路麗　張洪坤　黃玉瑤　郭長達(dá)　高貫彪　郝建新

摘要［目的］研究不同產(chǎn)地不同等級半枝蓮藥材中有效成分的質(zhì)量情況，首次結(jié)合灰色關(guān)聯(lián)度法綜合評價半枝蓮藥材等級規(guī)格內(nèi)涵。［方法］采用高效液相色譜法測定不同產(chǎn)地不同等級半枝蓮藥材樣品中野黃芩苷含量，紫外-可見分光光度法測定總黃酮含量，同時以水溶性浸出物、醇溶性浸出物、葉占比作為評價指標(biāo)，采用相關(guān)性分析等級與有效成分的關(guān)聯(lián)性，并結(jié)合灰色關(guān)聯(lián)度法綜合評價半枝蓮藥材等級規(guī)格內(nèi)涵。［結(jié)果］葉占比、水溶性和醇溶性浸出物、野黃芩苷、總黃酮與等級均呈不同程度的正相關(guān)（P<0.05），而總灰分與等級呈顯著負(fù)相關(guān)（P<0.01），進(jìn)而說明等級越高質(zhì)量越好。一等半枝蓮的相對關(guān)聯(lián)度除了安徽A-1的為0.366，其余為0.417～0.710，統(tǒng)貨的相對關(guān)聯(lián)度除了基地A-2和湖南A-2的相對關(guān)聯(lián)度在0.400以上，其余為0.300～0.386，總體顯示一等半枝蓮的排名基本靠前。同產(chǎn)地的一等半枝蓮的相對關(guān)聯(lián)度均高于統(tǒng)貨，整體顯示一等半枝蓮藥材質(zhì)量優(yōu)于統(tǒng)貨，表明等級越高的內(nèi)在質(zhì)量越好。［結(jié)論］首次建立了評價半枝蓮藥材等級規(guī)格質(zhì)量的模型，詮釋了半枝蓮等級越高內(nèi)在質(zhì)量越好的內(nèi)涵，為半枝蓮藥材等級內(nèi)涵的評價提供一種新的評價方法。

關(guān)鍵詞半枝蓮；灰色關(guān)聯(lián)度法；等級規(guī)格；相對關(guān)聯(lián)度；野黃芩苷；總黃酮；葉占比

中圖分類號R282.5文獻(xiàn)標(biāo)識碼A

文章編號0517-6611（2023）11-0132-06

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.11.033開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Evaluation of the Connotation of Grades and Specifications of Scutellaria barbata Based on the Grey Relational Degree Method

LU Li ZHANG Hong-kun HUANG Yu-yao et al（1.Bozhou Huqiao Pharmaceutical Co.， Ltd.， Bozhou， Anhui 236800;2.Sichuan Haoyun Pharmaceutical Co.， Ltd.， Guangyuan， Sichuan 628017）

Abstract［Objective］ To study the quality of effective components in Scutellaria barbata from different producing areas and different grades， and to comprehensively evaluate the connotation of grade specification of Scutellaria barbata in combination with the grey correlation method for the first time.［Method］The scutellarin content in Scutellaria barbata samples of different grades from different producing areas was determined by high performance liquid chromatography， and the content of total flavonoids was determined by UV-vis spectrophotometry. At the same time， the content of water-soluble extract， alcohol soluble extract and leaf proportion were used as evaluation indicators，the correlation between grades and active ingredients was analyzed by correlation， and the connotation of grades and specifications of Scutellaria barbata was comprehensively evaluated in combination with the grey correlation method.［Result］ Leaf proportion， water-soluble and alcohol-soluble extracts， scutellarin and total flavonoids were positively correlated with grade （P<0.05）， while total ash was significantly negatively correlated with grade （P<0.01）， further indicating that the higher the level， the better the quality. The relative correlation degree of first-class Scutellaria barbata was 0.417-0.710 except for Anhui A-1， which was 0.366.The relative correlation degree of unified goods was 0.300-0.386 except that the relative correlation degree of base A-2 and Hunan A-2 was above 0.40. The relative correlation degree of the first-class Scutellaria barbata of the same origin was higher than that of the standard products， and the overall quality of the first-class Scutellaria barbata was better than that of the standard products， indicating that the higher the level， the better the internal quality.［Conclusion］ For the first time， a model for evaluating the grade specification quality of Scutellaria barbata was established， which explained the connotation that the higher the grade of Scutellaria barbata was， the better the quality was， and provided a new method for the evaluation of the grade connotation of Scutellaria barbata.

