亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        雞成纖維細胞生長因子家族生物信息學特性及表達調(diào)控

        2023-06-28 02:04:20曹玉珠賈其輝邢雨欣夏天王丹丹張珂王陽陽田亞東康相濤劉小軍李紅
        河南農(nóng)業(yè)大學學報 2023年3期
        關鍵詞:周齡家族位點

        曹玉珠, 賈其輝, 邢雨欣, 夏天, 王丹丹, 張珂,王陽陽, 田亞東,2,3, 康相濤,2,3, 劉小軍,2,3, 李紅,2,3

        (1.河南農(nóng)業(yè)大學動物科技學院,河南 鄭州 450046;2.河南省家禽育種國際聯(lián)合實驗室,河南 鄭州 450046;3.河南省雞種質(zhì)資源創(chuàng)新與利用重點實驗室,河南 鄭州 450046)

        成纖維細胞生長因子[1-2](fibroblast growth factor, FGF)是一種能夠調(diào)節(jié)細胞增殖和分化的多肽,由多個受體和配體組成,廣泛分布于機體多個組織和器官中[3]。FGF家族作為多功能蛋白家族,對不同類型的細胞作用不同,因此也被稱為混雜生長因子[4-5]。在哺乳動物上FGF家族有23個成員,各成員之間具有一定的序列同源性和結構相似性[6]。作為具有多種功能的信號分子,FGF家族參與了多種重要的生物學過程,包括生長發(fā)育[7-10]、血管形成[11-12]、細胞分化[13]、細胞增殖和細胞凋亡[14]、調(diào)節(jié)鈣磷平衡[15]、葡萄糖代謝平衡[16]及組織損傷修復[17-18]等。目前,FGF家族成員的相關研究主要集中在哺乳動物上,而對于該家族成員在雞上的生物學特性研究較為少見。通過整合相關肝臟轉錄組數(shù)據(jù)和基因組數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn),雞FGF家族存在19個成員[19]。在此基礎上,對雞FGF家族19個成員進行系統(tǒng)研究,利用氨基酸序列分析構建系統(tǒng)發(fā)育進化樹、預測保守基序和蛋白質(zhì)結構;基于基因組重測序數(shù)據(jù),利用該家族成員上的遺傳變異位點對10個雞品種的形成分類貢獻進行了主成分分析;利用實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)技術分析了FGF家族在固始雞脂質(zhì)代謝相關器官上的表達分布,以及在20周齡和30周齡盧氏雞肝臟的表達水平變化;分別在細胞水平和活體水平研究了雌激素對雞肝臟FGF表達的影響;將FGF19基因上的遺傳變異與固始雞不同階段的產(chǎn)蛋量進行了關聯(lián)分析。本研究為進一步探究FGF家族相關成員的功能奠定了重要基礎。

        1 材料與方法

        1.1 試驗樣品及重測序數(shù)據(jù)收集

        試驗對象(固始雞)來自河南農(nóng)業(yè)大學原陽種質(zhì)資源場,在相同飼養(yǎng)管理環(huán)境下,自由采食和飲水。將43周齡體質(zhì)量相近的健康固始雞(n=8)頸部放血處死,采集肝臟、腎臟、卵巢、腹脂和十二指腸,放在液氮中,存于-80 ℃冰箱,用于基因組織表達譜分析。試驗過程均在河南農(nóng)業(yè)大學機構動物護理和使用委員會(Institutional animal care and use committee, IACUC)(編號 11-0085)批準下進行。

        20周齡(n=8)和30周齡(n=8)的盧氏雞肝臟及對應的轉錄組數(shù)據(jù)由河南省雞種質(zhì)資源創(chuàng)新與利用重點實驗室(以下簡稱實驗室)保存提供[19]。雌激素處理組(n=8)和對照組(n=8)10周齡盧氏雞的肝臟及對應的高通量數(shù)據(jù)[20]用于基因表達驗證。

