程茂高,喬卿梅

(河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院 動(dòng)物醫(yī)藥學(xué)院,河南 鄭州 450046)

隨著人們對(duì)動(dòng)物性食品安全的重視,采用綠色健康的養(yǎng)殖方式已經(jīng)成為養(yǎng)殖業(yè)的必然選擇,中獸藥和中藥飼料添加劑的合理使用受到人們?cè)絹?lái)越多的關(guān)注。但當(dāng)前獸用中藥資源匱乏,大部分企業(yè)利用人用中藥進(jìn)行生產(chǎn),造成人獸中藥資源搶奪,抬高企業(yè)生產(chǎn)成本,養(yǎng)殖企業(yè)失去使用動(dòng)力,解決獸用中藥資源問(wèn)題已成為養(yǎng)殖業(yè)急需解決的問(wèn)題[1,2]。中藥在加工、炮制過(guò)程中產(chǎn)生的破碎組織、根須、殘?jiān)认履_料中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分,將其直接或加工后用于飼喂畜禽,既可減少環(huán)境污染、節(jié)約中藥資源,又可提高畜禽機(jī)體免疫能力、降低養(yǎng)殖業(yè)成本,是協(xié)同中藥資源綜合開(kāi)發(fā)利用、減少人獸中藥資源爭(zhēng)奪的有效途徑之一[3,4]。地黃為常用大宗中藥,在獸醫(yī)臨床中廣泛應(yīng)用,《中國(guó)獸藥典(2020版)》二部收錄了含地黃的15個(gè)成方制劑[5]。目前,對(duì)地黃的非藥用部位的應(yīng)用價(jià)值有少量研究[6-8],但人們對(duì)地黃下腳料與動(dòng)物免疫力、應(yīng)激反應(yīng)、疾病防治的關(guān)系還缺乏系統(tǒng)研究。本試驗(yàn)研究了地黃下腳料提取物對(duì)鴨生長(zhǎng)性能和免疫活性的影響,為中藥下腳料獸用化利用和健康養(yǎng)殖提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要耗材與儀器

地黃下腳料購(gòu)自安徽亳州周邊中藥加工企業(yè)(15批次地黃邊角碎料及破碎組織,按質(zhì)量等比例混合,粉碎,過(guò)篩后得粉末樣品);鴨免疫球蛋白G(IgG)酶聯(lián)免疫試劑盒(批號(hào)為ED-61022)、鴨免疫球蛋白M(IgM)酶聯(lián)免疫試劑盒(批號(hào)為ED-61087)、鴨白細(xì)胞介素2(IL-2)酶聯(lián)免疫試劑盒(批號(hào)為ED-61008)均購(gòu)自廈門侖昌碩生物科技有限公司;臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(H1850R型,湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司);全自動(dòng)酶標(biāo)儀(Read Max 500F型,上海閃譜生物科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 地黃下腳料煎煮液制備

取混合地黃下腳料粗粉100 g,600 mL水浸泡0.5 h,大火煎沸后改用小火煎煮20 min,過(guò)濾;殘?jiān)屑尤?00 mL水煎煮20 min,過(guò)濾,合并兩次濾液,濃縮至100 mL,即得地黃下腳料煎煮液。

1.2.2 試驗(yàn)動(dòng)物及分組

選取10日齡健康金定鴨120只,靜養(yǎng)4 d后開(kāi)始正式試驗(yàn),15～35日齡為試驗(yàn)期,試驗(yàn)期21 d。鴨隨機(jī)分為5組,每組設(shè)3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)8只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧,試驗(yàn)I～I(xiàn)V組分別在基礎(chǔ)日糧中添加1 g/kg、2 g/kg、3 g/kg、4 g/kg地黃下腳料煎煮液進(jìn)行飼喂。試驗(yàn)鴨采取單層籠養(yǎng)方式,常規(guī)飼養(yǎng)管理。各階段基礎(chǔ)飼糧營(yíng)養(yǎng)水平參考《GB/T 41189-2021蛋鴨營(yíng)養(yǎng)需要量》,其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.2.3 生長(zhǎng)性能測(cè)定

試驗(yàn)所用鴨以每個(gè)重復(fù)為單位,分別于13、27、34日齡斷水?dāng)嗔?統(tǒng)計(jì)各重復(fù)籠鴨的剩料量,分別于14、28、35日齡空腹稱重,計(jì)算鴨平均體重和日均增重、日均采食量、料重比。

1.2.4 免疫活性測(cè)定

28日齡和35日齡時(shí),分別從各組重復(fù)中隨機(jī)挑選2只鴨進(jìn)行頸靜脈采血,血液樣本在室溫靜置2 h后2000 r/min離心20 min,取上清,按試劑盒說(shuō)明測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算各組血清中IgG、IgM、IL-2的質(zhì)量濃度。分別采集上述鴨的胸腺、脾臟、法氏囊,除凈表面結(jié)締組織、脂肪,準(zhǔn)確稱重,計(jì)算免疫器官指數(shù)。免疫器官指數(shù)=臟器鮮重(g)/體重(kg)。

