克里木江·阿不拉,麥迪娜·那畢江,甫拉提·阿布都熱衣木,秦艷莉

新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院眼科,新疆烏魯木齊 830001

先天性白內(nèi)障(CC)是指胎兒發(fā)育時(shí)由于多種因素導(dǎo)致晶狀體形態(tài)或功能異常,是影響小兒視功能的常見(jiàn)疾病。一項(xiàng)研究顯示,2010-2012年法國(guó)兒童CC發(fā)病率約在0.01%～0.03%,其中76.49%的患兒接受了白內(nèi)障手術(shù)聯(lián)合人工晶狀體植入術(shù)[1]。對(duì)造成瞳孔區(qū)遮擋的白內(nèi)障,應(yīng)盡早通過(guò)手術(shù)摘除,但合并近視的患兒手術(shù)難度較高,且術(shù)后易出現(xiàn)視力下降,甚至進(jìn)展為高度近視,故評(píng)估CC患兒出現(xiàn)高度近視的風(fēng)險(xiǎn)對(duì)臨床制訂干預(yù)方案有一定指導(dǎo)作用。有研究認(rèn)為,近視的發(fā)生是遺傳、環(huán)境因素共同作用的結(jié)果,尤其小兒高度近視受遺傳因素影響更加明顯,遺傳學(xué)方法表明,單核苷酸多態(tài)性(SNP)與高度近視相關(guān),這對(duì)揭示高度近視發(fā)生機(jī)制有重要意義[2]。Ras特異性鳥(niǎo)嘌呤核苷酸釋放因子(RASGRF1)與近視的關(guān)系在相關(guān)研究中得到證實(shí)[3-4],但其SNP分型與高度近視的關(guān)系仍需進(jìn)一步驗(yàn)證。本研究選取本院的CC患兒為研究對(duì)象,通過(guò)對(duì)是否合并高度近視的CC患兒進(jìn)行對(duì)照分析,旨在探究RASGRF1基因多態(tài)性與CC患兒合并高度近視的關(guān)系,以揭示可能影響高度近視發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過(guò)(批號(hào):KY20200325082)。選取2020年4月至2022年3月本院的CC患兒186例為研究對(duì)象,其中男102例,女84例;年齡6～14歲,平均(10.31±1.53)歲。根據(jù)是否合并高度近視分為兩組,其中合并高度近視(經(jīng)裂隙燈檢查、眼壓測(cè)定、眼底檢查、視力檢查確診為高度近視,屈光度為-6D或以上)的105例患兒為A組,未合并高度近視的81例患兒為B組。納入標(biāo)準(zhǔn):符合《中華眼科學(xué)》中CC診斷標(biāo)準(zhǔn)[5],白內(nèi)障遮蓋視軸,均為單眼發(fā)病;所有患兒均無(wú)親屬關(guān)系;患兒家屬知情本研究,簽署同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn):合并代謝性疾病,心、腎、肝等臟器功能障礙;既往有眼部手術(shù)史;有眼部外傷史;眼部畸形。另選取同期本院的體檢健康者93例為對(duì)照組,其中男53例,女40例;年齡5～14歲,平均(10.07±1.62)歲。CC患兒與體檢健康者性別、年齡比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2方法 EDTA抗凝真空采血管采集外周靜脈血5 mL,4 ℃保存待測(cè)。從外周血白細(xì)胞中提取全基因組DNA,純化后進(jìn)行試驗(yàn),全血提取試劑盒由德國(guó)Qiagen公司提供;采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)進(jìn)行基因測(cè)序,儀器選擇賽默飛SeqStudio Flex基因分析儀;采用多重連接酶檢測(cè)反應(yīng)技術(shù)進(jìn)行SNP分型,以GeneMapper4.1軟件進(jìn)行分型數(shù)據(jù)分析。具體分型見(jiàn)表1,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)引物見(jiàn)表2。

