周 燕,孫乃同,唐云龍△,劉佳琦,李紅葉

1.南京醫(yī)科大學(xué)鹽城臨床醫(yī)學(xué)院/鹽城市第三人民醫(yī)院血液內(nèi)科,江蘇鹽城 224000;2.南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院,江蘇南通 226000

多發(fā)性骨髓瘤(MM)是以骨髓中克隆性漿細(xì)胞惡性增生為主要特征的血液系統(tǒng)惡性腫瘤,好發(fā)于中老年男性,臨床主要表現(xiàn)為骨骼損傷、貧血、腎功能損傷、高鈣血癥和感染等[1-2]。目前臨床多使用蛋白酶體抑制劑硼替佐米等新型靶向藥物對(duì)MM患者進(jìn)行治療,其可特異性結(jié)合抑制26S蛋白酶體,降低促凋亡因子的降解,使腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)程序性細(xì)胞死亡,改善MM患者預(yù)后[3]。近年來(lái)有研究顯示,不同分子細(xì)胞遺傳學(xué)改變的MM患者生存期不同,細(xì)胞遺傳學(xué)檢查在MM患者腫瘤分期和預(yù)后評(píng)估中具有重要作用[4]。CD31是免疫球蛋白超基因家族存在于正常漿細(xì)胞中的抗原之一,可作為CD38的配體參與機(jī)體清除老化中性粒細(xì)胞的過(guò)程,在腫瘤中多呈陽(yáng)性表達(dá)[5]。CD45是一種在白細(xì)胞表面廣泛表達(dá)的大分子跨膜蛋白,是細(xì)胞膜信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程中的關(guān)鍵蛋白分子,主要存在于早期漿細(xì)胞內(nèi),并隨著漿細(xì)胞的成熟表達(dá)逐漸降低,在MM患者漿細(xì)胞中呈低表達(dá)[6]。既往有研究報(bào)道了CD45在初診MM患者的表達(dá)及預(yù)后判斷中的意義[7],但少見(jiàn)CD31與CD45對(duì)初診MM患者臨床分期及預(yù)后評(píng)估價(jià)值的報(bào)道。本研究回顧性分析初診MM患者外周血CD31、CD45表達(dá)與腫瘤分期和預(yù)后的關(guān)系,旨在為MM的臨床診治、病情進(jìn)展及預(yù)后評(píng)估提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年1月至2021年4月鹽城市第三人民醫(yī)院收治的95例初診MM患者為研究對(duì)象,其中男52例,女43例,中位年齡57歲。納入標(biāo)準(zhǔn):符合MM診斷標(biāo)準(zhǔn)[8];均為初次發(fā)病;均接受以硼替佐米為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療方案;臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):合并嚴(yán)重心、肝、腎等臟器功能不全及其他免疫性相關(guān)疾病;接受造血干細(xì)胞移植;合并感染性疾病;合并其他惡性腫瘤;預(yù)計(jì)生存期<1個(gè)月;合并精神性疾病。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)通過(guò),審批號(hào)201612A2。

1.2化療方案 所有研究對(duì)象均接受以硼替佐米為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療方案,包括PAD方案(硼替佐米+阿霉素+地塞米松)和VAD方案(硼替佐米+環(huán)磷酰胺+地塞米松),根據(jù)患者年齡及耐受性調(diào)整藥物劑量。化療4～8個(gè)周期后進(jìn)入維持治療階段,包括來(lái)那度胺+地塞米松方案、沙利度胺+地塞米松方案和單獨(dú)應(yīng)用硼替佐米方案?；煼桨赋掷m(xù)4個(gè)療程。

1.3方法

1.3.1臨床資料 通過(guò)醫(yī)院電子病歷系統(tǒng),收集初診MM患者的一般資料,包括年齡、性別、國(guó)際分期系統(tǒng)(ISS)分期、有無(wú)骨骼損傷等臨床特征和β2微球蛋白(β2-MG)、血紅蛋白(Hb)、肌酐(Cr)、血清鈣(Ca)、乳酸脫氫酶(LDH)水平和骨髓漿細(xì)胞比例。

1.3.2外周血CD31、CD45檢測(cè)及陽(yáng)性評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) 取初診MM患者骨髓標(biāo)本3 mL,加入乙二胺四乙酸二鉀抗凝混勻。取4支檢測(cè)管分別標(biāo)記為測(cè)定管1、測(cè)定管2和對(duì)照管1、對(duì)照管2,向測(cè)定管1、對(duì)照管1中分別加入25 μL特異性單克隆抗體CD31 PerCP-CY5.5、CD56 PE-CY7、CD38 APC-CY7和等量磷酸鹽緩沖液(PBS)溶液,向測(cè)定管2、對(duì)照管2中分別加入25 μL特異性單克隆抗體CD4-FTTC、CD45 RA-PE、CD45 KrO和等量PBS,暗處孵育20 min后均加入1 mL PBS,采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD31、CD45目標(biāo)細(xì)胞群抗原表達(dá)率。檢測(cè)結(jié)果以對(duì)照管為陰性標(biāo)準(zhǔn),以CD31、CD45目標(biāo)細(xì)胞群抗原表達(dá)率超過(guò)20%為陽(yáng)性表達(dá)[9]。