        重測序數(shù)據(jù)包括肉雞(科寶KB,n=30)、蛋雞(白來航WL和洛島紅RIR,n=20)、地方雞(固始雞GS、盧氏雞LS、淅川烏骨雞XCBB和正陽三黃ZYSH,n=40)和野生型雞(紅原雞RJF,n=5)。其中,KB重測序數(shù)據(jù)由中國農(nóng)業(yè)大學提供,WL、RIR和RJF重測序數(shù)據(jù)從公共數(shù)據(jù)集獲取[21],其他4個河南省地方品種重測序數(shù)據(jù)由實驗室前期測序所得[22],用于主成分分析。

        900只固始雞的重測序數(shù)據(jù),以及對應的21~25周齡、26~30周齡、31~35周齡、36~43周齡和21~43周齡不同階段的產(chǎn)蛋數(shù)均由實驗室保存提供[23],用于基因的遺傳變異與表型的關聯(lián)分析。

        1.2 雞肝癌細胞系培養(yǎng)與處理

        使用10%完全培養(yǎng)基(10%胎牛血清、1%青霉素/鏈霉素雙抗、89%DMEM/F12培養(yǎng)基)在25 cm2培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)雞肝癌細胞系(leghorn male hepatoma cell line, LMH),待細胞融合80%時,采用細胞計數(shù)的方法以1×106個·mL-1的細胞密度接種至12孔板中,放入37 ℃、體積分數(shù)5% CO2和95%空氣的標準培養(yǎng)箱培養(yǎng)6 h,待細胞融合度為70%~80%時,用PBS液洗滌1次,用不含雙抗的完全培養(yǎng)基代替完全培養(yǎng)基。根據(jù)徐春林等[24]研究結果,選取最佳處理濃度100 nmol·L-1的17β-雌二醇(Sigma,美國)處理雞肝癌細胞系LMH,對照組用等量的無水乙醇處理,24 h后用Trizol裂解液收集細胞,存于-80 ℃冰箱用于后續(xù)試驗。

        1.3 生物信息學分析

        利用NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)下載人、鼠、雞、斑馬魚、非洲爪蟾、火雞和野鴨7個物種FGF家族的氨基酸序列。使用在線軟件MEME(https://meme-suite.org/meme/tools/meme)對雞FGF家族進行氨基酸保守基序分析,保守基序個數(shù)設置為10,其余參數(shù)采用默認值;利用MEGA11.0軟件中的鄰接法構建不同物種間FGF家族系統(tǒng)發(fā)育樹,基于ClustalW氨基酸序列比對結果,檢驗算法中Bootstrap method設置為2 000,其余參數(shù)采用默認值;使用SMART在線軟件(http://smart.embl.de/smart/set_mode.cgi?NORMAL=1)對雞FGF家族各成員的蛋白質(zhì)功能結構域進行預測。

        1.4 引物設計及合成

        參照NCBI數(shù)據(jù)庫中公布的雞FGF1~FGF10、FGF12~FGF14、FGF16、FGF18~FGF20、FGF22~FGF23基因和內(nèi)參基因GAPDH(GenBank)的mRNA序列,采用BLAST-Primer在線軟件設計qRT-PCR引物(表1)。引物由尚亞生物公司(上海)合成。

        表1 qRT-RCR引物信息

        1.5 總RNA提取和反轉錄

        參照Trizol試劑盒(南京,諾唯贊)說明書提取器官和細胞總RNA,分別利用瓊脂糖凝膠電泳和NanoDrop 2000紫外分光光度計檢測RNA質(zhì)量,并稀釋至相同的濃度,按照PrimeScriptTM RT reagent Kit(南京,諾唯贊)說明書反轉錄合成cDNA,-20 ℃保存。