Key wordsScutellaria barbata;Grey correlation degree method;Grade specification;Relative correlation degree;Scutellarin;Total flavonoids;Leaf proportion

半枝蓮為唇形科植物半枝蓮（Scutellaria barbata D.Don）的干燥全草［1］，夏季、秋季莖葉茂盛時采挖，味辛、苦，寒，歸肺、肝、腎經(jīng)，具有清熱解毒、化瘀利尿的功能。近代藥理學(xué)研究表明半枝蓮具有抗腫瘤、抗病原、抑菌、解熱、保肝等活性，臨床用于治療各種癌癥、肝炎、疔瘡腫毒、咽喉腫痛、跌撲傷痛、水腫、黃疸、毒蛇咬傷等病，療效確切［2-6］。

半枝蓮的商品規(guī)格等級歷來研究較少，市面上也無等級劃分標(biāo)準(zhǔn)，僅有部分文獻(xiàn)記載。其中半枝蓮的規(guī)格質(zhì)量要求是：統(tǒng)貨，足干，常纏結(jié)成團(tuán)，莖細(xì)，方柱形，暗紫色或棕色；葉片皺縮，暗綠或灰綠色；氣微，味微苦；無雜質(zhì)，無泥沙，無枯死草，無霉壞［7］。半枝蓮商品均為統(tǒng)貨，不分等級。但以身干、莖葉色綠、根黃、洗凈泥沙雜質(zhì)、味苦者為佳［8］；據(jù)康美中藥網(wǎng)顯示，半枝蓮商品以頭茬、二茬和統(tǒng)貨3個規(guī)格進(jìn)行銷售；據(jù)中藥材天地網(wǎng)顯示，半枝蓮藥材以頭茬全草和二茬全草2個規(guī)格進(jìn)行銷售。該研究首次對半枝蓮的等級進(jìn)行劃分并對不同產(chǎn)地不同等級樣品的內(nèi)在質(zhì)量進(jìn)行研究，首次結(jié)合灰色關(guān)聯(lián)度法綜合評價半枝蓮藥材等級規(guī)格內(nèi)涵，為半枝蓮藥材等級規(guī)格內(nèi)涵的評價提供一種新的評價方法。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1儀器。MS603S型電子天平（d=1 mg，Mettler Toledo）；XS204型電子天平（d=0.1 mg，Mettler Toledo）；MX5型電子天平（d=1 μg，Mettler Toledo）；高速多功能粉碎機(jī)（RHP-100型，浙江永康市榮浩工貿(mào)有限公司）；電子萬用爐（DL-1，北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）；程控式箱式電爐（SXL-1208，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；HWS28/HWS26型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；電熱套（500 mL，海寧市新華醫(yī)療器械廠）；DHG-9245A型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；Agilent-1200型高效液相色譜儀［安捷倫科技（中國）有限公司］；TU-1901雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。

1.1.2試藥。甲醇（AR，170212-2，西隴科學(xué)股份有限公司）；乙醇（AR，151024-2，西隴科學(xué)股份有限公司）；石油醚（60～90 ℃，AR，20160801-2，廣州化學(xué)試劑廠）；醋酸（AR，20150601-2，廣州化學(xué)試劑廠）；甲醇（色譜純，Merck）；磷酸（色譜純，阿拉?。?；野黃芩苷（110842-201508，中國食品藥品檢定研究院，含量以91.3%計）。

