黃美興　羅衛(wèi)民

【摘要】 目的：研究非小細胞肺癌（NSCLC）中增殖細胞核抗原-67（Ki-67）和B細胞淋巴瘤因子2蛋白（Bcl-2）、高遷移率族蛋白1（HMGB1）表達的臨床意義。方法：選擇2017年1月-2019年6月廣州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院收治的84例NSCLC患者。采集所有患者NSCLC組織及癌旁正常組織，對比不同肺組織Ki-67、Bcl-2及HMGB1表達情況。分析Ki-67、Bcl-2及HMGB1表達與NSCLC患者臨床病理特征及預后的關(guān)系。結(jié)果：NSCLC組織中Ki-67、Bcl-2及HMGB1陽性表達率分別為58.33%、45.24%、75.00%，相較于癌旁正常組織的9.52%、8.33%、13.10%更高（P<0.05）。臨床分期Ⅲ、Ⅳ期和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NSCLC患者中Ki-67陽性率相較于臨床分期Ⅰ、Ⅱ期和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者更高（P<0.05）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學分級Ⅲ級NSCLC患者的Bcl-2陽性率相較于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學分級Ⅰ、Ⅱ級患者更高（P<0.05）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學分級Ⅲ級和臨床分期Ⅲ、Ⅳ期NSCLC患者的HMGB1陽性率相較于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學分級Ⅰ、Ⅱ級和臨床分期Ⅰ、Ⅱ期患者更高（P<0.05）。NSCLC死亡患者Ki-67、Bcl-2、HMGB1陽性率分別為85.71%、68.57%、94.29%，相較于存活組的38.78%、28.57%、61.22%均較高（P<0.05）。結(jié)論：NSCLC中Ki-67、Bcl-2及HMGB1均呈異常高表達，且均和預后密切相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 非小細胞肺癌 Ki-67 Bcl-2 高遷移率族蛋白B1

Clinical Significance of Ki-67， Bcl-2 and HMGB1 Expression in Non-small Cell Lung Cancer/HUANG Meixing， LUO Weimin. //Medical Innovation of China， 2023， 20（10）： 0-057

[Abstract] Objective： To investigate the clinical significance of proliferating cell nuclear antigen 67 （Ki-67），

B-cell lymphoma factor 2 protein （Bcl-2） and high mobility group protein 1 （HMGB1） expression in non-small cell lung cancer （NSCLC）. Method： A total of 84 patients with NSCLC admitted to the Guangzhou Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine from January 2017 to June 2019 were selected. NSCLC tissues and adjacent normal tissues were collected from all patients， and the expressions of Ki-67， Bcl-2 and HMGB1 in different lung tissues were compared. The relationship between Ki-67， Bcl-2 and HMGB1 expression and clinicopathologic features and prognosis of NSCLC patients were analyzed. Result： The positive expression rates of Ki-67， Bcl-2 and HMGB1 in NSCLC tissues were 58.33%， 45.24% and 75.00%， which were higher than 9.52%， 8.33% and 13.10% in adjacent normal tissues （P<0.05）. The positive rate of Ki-67 in patients with stage Ⅲ， stage Ⅳ and NSCLC with lymph node metastasis were higher than those in patients with stage Ⅰ， stage Ⅱ and without lymph node metastasis （P<0.05）. The positive rate of Bcl-2 in NSCLC patients with lymph node metastasis and histological grade Ⅲ were higher than those in patients without lymph node metastasis and histological grade Ⅰ and Ⅱ （P<0.05）. The positive rate of HMGB1 in patients with lymph node metastasis， histological grade Ⅲ and clinical stage Ⅲ and Ⅳ were higher than those in patients without lymph node metastasis， histological grade Ⅰ and Ⅱ， and clinical stage Ⅰ and Ⅱ （P<0.05）. The positive rates of Ki-67， Bcl-2 and HMGB1 in dead NSCLC patients were 85.71%， 68.57% and 94.29%， respectively， which was higher than 38.78%， 28.57% and 61.22% in the survival group （P<0.05）. Conclusion： The expressions of Ki-67， Bcl-2 and HMGB1 are abnormally high in NSCLC， which are closely related to the prognosis.