表1 RASGRF1基因SNP分型

表2 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)引物

1.3觀察指標(biāo) (1)比較CC患兒與體檢健康者RASGRF1基因的SNP分型與基因型頻率。(2)比較A、B兩組RASGRF1基因的SNP分型與基因型頻率。(3)比較A、B兩組一般資料,包括性別、年齡、父母近視情況、看電視距離、近距離用眼休息時(shí)間、每天是否做眼保健操、睡眠時(shí)間、居住地、眼軸長(zhǎng)度、屈光度、黃斑區(qū)視網(wǎng)膜厚度(中心凹、上方、下方、鼻側(cè)、顳側(cè))。(4)分析RASGRF1基因rs8033417分型對(duì)CC合并高度近視患兒的獨(dú)立作用。

2 結(jié) 果

2.1CC患兒與體檢健康者RASGRF1基因的SNP分型與基因型頻率比較 CC患兒與體檢健康者RASGRF1基因SNP分型rs2870087、rs8033417、rs939658、rs4778879、rs12902831的基因型頻率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 CC患兒與體檢健康者RASGRF1基因的SNP分型與基因型頻率比較[n(%)]

2.2A、B兩組RASGRF1基因的SNP分型與基因型頻率比較 A組與B組RASGRF1基因的SNP分型rs8033417的基因型頻率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 A、B兩組RASGRF1基因的SNP分型與基因型頻率比較[n(%)]

2.3A、B兩組一般資料比較 兩組父母近視情況、看電視距離、近距離用眼休息時(shí)間、每天是否做眼保健操、睡眠時(shí)間、居住地比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。A組女性、年齡>12～14歲人數(shù)多于B組,眼軸長(zhǎng)度、屈光度、黃斑區(qū)中心凹視網(wǎng)膜厚度大于B組,黃斑區(qū)上方、下方、鼻側(cè)、顳側(cè)視網(wǎng)膜厚度小于B組(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 A、B兩組一般資料比較[n(%)或

2.4RASGRF1基因rs8033417分型對(duì)CC合并高度近視患兒的獨(dú)立作用 Logistic回歸分析結(jié)果顯示,在未校正因素時(shí),RASGRF1基因rs8033417分型為C/T-C/C的CC患兒發(fā)生高度近視的風(fēng)險(xiǎn)是T/T基因型患兒的0.476倍;在模型2、模型3中,RASGRF1基因rs8033417分型為C/T-C/C的CC患兒發(fā)生高度近視的風(fēng)險(xiǎn)分別是T/T基因型患兒的0.441倍、0.426倍(P<0.05)。見(jiàn)表6。

表6 RASGRF1基因rs8033417分型對(duì)CC合并高度近視的獨(dú)立作用

3 討 論

CC是影響兒童視功能的常見(jiàn)疾病,在胎兒發(fā)育過(guò)程中形成不同形式、不同程度的晶狀體渾濁,具有發(fā)病時(shí)間早、對(duì)視力影響大等特點(diǎn),是兒童致盲的重要原因[6]。CC可導(dǎo)致患兒視力下降,尤其合并輕中度近視的患兒易進(jìn)展為高度近視。CC合并高度近視患兒眼部結(jié)構(gòu)改變較明顯,增加手術(shù)難度,且術(shù)后視力恢復(fù)不佳,不利于患兒的健康成長(zhǎng)。因此,篩選CC合并高度近視的高風(fēng)險(xiǎn)患兒,有助于指導(dǎo)臨床針對(duì)性采取干預(yù)措施。