        1.6 qRT-PCR反應

        根據(jù)QuantiFast SYBR Green PCR試劑盒(南京,諾唯贊)說明書,以GAPDH基因作為內(nèi)參基因,利用qRT-PCR技術檢測基因的相對表達水平。qRT-PCR反應體系:2×QuantiFast SYBR Green Master Mix 5 μL,10 μmol·L-1上、下游引物各0.5 μL,cDNA 1 μL,用無RNase水補足至 10 μL。qRT-PCR反應程序:95 ℃預變性5 min;95 ℃變性30 s,最適溫度60 ℃退火30 s,72 ℃延伸 30 s,共35個循環(huán);72 ℃終延伸10 min。

        1.7 數(shù)據(jù)分析

        使用2-ΔΔct方法計算基因相對表達量。使用SPSS軟件對基因驗證的定量數(shù)據(jù)進行單因素方差分析和t檢驗,P<0.05表示組間差異顯著,P>0.05表示組間無差異,使用GraphPad Prism軟件作圖。

        利用R軟件中的FactoMine和Factoextra包對FGF家族的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism,SNP)位點進行主成分分析并繪圖。利用SPSS軟件中的混合線性模型進行關聯(lián)分析,結果以平均值±標準誤表示,不同基因型之間采用成對比較,顯著性用小寫字母表示;單變量檢驗顯著性用P值表示,P<0.01為差異極顯著,P<0.05為差異顯著,P>0.05為無差異。

        2 結果與分析

        2.1 雞FGF家族系統(tǒng)發(fā)育進化樹

        為探討雞FGF家族的進化關系,利用NCBI數(shù)據(jù)庫公布的人、鼠、雞、斑馬魚、非洲爪蟾、火雞和野鴨7個物種FGF家族的氨基酸序列進行親緣進化分析。如圖1所示,不同物種的FGF家族成員聚類為3個分支。其中,FGF3、FGF7、FGF10和FGF22聚在1個分支,FGF15、FGF19、FGF21和FGF23聚在1個分支,其余成員聚在1個分支中。

        FGF1~FGF23為FGF家族氨基酸序列;英文為7個不同物種(人、鼠、雞、斑馬魚、非洲爪蟾、火雞和野鴨)。

        2.2 雞FGF家族的保守基序分析

        利用在線軟件MEME對雞FGF家族成員進行了保守基序預測,如圖2所示。FGF家族有10個保守基序,Motif 1(SVAVGVVAIKGVKSGLYLAMNKKGKLYGS)保守程度最高,為FGF家族成員共有;Motif 2和Motif 3保守程度較高;FGF22基因不存在Motif 2,FGF18基因不存在Motif 3;FGF22和FGF23基因不存在Motif 4;8個成員含有Motif 5,10個成員含有Motif 6,12個成員含有Motif 7。其中,Motif 8僅存在于FGF12、FGF13和FGF14基因中,Motif 9僅存在于FGF7和FGF10基因中,而Motif 10僅存在于FGF9、FGF16和FGF20基因中。

        圖2 雞FGF家族保守基序預測

        2.3 雞FGF家族蛋白功能結構域分析

        利用SMART軟件對FGF家族的氨基酸序列進行蛋白功能結構域預測,進一步探究雞FGF家族潛在的生物學功能,結果如圖3-A所示。FGF家族成員都含有1個相同的核心區(qū)域(FGF),其中FGF6、FGF7和FGF10具有跨膜區(qū)。進一步探究雞2個內(nèi)分泌型成員FGF19和FGF23與人和鼠之間的結構相似性,結果如圖3-B所示。人、鼠和雞的FGF19、FGF23都有共同的結構域,但只有人FGF19有跨膜區(qū)。

        A:雞FGF家族功能結構域;B:FGF19和FGF23在人、鼠、雞上的功能結構域分析;數(shù)字表示氨基酸位置。

        2.4 雞FGF家族在不同品種間的主成分分析

        基于實驗室保存的10個品種雞的基因組重測序數(shù)據(jù)[22],進一步對雞FGF家族各成員的遺傳變異位點進行分析。對雞FGF家族各成員所有SNP位點進行主成分分析,選擇總方差解釋31.89%的前2的2個主成分(PC1、PC2)使用R繪圖。如圖4所示,雞FGF家族成員所有的SNP位點可以明顯將肉雞和蛋雞品種分開。