[Key words] Non-small cell lung cancer Ki-67 Bcl-2 High mobility group B1

First-author's address： Guangzhou Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine， Guangzhou 510800， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2023.10.013

隨著近年來人類生活環(huán)境的日益惡化及生活方式的不斷轉(zhuǎn)變，非小細胞肺癌（NSCLC）的發(fā)病率亦呈逐年攀升趨勢，已成為嚴重威脅人類生命健康的重大疾病之一[1-3]。因此，對NSCLC進行積極有效的診治顯得尤為重要，亦是目前廣大醫(yī)務工作者共同關(guān)注的熱點[4-5]。不少研究報道證實，NSCLC的發(fā)生、發(fā)展屬于多基因調(diào)控過程，且細胞增殖失控及凋亡失控起著關(guān)鍵性作用，亦是影響患者預后轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵因素[6-7]。鑒于此，本文通過研究NSCLC中增殖細胞核抗原-67（Ki-67）和B細胞淋巴瘤因子2蛋白（Bcl-2）、高遷移率族蛋白1（HMGB1）表達的臨床意義，以期為NSCLC的診治提供新的思路和方向，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月-2019年6月廣州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院收治的84例NSCLC患者。納入標準：（1）所有入組人員均經(jīng)病理檢查確診；（2）均為首次發(fā)??；（3）入組前并未接受任何抗腫瘤治療。排除標準：（1）伴有其他惡性病變；（2）神志異?；虬橛芯窦膊?；（3）無法完成定期隨訪。男52例，女32例；年齡：<55歲30例，≥55歲54例；病理類型：腺癌44例，鱗癌40例；臨床分期：Ⅰ、Ⅱ期35例，Ⅲ、Ⅳ期49例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移51例；組織學分級：Ⅰ、Ⅱ級55例，Ⅲ級29例。入組人員均已簽同意書，醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會已批準。

1.2 方法 （1）Ki-67、Bcl-2及HMGB1表達檢測：通過免疫組化法實現(xiàn)，采集所有受試者NSCLC和癌旁正常組織標本，以4%中性甲醛進行固定。隨后以梯度酒精脫水處理，石蠟包埋，制備成厚度為4 μm的連續(xù)切片，實施HE染色。免疫組化染色選擇EnVision法，具體步驟遵循試劑盒說明書完成。相關(guān)抗體根據(jù)1∶400比例稀釋，將已知陽性切片/PBS視作陽性/陰性對照。兔抗人多克隆抗體均購自美國Santa Cruz公司。DAB顯色液及免疫組化試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。（2）隨訪方式：對所有受試者均開展為期3年的隨訪觀察，隨訪方式包括電話隨訪、來院復查等，隨訪頻率為3個月/次，隨訪截止事件為患者死亡。

1.3 觀察指標及判定標準 比較不同肺組織Ki-67、Bcl-2及HMGB1表達情況。分析Ki-67、Bcl-2及HMGB1表達與NSCLC患者臨床病理特征和預后的關(guān)系。結(jié)果判定：Ki-67定位于細胞核，Bcl-2定位于細胞質(zhì)，HMGB1定位于細胞質(zhì)。根據(jù)染色強度及陽性細胞占比實施半定量積分法評估，每項評分0～3分。染色強度評分：無著色即為0分，淺著色即為1分，中度著色即為2分，深度著色即為3分。陽性細胞占比評分：隨機選擇10個高倍鏡視野，各視野計數(shù)100個細胞。陽性細胞占比≤5%記作0分；6%～25%記作1分；26%～49%記作2分；≥50%記作3分。兩項評分之和記作最終結(jié)果，0～1分為陰性，反之即為陽性[8-9]。

1.4 統(tǒng)計學處理 以SPSS 21.0軟件實現(xiàn)數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料以率（%）表示，行字2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同肺組織Ki-67、Bcl-2及HMGB1表達對

比 NSCLC組織中Ki-67、Bcl-2及HMGB1陽性表達率均高于癌旁正常組織，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 NSCLC患者中Ki-67表達與病理特征的關(guān)系 臨床分期Ⅲ、Ⅳ期和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NSCLC患者的Ki-67陽性率相較于臨床分期Ⅰ、Ⅱ期和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者更高，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表2。

2.3 NSCLC患者中Bcl-2表達與病理特征的關(guān)系分析 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學分級Ⅲ級NSCLC患者的Bcl-2陽性率相較于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學分級Ⅰ、Ⅱ級患者更高，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表3。