RASGRF1基因是核交換因子,可促進(jìn)Ras家族GTP酶上的GDP/GTP交換,參與光感受器反應(yīng)的突觸傳遞[7]。相關(guān)研究表明,敲除RASGRF1基因的小鼠會(huì)表現(xiàn)出視網(wǎng)膜感光缺陷[8]。RASGRF1基因在視網(wǎng)膜中高度表達(dá),對(duì)光感受過(guò)程的神經(jīng)傳遞具有重要作用,RASGRF1基因缺陷可造成晶狀體異常、視覺(jué)感覺(jué)過(guò)程受損,臨床有研究證實(shí),RASGRF1是近視發(fā)生的易感基因[9-10]。本研究發(fā)現(xiàn),CC患兒與體檢健康者RASGRF1基因SNP分型基因型頻率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示RASGRF1基因或與CC有關(guān)。RASGRF1基因編碼的RASGRF1蛋白可從Ras-GDP復(fù)合體中解離Ras蛋白,并與GTP結(jié)合形成Ras-GTP復(fù)合體,激活N-Ras、H-Ras、K-Ras等特定的Ras信號(hào)通路,在表觀遺傳學(xué)調(diào)控機(jī)制中有重要作用[11]。DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)修飾的主要方式,RASGRF1基因異常甲基化與編碼蛋白有直接關(guān)系,對(duì)晶狀體發(fā)育過(guò)程有一定影響[12-13]。遺傳因素是CC發(fā)生的主要因素,約1/3的患兒為染色體顯性遺傳,此類(lèi)患兒易出現(xiàn)視力下降,高度近視的發(fā)生率更高[14]。為進(jìn)一步尋找RASGRF1基因中與高度近視發(fā)生有關(guān)的具有功能性的SNP,本研究通過(guò)對(duì)是否合并高度近視的CC患兒進(jìn)行對(duì)照研究,發(fā)現(xiàn)A、B兩組RASGRF1基因分型rs8033417的基因型頻率存在明顯差異;通過(guò)Logistic回歸模型分析發(fā)現(xiàn),在校正及未校正其他變量時(shí),RASGRF1基因rs8033417分型為C/T-C/C時(shí)均可明顯降低高度近視發(fā)生率,表明RASGRF1基因rs8033417分型與CC患兒發(fā)生高度近視密切相關(guān)。RASGRF1基因?qū)暤陌l(fā)展具有明顯影響,有研究顯示,RASGRF1基因的遺傳變異可造成近視及屈光不正,其機(jī)制與RASGRF1基因?qū)σ曈X(jué)信號(hào)的傳遞與處理有關(guān)[15]。RASGRF1基因參與維持視網(wǎng)膜的正常功能,且參與導(dǎo)致近視的信號(hào)通路,若RASGRF1基因缺乏可導(dǎo)致下游基因發(fā)生變化,其中包括視覺(jué)障礙基因[16-17]。RASGRF1基因中的rs8033417及其周?chē)蛄芯哂谢蛟鰪?qiáng)特征,其與RASGRF1 mRNA水平無(wú)明顯相關(guān)性,而與RASGRF1的長(zhǎng)鏈非編碼RNA基因RP11-16K12.1密切相關(guān)[18]。RP11-16K12.1與RASGRF1轉(zhuǎn)錄方向相反,位于RASGRF1基因的反義鏈,可通過(guò)介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子的相互作用參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控,且在誘導(dǎo)染色質(zhì)重構(gòu)、細(xì)胞分化、細(xì)胞維持等活動(dòng)中有重要作用[19-20]。RP11-16K12.1可通過(guò)調(diào)控視網(wǎng)膜細(xì)胞生長(zhǎng)分化,促進(jìn)眼部疾病發(fā)生,這可能是RASGRF1基因與高度近視密切相關(guān)的主要機(jī)制之一。因此,通過(guò)檢測(cè)RASGRF1基因分型可一定程度上分析CC患兒發(fā)生高度近視的風(fēng)險(xiǎn),具有一定臨床應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述,RASGRF1基因的SNP對(duì)CC患兒是否發(fā)生高度近視具有直接影響,且主要與rs8033417分型有關(guān),若rs8033417分型為C/T-C/C,則CC患兒發(fā)生高度近視的風(fēng)險(xiǎn)較低。本研究?jī)H選取了我國(guó)人群分布頻率較高的RASGRF1基因SNP分型,對(duì)于其他SNP分型是否對(duì)CC合并高度近視患兒存在影響,仍需臨床進(jìn)一步深入研究。