]。探究蔬菜中農(nóng)藥殘留檢測(cè)基質(zhì)效應(yīng)的文獻(xiàn)較多，但探究水果中農(nóng)藥殘留檢測(cè)基質(zhì)效應(yīng)的文獻(xiàn)較少。基于此，筆者針對(duì)常用的14 種有機(jī)磷農(nóng)藥，選擇了哈密瓜、葡萄、橘子、西瓜、柿子、橙子、梨、桃子、蘋(píng)果、火龍果、柚子、芒果12 種水果，分別采用丙酮和水果空白基質(zhì)配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，并對(duì)12 種水果進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，來(lái)探究分析水果的基質(zhì)效應(yīng)及其對(duì)回收率的影響，以期為氣相色譜法檢測(cè)水果中有機(jī)磷農(nóng)藥提供一定參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

檢測(cè)樣品：哈密瓜、葡萄、橘子、西瓜、柿子、橙子、梨、桃子、蘋(píng)果、火龍果、柚子及芒果，購(gòu)于元江縣農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。

標(biāo)準(zhǔn)溶液：甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧樂(lè)果、毒死蜱、樂(lè)果、甲基對(duì)硫磷、甲拌磷、水胺硫磷、敵敵畏、亞胺硫磷、馬拉硫磷、三唑磷、殺螟硫磷及對(duì)硫磷共14 種農(nóng)藥，均購(gòu)自天津農(nóng)業(yè)部，濃度為100 μg·mL-1。

試劑：乙腈（優(yōu)級(jí)純）、丙酮（農(nóng)殘級(jí)）、氯化鈉（分析純）。

1.2 儀器與設(shè)備

Agileng 7890B 氣 相 色 譜 儀（FPD 檢測(cè) 器）、弗魯克FA25 勻漿機(jī)、自制氮吹儀、恒溫水浴鍋、XH-D 漩渦混合儀、奧豪斯CP1502 電子天平0.1 g。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品處理

水果樣品去核取可食部分放入制樣機(jī)勻漿，分別稱取25.00 g 的水果勻漿樣品于燒杯中，再加入50 mL 的乙腈提取試劑。用轉(zhuǎn)速為15 000 r·min-1的高速勻漿機(jī)勻漿2 min，用定性濾紙過(guò)濾，濾液收集到事先裝有5 ～7 g 氯化鈉的100 mL 具塞量筒中，蓋上塞子，雙手按住具塞量筒兩端勻速劇烈振蕩2 min，然后在室溫下靜置30 min，直到水相和乙腈相分層。從100 mL 具塞量筒中吸取10.00 mL 乙腈溶液，放入100 mL 的燒杯中，燒杯內(nèi)緩緩?fù)ㄈ氲獨(dú)?，將燒杯放?0 ℃水浴鍋上加熱，蒸發(fā)至近干，再用丙酮定容至5.00 mL，振蕩混勻，用0.22 μm 微孔濾膜過(guò)濾后裝入2 mL 樣品瓶，氣相色譜上機(jī)測(cè)定[4]。

1.3.2 溶液配制

將購(gòu)買的標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋，配制成濃度為5 μg·mL-1的中間儲(chǔ)備液。根據(jù)NY/T 761—2008[4]第一部分的方法，對(duì)12 種水果樣品進(jìn)行處理，凈化濃縮后上機(jī)檢測(cè)，得到不含14 種待測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥的12 種水果基質(zhì)，然后分別用丙酮和12 種水果空白基質(zhì)配制濃度為0.2 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3.3 色譜條件

色譜柱：Agilent DB-17（30 m×0.32 mm×0.50 μm）；進(jìn)樣口溫度250 ℃，檢測(cè)器溫度300 ℃，安捷倫5190-3316 襯管；進(jìn)樣模式：不分流，進(jìn)樣量1 μL。

柱溫升溫程序：初始溫度150 ℃，保持2 min，以8 ℃·min-1的速率升溫至250 ℃，保持15 min。

載 氣：99.999%高 純 氮 氣N2， 恒 流 流 量 為1 mL·min-1；空氣：100 mL·min-1；氫氣：75 mL·min-1。

1.3.4 加標(biāo)回收試驗(yàn)