1.1.3樣品。收集亳州市滬譙藥業(yè)有限公司的安徽省壽縣半枝蓮種植基地的半枝蓮藥材以及其他不同產(chǎn)地的半枝蓮藥材樣品50批，均經(jīng)亳州市滬譙藥業(yè)有限公司張洪坤副主任中藥師鑒定為唇形科植物半枝蓮（Scutellaria barbata D.Don）的干燥地上部分。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1葉占比的測定。此次研究收集不同產(chǎn)地半枝蓮藥材共50批樣品，將不同產(chǎn)地每批半枝蓮分別按不同藥用部位進(jìn)行人工挑選，記錄各批次不同等級規(guī)格半枝蓮藥材中葉占比數(shù)據(jù)。

1.2.2總灰分含量測定。按《中國藥典》2020年版一部半枝蓮檢查項(xiàng)下總灰分測定方法［1］（通則2302）測定半枝蓮不同等級規(guī)格樣品的總灰分含量。

1.2.3浸出物含量測定。分別對半枝蓮不同等級規(guī)格樣品進(jìn)行測定其水溶性浸出物和醇溶性浸出物的含量。水溶性浸出物含量按照《中國藥典》2020年版四部通則2201項(xiàng)下水溶性浸出物測定法的熱浸法測定。醇溶性浸出物含量按照《中國藥典》2020年版四部通則2201項(xiàng)下醇溶性浸出物測定法的熱浸法測定，用稀乙醇作溶劑。

1.2.4總黃酮含量測定。按《中國藥典》2020年版一部半枝蓮【含量測定】項(xiàng)下總黃酮的測定法測定半枝蓮不同等級規(guī)格樣品的總黃酮含量。

1.2.5野黃芩苷含量測定。按《中國藥典》2020年版一部半枝蓮【含量測定】項(xiàng)下野黃芩苷的測定法測定半枝蓮不同等級規(guī)格樣品的野黃芩苷含量。

（1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。色譜柱為YMC Hydrosphere C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇-水-醋酸（35∶61∶4）為流動相；檢測波長為335 nm。理論板數(shù)按野黃芩苷峰計算應(yīng)不低于1 500。

（2）對照品溶液的制備。取野黃芩苷對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1 mL含80 μg的溶液，即得。

（3）供試品溶液的制備。取本品粉末（過三號篩）約1 g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚（60～90 ℃）提取至無色，棄去醚液，藥渣揮去石油醚，加甲醇繼續(xù)提取至無色，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取25 mL，蒸干，殘渣用20%甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

（4）含量測定。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

2結(jié)果與分析

2.1半枝蓮藥材不同等級樣品的各指標(biāo)測定不同產(chǎn)地樣品主要依據(jù)莖表面顏色和葉占比分為一等和統(tǒng)貨，其中莖表面棕綠色少有暗紫色，葉多者為一等；莖表面暗紫色或棕綠色，葉不限定者為統(tǒng)貨。半枝蓮不同等級樣品的葉占比、總灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物、總黃酮、野黃芩苷各項(xiàng)指標(biāo)測定結(jié)果見表1。由表1可知，一等半枝蓮藥材在葉占比、水溶性浸出物和醇溶性浸出物含量、野黃芩苷和總黃酮含量的平均值均高于統(tǒng)貨規(guī)格，一等的總灰分含量均值低于統(tǒng)貨，整體表現(xiàn)出一等半枝蓮藥材質(zhì)量優(yōu)于統(tǒng)貨。

2.2半枝蓮藥材不同等級樣品各指標(biāo)測定結(jié)果的正態(tài)分布及相關(guān)性分析將50批半枝蓮樣品的葉占比、總灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物、總黃酮、野黃芩苷各項(xiàng)指標(biāo)測定結(jié)果輸入IBM SPSS Statistics 22軟件，利用正態(tài)分布曲線圖進(jìn)行輔助分析，并對各項(xiàng)指標(biāo)與等級之間進(jìn)行相關(guān)性分析，其中符合正態(tài)分布的指標(biāo)采用Pearson相關(guān)分析，不符合正態(tài)分布的指標(biāo)采用Spearman相關(guān)分析。各項(xiàng)指標(biāo)的正態(tài)分布曲線圖見圖1，相關(guān)性分析結(jié)果見表2。

