趙芬芬，施衛(wèi)兵，齊春偉，許文彬，馬翠翠，郭錦晨

1 安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 安徽合肥 230012

2 安徽中醫(yī)藥大學(xué) 安徽合肥 230031

3 新安醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 安徽合肥 230038

慢性乙型肝炎（Chronic hepatitis B，CHB）是由HBV 病毒持續(xù)性感染而發(fā)生的慢性肝臟炎性損害病變，會(huì)發(fā)生不同程度的肝損傷，最終發(fā)展為肝硬化、肝癌等，威脅人類(lèi)生命健康。目前臨床上尚無(wú)能完全治愈CHB 的特效藥[1]，所以抗病毒仍是治療CHB 的主要方法[2]，但存在耐藥風(fēng)險(xiǎn)、不良反應(yīng)等相關(guān)問(wèn)題，影響療效，遠(yuǎn)期預(yù)后不佳[3]。

現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)認(rèn)為CHB 是由濕熱之邪侵入人體，人體正氣不足無(wú)力抗邪而起，常將CHB 歸于中醫(yī)學(xué)的“脅痛”“黃疸”等中醫(yī)疾病范疇。赤茵合劑為安徽省中醫(yī)院的自擬方，曾用名赤茵糖漿，臨床應(yīng)用近30 年，療效確切。曹承樓等人[4]的研究發(fā)現(xiàn)，赤茵合劑對(duì)黃疸型病毒性肝炎肝膽濕熱型有明顯的治療作用。研究表明，赤茵合劑可有效降低肝內(nèi)膽汁淤積性黃疸患者血清 ALT、GGT、ALP 的水平，降低肝內(nèi)膽汁淤積性黃疸患者的血清LN、C-IV 水平，對(duì)改善肝組織纖維化也有良好的效果[5]。楊小軍、施衛(wèi)兵、胡大慶等[6-8]人的研究證實(shí)了赤茵合劑對(duì)慢性乙型黃疸性肝炎、慢性乙型肝炎高膽紅素血癥及淤膽型乙型肝炎均有良好的治療效果。然而，赤茵合劑治療CHB 的作用機(jī)制尚未完全明確。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接的方法，分析赤茵合劑治療CHB 的有效成分、作用靶點(diǎn)及信號(hào)通路，探究赤茵合劑治療CHB 的潛在作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用赤茵合劑治療CHB 提供理論支持。

資料與方法

1 篩選赤茵合劑有效成分及靶點(diǎn)

高口服生物利用度是確定生物分子作為治療劑的藥物樣特性的關(guān)鍵性指標(biāo)，借助中藥系統(tǒng)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)數(shù)據(jù)分析平臺(tái)（TCMSP，https：//tcmsp-e.com/），設(shè)置篩選條件為口服生物利用度（oral bioavailability，OB）≥40%、藥物相似性（drug-likeness，DL）≥0.18，獲取赤茵合劑藥物活性成分和相對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)，同時(shí)采用Uniprot 數(shù)據(jù)庫(kù)規(guī)范靶點(diǎn)名稱(chēng)。

2 篩選CHB 靶點(diǎn)

進(jìn) 入GeneCards 數(shù) 據(jù) 庫(kù)（https：//www.genecards.org/），將“Chronic hepatitis B”作為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索，以得分＞中位數(shù)13.60 為標(biāo)準(zhǔn)篩選，通過(guò)OMIM 數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.omim.org/）、DrugBank 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//go.Drugbank.com/）、TTD 數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//db.idrblab.net/ttd/）及PharmGkb 數(shù)據(jù)庫(kù)，將“Chronic hepatitis B”作為關(guān)鍵詞，進(jìn)行檢索，得到各數(shù)據(jù)庫(kù)相應(yīng)的CHB 靶點(diǎn)，將五個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)的靶點(diǎn)合并后去重即為CHB 的靶點(diǎn)。將藥物與疾病靶點(diǎn)對(duì)比分析，獲得赤茵合劑治療CHB的潛在靶點(diǎn)。

3 構(gòu)建分析“赤茵合劑-有效成分-潛在靶點(diǎn)-CHB”網(wǎng)絡(luò)