1.3.3隨訪和生存 95例MM患者均通過(guò)門(mén)診或電話方式進(jìn)行隨訪,隨訪截止時(shí)間2022年4月30日,隨訪期1年,隨訪終點(diǎn)為患者死亡或隨訪結(jié)束。統(tǒng)計(jì)CD45陽(yáng)性表達(dá)、陰性表達(dá)患者總生存率和無(wú)進(jìn)展生存率。

2 結(jié) 果

2.1初診MM患者CD31表達(dá)與臨床特征的關(guān)系 根據(jù)外周血CD31表達(dá)情況將患者分為CD31陽(yáng)性表達(dá)78例和CD31陰性表達(dá)17例。CD31陽(yáng)性表達(dá)與初診MM患者年齡、ISS分期、骨骼損傷和骨髓漿細(xì)胞比例有關(guān)(P<0.05);與初診MM患者性別、Hb、Cr、β2-MG、LDH、Ca水平無(wú)關(guān)(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 初診MM患者CD31表達(dá)與臨床特征的關(guān)系

2.2初診MM患者CD45表達(dá)與臨床特征的關(guān)系 根據(jù)外周血CD45表達(dá)情況將患者分為CD45陽(yáng)性表達(dá)30例和CD45陰性表達(dá)65例。CD45陽(yáng)性表達(dá)與初診MM患者年齡、ISS分期、骨骼損傷和骨髓漿細(xì)胞比例有關(guān)(P<0.05);與初診MM患者性別、Hb、Cr、β2-MG、LDH、Ca水平無(wú)關(guān)(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 初診MM患者CD45表達(dá)與臨床特征的關(guān)系

2.3外周血CD31、CD45表達(dá)與初診MM患者ISS分期的相關(guān)性 Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示,外周血CD31、CD45表達(dá)與初診MM患者ISS分期呈正相關(guān)(P<0.05),見(jiàn)表3。

表3 外周血CD31、CD45表達(dá)與初診MM患者ISS分期的相關(guān)性

2.4不同CD31、CD45表達(dá)情況的初診MM患者生存分析 CD31陽(yáng)性表達(dá)的初診MM患者12個(gè)月總生存率為58.69%,低于CD31陰性表達(dá)患者的84.21%,經(jīng)Log-Rank 檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log-Rankχ2=3.932,P=0.047);CD31陽(yáng)性表達(dá)的初診MM患者無(wú)進(jìn)展生存率為15.63%,低于CD31陰性表達(dá)患者的33.33%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log-Rankχ2=10.725,P=0.036)。見(jiàn)圖1。

注:A為CD31表達(dá)與初診MM患者總生存率分析;B為CD31表達(dá)與初診MM患者無(wú)進(jìn)展生存率分析。

CD45陽(yáng)性表達(dá)初診MM患者總生存率為65.52%,低于CD45陰性表達(dá)患者的89.39%,經(jīng)Log-Rank 檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log-Rankχ2=7.813,P=0.005);CD45陽(yáng)性表達(dá)的初診MM患者無(wú)進(jìn)展生存率為16.67%,低于CD45陰性表達(dá)患者的45.45%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log-Rankχ2=5.881,P=0.015)。見(jiàn)圖2。

注:A表示CD45表達(dá)與初診MM患者總生存率分析;B表示CD45表達(dá)與初診MM患者無(wú)進(jìn)展生存率分析。

2.5Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析影響初診MM患者預(yù)后的因素 對(duì)影響初診MM患者預(yù)后的因素進(jìn)行變量賦值,年齡≤60歲=0,>60歲=1;ISS分期Ⅰ～Ⅱ期=0,Ⅲ期=1;無(wú)骨骼損傷=0,有骨骼損傷=1;骨髓漿細(xì)胞比例<30%=0,≥30%=1;CD31陰性表達(dá)=0,CD31陽(yáng)性表達(dá)=1;CD45陰性表達(dá)=0,CD45陽(yáng)性表達(dá)=1。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型結(jié)果顯示,ISS分期Ⅲ期和CD31、CD45陽(yáng)性表達(dá)均為影響初診MM患者總生存率的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型的分析結(jié)果

3 討 論

MM是起源于B細(xì)胞且發(fā)病率僅次于淋巴瘤的惡性克隆性血液系統(tǒng)腫瘤,主要臨床特征為骨髓中漿細(xì)胞異常增殖,使骨髓正常的造血功能遭到嚴(yán)重破壞,引起廣泛骨質(zhì)破壞、感染、腎功能不全和貧血等不良后果[10-11]。MM免疫表型檢測(cè)是區(qū)分正常細(xì)胞和惡性漿細(xì)胞群體及鑒定異?？乖磉_(dá)的可靠方法,可對(duì)患者進(jìn)行免疫分型并定量描述結(jié)果,在其疾病診斷和預(yù)后評(píng)估中應(yīng)用廣泛[12-13]。本研究回顧性分析初診MM患者外周血CD31、CD45表達(dá)與腫瘤分期和預(yù)后的關(guān)系。