從各指標(biāo)正態(tài)分布曲線圖（圖1）和相關(guān)性分析結(jié)果（表2）可以看出，葉占比、水溶性浸出物和醇溶性浸出物數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，采用Pearson相關(guān)性分析相應(yīng)指標(biāo)與等級之間的關(guān)聯(lián)性；總灰分、野黃芩苷和總黃酮數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，采用Spearman 相關(guān)性分析相應(yīng)指標(biāo)與等級之間的關(guān)聯(lián)性。

各項(xiàng)指標(biāo)與半枝蓮藥材等級的相關(guān)性分析結(jié)果（表2）顯示，葉占比、水溶性浸出物、醇溶性浸出物、野黃芩苷和總黃酮與等級均呈不同程度的正相關(guān)，表明等級越高相關(guān)指標(biāo)含量也越高，其中野黃芩苷和水溶性浸出物與等級呈中等程度的正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.506和0.422，葉占比、醇溶性浸出物和總黃酮與等級呈弱的正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.353、0.316、0.301。而總灰分與等級呈中等程度的負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為-0.595，即等級越高總灰分含量越低。

2.3灰色關(guān)聯(lián)度分析

2.3.1樣品數(shù)據(jù)集建立。該研究以半枝蓮的5種測定指標(biāo)（葉占比、水溶性浸出物、醇溶性浸出物、野黃芩苷和總黃酮），每個產(chǎn)地各選擇一批一等和統(tǒng)貨樣品建立半枝蓮等級規(guī)格質(zhì)量的灰色模式識別數(shù)據(jù)集，數(shù)據(jù)集樣品包括每個產(chǎn)地的A-1和A-2樣品，共16批。

2.3.2原始數(shù)據(jù)規(guī)格化處理。

2.3.3關(guān)聯(lián)度計算。

2.3.4定義并計算相對關(guān)聯(lián)度。

3結(jié)論與討論

該研究首次進(jìn)行半枝蓮藥材的等級規(guī)格質(zhì)量研究，采用相關(guān)性分析等級與內(nèi)在質(zhì)量的關(guān)聯(lián)性，得出葉占比、水溶性浸出物、醇溶性浸出物、野黃芩苷和總黃酮與等級均呈一定程度的正相關(guān)，即等級越高有效成分含量也越高；而總灰分與等級呈負(fù)相關(guān)，即等級越高總灰分越低，進(jìn)而也說明等級越高質(zhì)量越好。并首次結(jié)合灰色關(guān)聯(lián)度法綜合評價半枝蓮藥材等級規(guī)格內(nèi)涵，多角度多方面客觀評價了不同等級半枝蓮藥材內(nèi)在質(zhì)量，綜合評價顯示半枝蓮藥材一等的質(zhì)量優(yōu)于統(tǒng)貨。

結(jié)合課題組前期對半枝蓮不同藥用部位的研究顯示葉子的主要指標(biāo)成分含量明顯高于其他藥用部位，其次是全草用藥［12］，所以為了控制半枝蓮藥材質(zhì)量優(yōu)質(zhì)，建議對半枝蓮選貨藥材的葉占比進(jìn)行限度規(guī)定，從而保障半枝蓮藥材的更優(yōu)質(zhì)。該研究結(jié)果很好地詮釋了半枝蓮藥材等級越高內(nèi)在質(zhì)量越好的內(nèi)涵，為半枝蓮藥材的等級規(guī)格制定提供了參考。

灰色系統(tǒng)作為對模糊系統(tǒng)研究的有效手段已被廣泛應(yīng)用，近些年也被應(yīng)用于對中藥材質(zhì)量和商品規(guī)格質(zhì)量的評價［13-17］?；疑到y(tǒng)是既包含已知信息又包含未知信息的系統(tǒng)；同時灰色關(guān)聯(lián)度模型對數(shù)據(jù)容量和概率分布沒有嚴(yán)格要求，它只要求較少的原始數(shù)據(jù)，便可充分利用這些已知數(shù)據(jù)，去尋找體系中的規(guī)律性［11］?；诨疑到y(tǒng)以上特點(diǎn)，該研究以相對關(guān)聯(lián)度為測度，建立評價半枝蓮藥材等級規(guī)格質(zhì)量的模型，為半枝蓮藥材等級規(guī)格內(nèi)涵的評價提供一種新的評價方法。

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