        圖4 FGF家族所有SNP位點的主成分分析

        2.5 雞FGF家族基因在不同器官中表達分布

        為了分析雞FGF家族成員的表達模式,對其在43周齡固始雞的肝臟、腎臟、卵巢、腹脂和十二指腸中的mRNA表達水平進行分析。如圖5所示,雞FGF家族基因在檢測的各個器官中均有表達。其中,FGF4和FGF23基因在肝臟中表達水平較高;FGF12基因在腎臟表達較高;FGF20基因在卵巢中表達水平較高;FGF1、FGF6、FGF7、FGF9、FGF10、FGF13、FGF14和FGF19基因在十二指腸中表達水平較高;FGF2、FGF3、FGF5、FGF8、FGF12、FGF16、FGF18和FGF22基因在腹脂中表達水平較高。

        圖5 雞FGF家族基因在不同器官中的表達分析

        2.6 雞FGF家族基因在雞肝臟中的表達模式

        使用實驗室前期盧氏雞產(chǎn)蛋前期(20周齡)和產(chǎn)蛋高峰期(30周齡)肝臟轉錄組數(shù)據(jù),探討雞FGF家族基因在雞肝臟中的表達特性,如表2所示。轉錄組數(shù)據(jù)中有12個FGF家族基因在雞肝臟中表達。其中,FGF19和FGF23基因在30周齡的FPKM值極顯著高于20周齡。利用qRT-PCR進一步在盧氏雞20周齡和30周齡的雞肝臟中對FGF19和FGF23基因表達水平進行驗證,如圖6所示。FGF19基因在30周齡雞肝臟中的相對于GADPH表達量顯著高于20周齡,而FGF23基因在20周齡和30周齡雞肝臟中相對于GADPH表達量無顯著變化,但在30周齡有升高趨勢,這與轉錄組結果一致。

        A: FGF19和FGF23基因在轉錄組數(shù)據(jù)中的變化倍數(shù)(20周齡/30周齡);B、C:FGF19和FGF23基因在20周齡和30周齡盧氏雞肝臟中的相對表達水平。誤差線表示標準差,*表示P<0.05,NS表示P>0.05。

        表2 雞FGF家族基因在盧氏雞肝臟轉錄組測序數(shù)據(jù)中的FPKM值

        2.7 17β-雌二醇對雞FGF家族基因表達的影響

        使用實驗室前期雌激素處理個體的肝臟高通量數(shù)據(jù),探討雌激素對雞FGF家族基因的表達特性。在高通量數(shù)據(jù)中查找發(fā)現(xiàn)(圖7-A),雌激素處理組FGF19和FGF23基因的表達豐度顯著高于對照組。為了進一步驗證雌激素對雞FGF家族基因表達的影響,用100 nmol·L-1的17β-雌二醇處理LMH細胞系24 h。qRT-PCR分析結果表明,雌激素可顯著上調(diào)雌激素應答標志基因(ApoVLDLⅡ)的表達,表明外源雌激素發(fā)揮了生物學功能(圖7-B)。與對照組相比,雌激素處理組FGF19基因的表達水平顯著上調(diào),而FGF23基因的表達顯著下調(diào)(圖7-C~D)。

        A:FGF19和FGF23基因在雌激素處理個體肝臟高通量數(shù)據(jù)中的變化倍數(shù)(雌激素處理組/對照組);B:雌激素處理LMH對標志基因ApoVLDLII表達的影響;C,D:分別表示雌激素處理LMH對FGF19和FGF23基因表達的影響。誤差線表示標準差,**表示P<0.01,***表示P<0.001。