分別稱取25.00 g 的水果勻漿樣品于燒杯中，加入1 mL 濃度為5 μg·mL-1的中間儲(chǔ)備液，往稱好的勻漿樣品中加入50 mL 的乙腈提取試劑，用轉(zhuǎn)速為15 000 r·min-1的高速勻漿機(jī)勻漿2 min，用定性濾紙過(guò)濾，濾液收集到事先裝有5 ～7 g 氯化鈉的100 mL 具塞量筒中，蓋上塞子，雙手按住具塞量筒兩端勻速劇烈振蕩2 min，然后在室溫下靜置30 min，直到水相和乙腈相分層。從100 mL 具塞量筒中吸取10.00 mL 乙腈溶液，放入100 mL 的燒杯中，燒杯內(nèi)緩緩?fù)ㄈ氲獨(dú)猓瑢旁?0 ℃水浴鍋上加熱，蒸發(fā)至近干，再用丙酮定容至5.00 mL，振蕩混勻，用0.22 μm 微孔濾膜過(guò)濾后裝入2 mL 樣品瓶，得到理論濃度為0.2 mg·kg-1的加標(biāo)樣品，氣相色譜上機(jī)測(cè)定。分別用丙酮配制的0.2 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)溶液和用各自水果基質(zhì)配制的0.2 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行校準(zhǔn)定量。

1.3.5 基質(zhì)效應(yīng)測(cè)定

用氣相色譜儀的FPD 檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定，通過(guò)譜圖記錄各個(gè)農(nóng)藥響應(yīng)的峰面積，計(jì)算出每種農(nóng)藥在不同水果基質(zhì)中的基質(zhì)效應(yīng)，基質(zhì)效應(yīng)公式為基質(zhì)效應(yīng)=基質(zhì)標(biāo)樣峰面積/丙酮標(biāo)樣峰面積[11]。當(dāng)結(jié)果大于1 為增強(qiáng)效應(yīng)，當(dāng)結(jié)果小于1 為減弱效應(yīng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 丙酮溶劑標(biāo)液與西瓜基質(zhì)標(biāo)液（濃度0.2 μg·mL-1）的譜圖對(duì)照

筆者采用氣相色譜法將14 種有機(jī)磷農(nóng)藥按保留時(shí)間不同分為Ⅰ、Ⅱ兩組，分離效果和峰形滿足檢測(cè)要求，且可以通過(guò)溶劑標(biāo)與基質(zhì)標(biāo)的色譜圖看出響應(yīng)值的不同。用丙酮溶劑配制的甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧樂(lè)果、樂(lè)果、亞胺硫磷在FPD 檢測(cè)器上響應(yīng)較低，但用基質(zhì)配制相同濃度的甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧樂(lè)果、樂(lè)果、亞胺硫磷在FPD 檢測(cè)器上響應(yīng)明顯增強(qiáng)（見(jiàn)圖1 ～圖4）。

圖1 Ⅰ組丙酮溶劑標(biāo)圖譜

圖2 Ⅰ組基質(zhì)標(biāo)圖譜

圖4 Ⅱ組基質(zhì)標(biāo)圖譜

2.2 12 種水果基質(zhì)中14 種有機(jī)磷農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)

對(duì)12 種水果基質(zhì)中14 種有機(jī)磷農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行分析評(píng)價(jià)，由表1 可知：①在12 種水果基質(zhì)中14 種有機(jī)磷農(nóng)藥存在一定程度的基質(zhì)效應(yīng)，基質(zhì)效應(yīng)主要與農(nóng)藥種類有關(guān)；②大部分農(nóng)藥在大部分水果中呈現(xiàn)基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，尤其以甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧樂(lè)果、樂(lè)果最強(qiáng)，基質(zhì)效應(yīng)均大于2.0，敵敵畏、毒死蜱次之，基質(zhì)效應(yīng)在1.02 ～1.32，其他農(nóng)藥基質(zhì)效應(yīng)結(jié)果值在1.0 附近，基質(zhì)效應(yīng)不明顯；③基質(zhì)效應(yīng)與農(nóng)藥種類有關(guān)，與樣品基質(zhì)也有關(guān)；④三唑磷在12 種水果中均呈基質(zhì)減弱效應(yīng)。

表1 12 種水果基質(zhì)中14 種有機(jī)磷農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)