本研究結(jié)果顯示,納入的95例初診MM患者中CD31陽(yáng)性表達(dá)占82.11%(78/95),CD45陽(yáng)性表達(dá)占31.58%(30/95)。作為B細(xì)胞分化發(fā)育的終末階段,多數(shù)B細(xì)胞分化抗原在向漿細(xì)胞分化的過(guò)程中出現(xiàn)丟失現(xiàn)象,有研究發(fā)現(xiàn),CD31、CD45等漿細(xì)胞的免疫表型表達(dá)與MM患者腫瘤生物學(xué)行為的抗原表達(dá)異質(zhì)性具有一定的相關(guān)性[14-15]。CD31在部分腫瘤細(xì)胞中具有介導(dǎo)新生血管生成的作用,可降解細(xì)胞外基質(zhì)和血管外基膜,并激活基質(zhì)金屬蛋白酶,通過(guò)出芽方式形成新的毛細(xì)血管[16]。CD45由相對(duì)分子質(zhì)量較大且結(jié)構(gòu)類(lèi)似的跨膜蛋白組成,具有蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶的作用,在白細(xì)胞表面廣泛表達(dá)[17]。SECKINGER等[18]研究發(fā)現(xiàn),CD45在正常漿細(xì)胞中高表達(dá),而在MM細(xì)胞中可能大多數(shù)不表達(dá),其表達(dá)率在20.00%～50.00%,呈現(xiàn)較大的異質(zhì)性,本研究中CD45陽(yáng)性表達(dá)率為31.58%,與上述報(bào)道結(jié)果類(lèi)似。本研究結(jié)果顯示,CD31、CD45陽(yáng)性表達(dá)均與初診MM患者年齡、ISS分期、骨骼損傷和骨髓漿細(xì)胞比例有關(guān)。Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示,外周血CD31、CD45表達(dá)與初診MM患者ISS分期呈正相關(guān)。MM患者ISS分期以血清β2-MG與清蛋白水平為評(píng)估標(biāo)準(zhǔn),不同ISS分期患者采取不同的治療策略,且與患者預(yù)后密切相關(guān),不同ISS分期患者中位生存期差異較大,其中Ⅲ期患者預(yù)后相對(duì)不佳。

Kaplan-Meier生存曲線分析結(jié)果顯示,CD31、CD45陽(yáng)性表達(dá)患者總生存率分別低于CD31、CD45陰性表達(dá)患者,且CD31、CD45陽(yáng)性表達(dá)患者無(wú)進(jìn)展生存率分別低于CD31、CD45陰性表達(dá)患者。說(shuō)明CD31、CD45陽(yáng)性表達(dá)的初診MM患者總生存率和無(wú)進(jìn)展生存率均降低,提示臨床可將CD31、CD45陽(yáng)性表達(dá)作為初診MM患者預(yù)后評(píng)估的可靠生物學(xué)指標(biāo)。CD31是一種可抑制細(xì)胞誘導(dǎo)亞群的表面標(biāo)志物,在正常髓系細(xì)胞和淋巴細(xì)胞成熟早期表達(dá),可抑制原始淋巴細(xì)胞表達(dá),在腫瘤細(xì)胞中大量陽(yáng)性表達(dá)常提示患者預(yù)后較差[19]。CD45是人類(lèi)白細(xì)胞的共同表達(dá)抗原,與B細(xì)胞活化密切相關(guān),在各種造血細(xì)胞表面均表達(dá),是細(xì)胞膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵分子,在MM患者呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)說(shuō)明患者M(jìn)M細(xì)胞處于細(xì)胞分化早期階段,提示腫瘤細(xì)胞具有更高的傳播、克隆和侵襲能力,且對(duì)細(xì)胞凋亡不敏感,預(yù)示患者可能預(yù)后不良[20]。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析結(jié)果顯示,ISS分期Ⅲ期和CD31、CD45陽(yáng)性表達(dá)均為影響初診MM患者總生存率的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,其原因可能在于CD31、CD45可能在MM腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移過(guò)程中發(fā)揮調(diào)控作用,提示臨床可根據(jù)CD31、CD45的表達(dá)情況評(píng)估患者的病情發(fā)展和預(yù)后,并調(diào)整治療方案以改善患者預(yù)后。

綜上所述,初診MM患者外周血CD31、CD45表達(dá)與ISS分期呈正相關(guān),ISS分期Ⅲ期和CD31、CD45陽(yáng)性表達(dá)均為影響初診MM患者總生存率的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。本研究的不足之處在于樣本數(shù)量有限,未使用免疫組化法檢測(cè)MM組織中CD31、CD45的表達(dá)情況,且未對(duì)CD31是否與CD45存在協(xié)同作用及其具體作用機(jī)制進(jìn)行探討分析,后續(xù)仍需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究驗(yàn)證。