        2.8 雞FGF19基因遺傳變異位點與不同階段產(chǎn)蛋量的關聯(lián)分析

        使用實驗室保存的900只固始雞重測序數(shù)據(jù)對FGF19基因進行分析,獲得5個SNP位點,分別是rs17814792、rs17816980、rs17814792、rs17814446和rs17811770,除了rs17814792和rs17814792在固始雞群體中有2種基因型外,其余3個SNPs位點均有3種基因型存在(表3)。將這5個位點的不同基因型分別與固始雞不同階段的產(chǎn)蛋數(shù)進行關聯(lián)分析。如表4—表8所示,rs17814792與21~25周齡和21~43周齡產(chǎn)蛋量存在極顯著相關、與26~30周齡產(chǎn)蛋量存在顯著相關,rs17816980與36~43周齡產(chǎn)蛋量存在極顯著相關,rs17817557與21~25周齡和21~43周齡產(chǎn)蛋量存在極顯著相關、與26周齡~30周齡產(chǎn)蛋量存在顯著相關,rs17814446與不同時期的產(chǎn)蛋量不差異,rs17811770與21~25周齡和21~43周齡產(chǎn)蛋量存在顯著差異。

        表3 FGF19基因上SNP位點信息

        表4 FGF19基因遺傳變異位點(rs17814792)與固始雞產(chǎn)蛋量的關聯(lián)分析

        表5 FGF19基因遺傳變異位點(rs17816980)與固始雞產(chǎn)蛋量的關聯(lián)分析

        表6 FGF19基因遺傳變異位點(rs17817557)與固始雞產(chǎn)蛋量的關聯(lián)分析

        表7 FGF19基因遺傳變異位點(rs17814446)與固始雞產(chǎn)蛋量的關聯(lián)分析

        表8 FGF19基因遺傳變異位點(rs17811770)與固始雞產(chǎn)蛋量的關聯(lián)分析

        3 結論與討論

        FGF家族是高度保守的多基因家族,迄今為止已經(jīng)在多個物種中被鑒定,在個體發(fā)育中起著重要作用,可以調(diào)節(jié)動物的發(fā)育和生理過程[25-26]。目前,FGF家族成員在人,小鼠、牛、絨山羊、斑馬魚、擬南芥和人參等多個動植物中已有研究。本研究首次對雞FGF家族的生物學特性及雌激素對該家族成員的表達調(diào)控進行了系統(tǒng)研究。

        本研究利用雞基因組數(shù)據(jù)庫中已注釋的19個FGF家族基因進行生物信息學分析發(fā)現(xiàn),該家族均具有SVAVGVVAIKGVKSGLYLAMNKKGKLYGS的保守序列和1個相似的FGF功能結構域。此外,FGF19在人上有跨膜區(qū),而在雞和小鼠上沒有跨膜區(qū);在系統(tǒng)進化樹分析中,FGF19在人、小鼠和雞不在同一小支。這表明FGF19可能在3個物種中的生物學功能不同。

        為更深一步了解FGF家族基因成員,利用10個雞品種的重測序數(shù)據(jù)對該家族基因成員進行主成分聚類分析,19個基因在基因組范圍全部SNP位點可以將蛋雞和肉雞分類,推測該家族可能對雞繁殖或者生長性狀形成有重要的影響。ANDERSON等[27]研究表明,FGF3和FGF4基因在小鼠的發(fā)育過程中起著重要的作用。FGF4基因在肝臟表達量最高,且FGF4基因能夠增強脂肪酸氧化、減少肝細胞凋亡和減輕肝損傷[28],影響肝臟脂代謝。FGF16基因在腹脂中表達量較為豐富。HUANG等[29]研究發(fā)現(xiàn),山羊FGF16基因通過受體FGFR4表達介導脂肪細胞分化,暗示FGF16基因在脂肪形成中發(fā)揮著一定作用。PORTELA等[30]在健康牛閉鎖卵泡的研究中,檢測到黃體細胞FGF18基因高表達,推測FGF18基因可能參與顆粒細胞的凋亡。卵巢發(fā)育相關研究表明,FGF2、FGF7以及FGF10等基因具有促進有絲分裂的作用。PORTELA等[31]證明了FGF18基因能促進細胞凋亡,最終導致卵泡閉鎖。