2.3 不同校準(zhǔn)方法測(cè)定回收率結(jié)果

用本方法對(duì)14 種有機(jī)磷農(nóng)藥在12 種水果樣品中進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，校準(zhǔn)時(shí)分別用空白基質(zhì)和丙酮溶劑配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行，每個(gè)水果樣品做2 個(gè)平行樣，結(jié)果取2 次平行樣品的平均值，比較計(jì)算結(jié)果。由表2、表3 可知，校準(zhǔn)加標(biāo)樣品時(shí)用丙酮溶劑配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，甲胺磷、樂(lè)果、乙酰甲胺磷、氧樂(lè)果的回收率超過(guò)了130%，其余農(nóng)藥的回收率也不是特別理想，部分偏離了日常農(nóng)殘檢測(cè)最大允許范圍（70%～130%）。但用樣品空白基質(zhì)配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行校準(zhǔn)時(shí)，14 種農(nóng)藥的回收率均在70%～120%，符合規(guī)定要求。結(jié)果表明，用空白樣品基質(zhì)配制混合標(biāo)準(zhǔn)溶液比用丙酮配制標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)得出的回收率較為理想。但需要注意的是，檢測(cè)甲胺磷、乙酰甲胺磷2 種農(nóng)藥雖然已經(jīng)用與本底一致的基質(zhì)標(biāo)液進(jìn)行校準(zhǔn)，但加標(biāo)回收率依然很難達(dá)到100%，這是因?yàn)榧装妨?、乙酰甲胺磷水溶性較強(qiáng)，在前處理過(guò)程中很難100%將農(nóng)藥提取到溶劑中，當(dāng)定量檢測(cè)結(jié)果處于國(guó)家食品安全標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的農(nóng)藥殘留限量值附近時(shí)，最終需要結(jié)合質(zhì)控樣品的回收率情況校正檢測(cè)結(jié)果后進(jìn)行判定。

表2 用丙酮配制標(biāo)液校準(zhǔn)時(shí)12 種水果中14 種農(nóng)藥的回收率（單位：%）

表3 用基質(zhì)配制標(biāo)液校準(zhǔn)時(shí)12 種水果中14 種農(nóng)藥的回收率（單位：%）

3 結(jié)論與討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本研究中的14 種有機(jī)磷類農(nóng)藥在12 種水果基質(zhì)中存在基質(zhì)效應(yīng)，少部分有機(jī)磷農(nóng)藥基質(zhì)效應(yīng)不明顯，但水果基質(zhì)中大多數(shù)有機(jī)磷農(nóng)藥呈現(xiàn)出基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。參考羅貴文[11]、劉欣紅[12]、楊代鳳[13]等實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果，發(fā)現(xiàn)基質(zhì)效應(yīng)的強(qiáng)弱與水果的品種有一定關(guān)系，與有機(jī)磷農(nóng)藥的種類關(guān)系更大。因?yàn)檠鯓?lè)果、甲胺磷、樂(lè)果、乙酰甲胺磷4種農(nóng)藥成分中含有P=O 鍵，所以在12 種水果中都有很強(qiáng)的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；而毒死蜱、甲拌磷、對(duì)硫磷含有P=S 鍵，所以基質(zhì)效應(yīng)不明顯。當(dāng)用丙酮溶劑配制標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行結(jié)果校準(zhǔn)時(shí)，在12 種水果中加標(biāo)樣品部分農(nóng)藥回收率超過(guò)130%，若不用空白基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液就會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果明顯偏高?；|(zhì)效應(yīng)隨農(nóng)藥類型、基質(zhì)類型而變化，在有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的定量檢測(cè)工作中，解決基質(zhì)效應(yīng)的最有效辦法是利用不含待測(cè)農(nóng)藥的空白基質(zhì)溶液來(lái)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液校準(zhǔn)樣品，可以明顯降低基質(zhì)效應(yīng)帶來(lái)的干擾，使檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確?；|(zhì)配標(biāo)法因其操作方便、快捷和簡(jiǎn)單，在日常工作中進(jìn)行單個(gè)樣品或同一種類樣品分析時(shí)比較容易操作，但在進(jìn)行樣品種類繁多的批量化檢測(cè)時(shí)應(yīng)盡量把同種類型的樣品分在一組，或者可以參考部分學(xué)者的研究，選擇基質(zhì)效應(yīng)適中的空白基質(zhì)，以此配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，對(duì)樣品進(jìn)行校準(zhǔn)，以確保定量準(zhǔn)確[9-14]。此外，勤換襯管和隔墊使有機(jī)磷農(nóng)藥不易被吸附，也可有效降低基質(zhì)效應(yīng)的影響[15]。尤其是當(dāng)樣品檢測(cè)結(jié)果超標(biāo)或處于臨界值時(shí)，再次校準(zhǔn)時(shí)必須用空白樣品基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。