2.4 NSCLC患者中HMGB1表達與病理特征的關(guān)系 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學分級Ⅲ級和臨床分期Ⅲ、Ⅳ期NSCLC患者的HMGB1陽性率相較于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學分級Ⅰ、Ⅱ級和臨床分期Ⅰ、Ⅱ期患者更高，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表4。

2.5 NSCLC患者中Ki-67、Bcl-2、HMGB1表達與預后的關(guān)系 84例患者死亡35例，存活49例，其中NSCLC死亡患者Ki-67、Bcl-2、HMGB1陽性率相較于存活組均較高，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表5。

3 討論

Ki-67介導了細胞有絲分裂及細胞增殖過程，更是調(diào)控細胞周期的重要因子，和NSCLC惡性生物學行為及預后息息相關(guān)，是目前臨床應用較為廣泛的增殖細胞生物學標志物之一。Bcl-2基因是當前國內(nèi)外研究相對廣泛的凋亡相關(guān)基因之一，其參與了細胞中程序性細胞凋亡過程，進而誘發(fā)惡性病變，可作為腫瘤分子標志物[10-12]。HMGB1是一種具有誘導炎癥反應的非組蛋白，其廣泛分布在真核細胞核內(nèi)，在腫瘤細胞增殖分化的促進及血管內(nèi)皮細胞功能的調(diào)控等生物學過程中起著至關(guān)重要的作用。

本研究結(jié)果顯示：NSCLC組織中Ki-67、Bcl-2及HMGB1陽性表達率均較癌旁正常組織高。提示了NSCLC組織中Ki-67、Bcl-2及HMGB1均呈異常高表達。分析原因，可能是Ki-67表達的升高往往反映了細胞周期的失控；而Bcl-2表達的升高可能引起凋亡失衡；HMGB1表達升高可能導致其調(diào)控細胞增殖分化的作用異常。而上述作用均在NSCLC的發(fā)生過程中扮演著至關(guān)重要的角色。此外，臨床分期Ⅲ、Ⅳ期和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NSCLC患者的Ki-67陽性率相較于臨床分期Ⅰ、Ⅱ期和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者更高（P<0.05）。且NSCLC死亡患者Ki-67陽性率相較于存活組高。說明了Ki-67與NSCLC患者病情進展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預后密切相關(guān)。這與姜峰等[13]的研究報道相吻合，說明了隨著Ki-67的表達升高會導致腫瘤細胞的異常增殖分化，提高其侵襲能力，并直接影響預后轉(zhuǎn)歸。然而，馬禮鴻等[14]的研究報道發(fā)現(xiàn)，NSCLC中Ki-67表達和臨床分期無關(guān)，這和本研究結(jié)果存在明顯的差異，而導致上述差異的主要原因可能與研究樣本量不同有關(guān)。另外，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學分級Ⅲ級NSCLC患者的Bcl-2陽性率相較于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學分級Ⅰ、Ⅱ級患者更高（P<0.05）。且NSCLC死亡患者Bcl-2陽性率相較于存活組更高。反映了Bcl-2表達與NSCLC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預后息息相關(guān)。究其原因，Bcl-2異常高表達會對腫瘤細胞的凋亡產(chǎn)生一定的抑制作用，腫瘤細胞存活周期延長，進而使得其細胞增殖減少[15-16]。本文結(jié)果還顯示了有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學分級Ⅲ級和臨床分期Ⅲ、Ⅳ期NSCLC患者的HMGB1陽性率相較于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學分級Ⅰ、Ⅱ級和臨床分期Ⅰ、Ⅱ期患者更高（P<0.05）。且NSCLC死亡患者HMGB1陽性率相較于存活組高。充分證實了HMGB1表達和NSCLC患者病情、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學分級以及預后密切相關(guān)。考慮原因，HMGB1可通過和DNA相結(jié)合，進一步介導DNA轉(zhuǎn)錄、修飾等過程，間接參與了NSCLC發(fā)生、發(fā)展過程[17-18]；同時，HMGB1可通過和特異性細胞膜受體相結(jié)合，從而介導腫瘤細胞增殖、浸潤及轉(zhuǎn)移等過程，最終影響預后轉(zhuǎn)歸[19-20]。

綜上所述，NSCLC中Ki-67、Bcl-2及HMGB1均呈異常高表達，且均和患者病情進展及預后密切相關(guān)，可作為臨床診治NSCLC的可靠生物學標志物。

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（收稿日期：2022-11-02） （本文編輯：張明瀾）