        目前,已經(jīng)報道了FGF家族各成員在多種動物中各有不同的表達特性[32],具有明顯的器官特異性,說明該家族可能參與不同器官的生長發(fā)育。本研究發(fā)現(xiàn),FGF基因在各器官中均有表達,大部分基因在十二指腸中表達量最高;十二指腸是小腸消化吸收的重要部位,推測其在雞生長發(fā)育中具有重要作用。有研究證明,FGF13和FGF14基因與牛的生長相關,FGF4和FGF23基因在肝臟中表達量較高[7-8]。此外,FGF23基因在哺乳動物的骨中表達量顯著高于其他組織[33-35],在肝臟中表達量極低。FGF23基因在雞的各器官中廣泛分布,肝臟表達量最高,在心臟和腎臟等中表達量相對較低[36]。FGF23基因通過AMPK/乙酰輔酶α羧化酶和ERK1/2胞內(nèi)通路作用于骨骼肌細胞和肝細胞,從而影響游離脂肪酸和脂質(zhì)的代謝過程,間接調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝[37-39]。肝臟是雞脂質(zhì)代謝的中心場所,表明雞FGF23基因在肝臟脂質(zhì)代謝過程中發(fā)揮著重要的作用。

        FGF19基因在基因30周齡雞肝臟中的表達水平顯著高于20周齡,而FGF23基因表達量無顯著變化但在30周齡有上升的趨勢。在產(chǎn)蛋高峰期,雞肝臟中FGF19基因表達量顯著高于產(chǎn)蛋前期。FGF19基因是FGF21和FGF23基因亞家族的成員,該家族成員都是營養(yǎng)代謝的重要調(diào)節(jié)器,對肝素的親和力低,這使得其能夠逃離細胞外基質(zhì),作為內(nèi)分泌激素循環(huán)[40-41]。研究發(fā)現(xiàn),FGF19基因作為一種回腸來源的腸因子,能夠控制膽汁酸代謝[42]。陸江等[43]研究表明,膽汁酸可能抑制脂肪酸的從頭合成,促進肝臟脂肪酸β-氧化,從而降低海蘭褐蛋雞血液和肝臟中的甘油三酯含量。KIR等[44]證明了FGF19基因刺激肝臟蛋白和糖原合成,但不誘導脂肪生成,FGF19基因激活了胰島素獨立的內(nèi)分泌通路,調(diào)節(jié)了肝臟蛋白和糖原代謝。BHATNAGAR等[45]利用肥胖小鼠模型證實了FGF19基因抑制胰島素激活肝臟脂肪酸合成,這是控制肝臟、血液和脂肪中的三酰甘油積累的關鍵過程。KIR等[46]還發(fā)現(xiàn),FGF19基因誘導蛋白質(zhì)和糖原合成并抑制肝臟中的糖異生,對肝臟代謝產(chǎn)生有益的作用。這些表明FGF19基因可能參與雞肝臟脂質(zhì)代謝。對于蛋雞來說,脂肪在肝臟中合成以后,轉化為極低密度脂蛋白定向轉運到肝臟外。極低密度脂蛋白作為卵黃前體物質(zhì)運輸?shù)铰殉矁?nèi),形成卵泡,最終形成蛋黃。主成分分析結果顯示,FGF19基因可以將蛋雞和肉雞分類,且FGF19基因上的5個SNP位點(rs17814446除外)均與固始雞產(chǎn)蛋量顯著相關。這表明FGF19基因可能通過調(diào)控肝臟脂質(zhì)代謝從而影響蛋雞的產(chǎn)蛋性能。