1.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用SPSS 20軟件中的一般線性模型對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單變量方差分析,選用LSD進(jìn)行兩兩比較檢驗(yàn),試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差”表示,P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 地黃下腳料提取物對(duì)鴨生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知,與對(duì)照組相比,試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組鴨在28日齡(飼喂14 d)、35日齡(飼喂21 d)后其平均體重、日均增重、日均采食量差異均不顯著;試驗(yàn)Ⅱ組料重比顯著降低。

表2 鴨生長(zhǎng)性能測(cè)定結(jié)果

2.2 地黃下腳料提取物對(duì)鴨免疫活性的影響

由表3可知,與對(duì)照組相比,基礎(chǔ)日糧中添加地黃下腳料煎煮液,在28日齡(飼喂14d)時(shí),鴨血清IgG變化不顯著;試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組IgM含量分別升高22.70%、15.60%;試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組IL-2含量比對(duì)照組升高44.39%、129.63%、224.07%。35日齡(飼喂21d)時(shí),各試驗(yàn)組IgG、IgM、IL-2含量雖比28日齡(飼喂14d)時(shí)有明顯甚至極顯著增長(zhǎng)(P<0.01),但增速明顯低于對(duì)照組,其中IgM含量低于對(duì)照組的50 %、IL-2含量低于對(duì)照組的60%。

從表4可以看出,基礎(chǔ)日糧中添加地黃下腳料煎煮液時(shí),鴨的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)均比對(duì)照組有所提高。與對(duì)照組相比,添加不同劑量地黃下腳料煎煮液,鴨胸腺指數(shù)在28日齡(飼喂14 d)和35日齡(飼喂21d)均無(wú)顯著性變化;試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組胸腺指數(shù)在28日齡分別提高5.75%、11.37%、21.90%,35日齡分別提高12.32%、13.96%、18.82%;脾臟指數(shù)在28日齡時(shí)分別提高14.80%、20.74%、19.36%,35日齡時(shí)分別提高12.81%、23.45%、23.45%;法氏囊指數(shù)在28日齡時(shí)分別提高26.23%、31.48%、34.69%,35日齡時(shí)分別提高19.06%、24.39%、29.27%。

表4 鴨免疫器官指數(shù)測(cè)定結(jié)果 g/kg

3 討論

3.1 地黃下腳料提取物對(duì)鴨生長(zhǎng)性能的影響

研究表明,飼料中添加適量中藥可提高家禽的生長(zhǎng)性能[9-13]。本研究團(tuán)隊(duì)前期對(duì)15批次地黃下腳料的測(cè)試結(jié)果表明,地黃下腳料中既有較高含量的浸出物和梓醇,又有豐富的粗蛋白、粗脂肪、多糖和礦質(zhì)元素[14]。本試驗(yàn)中,基礎(chǔ)日糧中添加地黃下腳料提取物雖然對(duì)鴨的平均體重、日均增重、日均采食量無(wú)顯著性影響,但添加劑量為2 g/kg時(shí)可顯著降低28日齡和35日齡鴨的料重比,表明添加適量的地黃下腳料提取物可節(jié)約飼料使用量。

3.2 地黃下腳料提取物對(duì)鴨免疫活性的影響

胸腺、脾臟和法氏囊是家禽重要的免疫器官,免疫器官指數(shù)在一定程度上能夠體現(xiàn)出家禽的免疫狀態(tài)。IgG和IgM等免疫球蛋白在血液中的含量是評(píng)價(jià)機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)的一項(xiàng)重要指標(biāo)。IL-2是引起T細(xì)胞增殖的主要細(xì)胞因子,也是評(píng)價(jià)機(jī)體細(xì)胞免疫水平的重要指標(biāo)。大量研究表明,飼料中添加適量的中藥成分可提高家禽的免疫器官指數(shù)[9-13]和血清免疫指標(biāo)[15-16]。地黃煎劑、地黃多糖等均可不同程度地提高動(dòng)物的免疫功能[17-19],但尚少見(jiàn)地黃對(duì)禽類免疫活性影響的研究報(bào)道。本研究表明,基礎(chǔ)日糧中添加地黃下腳料煎煮液,可提高鴨的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù),添加2 g/kg地黃下腳料煎煮液飼喂14 d時(shí)可以提高28日齡鴨血清中IgG、IgM、IL-2的含量。趙歆昀等[20]研究表明,低聚糖可促進(jìn)家禽胸腺、法氏囊等免疫器官的發(fā)育。地黃下腳料中較高的水蘇糖和蔗糖等低聚糖含量可能是導(dǎo)致鴨免疫器官指數(shù)升高的原因[19]。

4 結(jié)論

鴨基礎(chǔ)日糧中添加2 g/kg地黃下腳料煎煮液,可顯著降低料重比,顯著提高鴨脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)以及血清中IgM、IL-2的含量,提高鴨的免疫活性。