        雌激素是機體代謝的一種重要調(diào)控因子,不僅可以調(diào)控卵黃前體相關合成基因的表達,還可以調(diào)控脂蛋白分解[46]。產(chǎn)蛋期雌激素可促進雞肝中ApoB及其他卵黃前體物的合成。雌激素可上調(diào)青年雞肝臟FGF19和FGF23基因的表達,在細胞水平上驗證雌激素可調(diào)控FGF19和FGF23基因的表達,但雌激素處理LMH細胞后FGF19基因表達量顯著升高,FGF23基因表達量顯著下降。FGF23基因在細胞水平上的結果與高通量數(shù)據(jù)相反,推測FGF23基因在個體和細胞水平上的作用方式不同,具體的作用機制還需進一步研究。

        FGF家族成員在肉雞和蛋雞品種形成中有重要貢獻,各成員在肝臟、腎臟、卵巢、腹脂和十二指腸脂質(zhì)代謝相關器官中均表達。FGF19基因能夠?qū)⒌半u和肉雞進行分類,在雞產(chǎn)蛋高峰期肝臟表達量高于產(chǎn)蛋前期,且與固始雞不同產(chǎn)蛋期產(chǎn)蛋數(shù)顯著相關,暗示FGF19基因?qū)﹄u產(chǎn)蛋性能有重要的作用。本研究結果為進一步研究FGF19基因及其他成員的生物學功能及作用機制奠定基礎。

        猜你喜歡
        周齡家族位點
        渝州白鵝剩余采食量測定及其與飼料利用效率相關性狀的相關分析
        申鴻七彩雉血液生化指標和肌內(nèi)脂肪含量的測定及其相關性分析
        鎳基單晶高溫合金多組元置換的第一性原理研究
        上海金屬(2021年6期)2021-12-02 10:47:20
        CLOCK基因rs4580704多態(tài)性位點與2型糖尿病和睡眠質(zhì)量的相關性
        HK家族崛起
        寧都黃公雞睪丸質(zhì)量與不同周齡第二性征的回歸與主成分分析
        《小偷家族》
        電影(2019年3期)2019-04-04 11:57:18
        二項式通項公式在遺傳學計算中的運用*
        生物學通報(2019年3期)2019-02-17 18:03:58
        皿字家族
        家族中的十大至尊寶
        免费少妇a级毛片人成网| 小13箩利洗澡无码免费视频| 亚洲精品aⅴ无码精品丝袜足| 精品三级久久久久久久| 精品亚洲一区二区在线观看| 2021国产精品视频网站| 国内最真实的xxxx人伦| 国产免费av片在线播放| 色狠狠一区二区三区香蕉| 国产尤物AV尤物在线看| 久久精品国产精品亚洲艾| 久久综合老鸭窝色综合久久| 国产毛片视频一区二区三区在线| 人妻中文字幕在线中文字幕| 成年女人色毛片| 无码熟妇人妻av在线影片| 四虎永久免费影院在线| 中文字幕人成人乱码亚洲| 久久精品国产亚洲av热东京热| 久久久麻豆精亚洲av麻花| av鲁丝一区鲁丝二区鲁丝三区| 一区二区三区国产亚洲网站| 少妇厨房愉情理伦片bd在线观看 | 亚洲一码二码在线观看| 亚洲av高清一区三区三区| av网站大全免费在线观看| 精品国际久久久久999波多野| 亚洲综合色区另类av| 国产日韩久久久精品影院首页| 亚洲乱色视频在线观看| 国产在线91精品观看| 97人人超碰国产精品最新| 国产午夜福利短视频| 国产日韩精品一区二区在线观看播放 | 色视频www在线播放国产人成| 亚洲AVAv电影AV天堂18禁| 日本精品久久不卡一区二区| 成人毛片无码一区二区三区| 天堂sv在线最新版在线| 挑战亚洲美女视频网站| 国产成人综合久久大片|