建立潛在靶點(diǎn)、有效成分相關(guān)文件，將其導(dǎo)入Cytoscape3.7.2 軟件，構(gòu)建“赤茵合劑-有效成分-潛在靶點(diǎn)-慢性乙型肝炎”網(wǎng)絡(luò)，并對(duì)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行相關(guān)分析。

4 構(gòu)建蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間的相互作用關(guān)系網(wǎng)絡(luò)（PPI），篩選核心靶點(diǎn)

借 助STRING 在 線 數(shù) 據(jù) 庫(kù)（https：//stringdb.org/），導(dǎo)入潛在靶點(diǎn)，限定研究物種為“Homo sapiens”，進(jìn)行蛋白質(zhì)互作分析，置信度設(shè)為≥0.400，隱藏游離節(jié)點(diǎn)，獲得PPI 網(wǎng)絡(luò)，保存為T(mén)SV 文件，并將其導(dǎo)入Cytoscape3.7.2 軟件，優(yōu)化相關(guān)網(wǎng)絡(luò)圖，利用MCODE 插件進(jìn)行聚類(lèi)，并分析篩選出核心靶點(diǎn)。

5 GO 功能富集和KEGG 通路分析

將“1.2”中的潛在靶點(diǎn)上傳至Matescape 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//Matescape.ncifcrf.gov/），以“Homo sapiens”為限定條件，進(jìn)行GO 功能富集和KEGG 通路分析。其中GO 重點(diǎn)了解靶點(diǎn)主要的作用過(guò)程，而KEGG 主要了解細(xì)胞的生化過(guò)程，最后使用微生信將結(jié)果可視化。

6 分子對(duì)接驗(yàn)證

將核心靶點(diǎn)作為分子對(duì)接的受體，在PDB 數(shù)據(jù)庫(kù)中下載相應(yīng)的pdb 格式，運(yùn)用pymol 軟件進(jìn)行去除水分子和原有配體，得到相應(yīng)的受體結(jié)構(gòu)；Pubchem 中下載的活性成分的3D 結(jié)構(gòu)作為小分子配體。然后準(zhǔn)備PDBQT 文件，根據(jù)靶點(diǎn)口袋調(diào)整 Gridbox 坐標(biāo)及大小，采用AutoDock Vina 進(jìn)行分子對(duì)接，借助PyMol、LigPlot+軟件進(jìn)行可視化處理。

結(jié) 果

1 赤茵合劑有效成分及靶點(diǎn)與CHB 靶點(diǎn)收集

通過(guò)“1”中的條件在TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，收集到有效成分：赤芍17 個(gè)，茵陳10 個(gè)，丹參43 個(gè)，苦參38 個(gè)，大黃11 個(gè)，葛根3 個(gè)，甘草69 個(gè)。去除重復(fù)成分、剔除無(wú)法預(yù)測(cè)相關(guān)靶點(diǎn)的化合物，最終確定赤茵合劑有效成分150 個(gè)，將每味中藥位于前5 的化合物列出（表1）。通過(guò)查閱文獻(xiàn)可知芍藥內(nèi)酯苷為赤芍的主要成分，木犀草素為茵陳的主要成分，故將此2 種化合物納入，通過(guò)Pubchem、SwissTargetPrediction 數(shù)據(jù)庫(kù)篩選相關(guān)靶點(diǎn)，運(yùn)用Uniport 數(shù)據(jù)庫(kù)校正靶點(diǎn)，去除重復(fù)基因并刪除非人源性靶點(diǎn)。最終得到152 個(gè)有效成分，351 個(gè)靶點(diǎn)。

表1 赤茵合劑有效活性成分基本信息

進(jìn)入GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)、OMIM 數(shù)據(jù)庫(kù)、DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)、TTD 數(shù)據(jù)庫(kù)及PharmGkb 數(shù)據(jù)庫(kù)，將“chronic hepatitis B”作為關(guān)鍵詞，進(jìn)行檢索，將五個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)的靶點(diǎn)合并去重后獲得1113 個(gè)與CHB 相關(guān)的靶點(diǎn)。

將赤茵合劑有效成分對(duì)應(yīng)的351 個(gè)藥物靶點(diǎn)與CHB 對(duì)應(yīng)的1113 個(gè)疾病靶點(diǎn)進(jìn)行對(duì)比分析后獲得127 個(gè)共有靶點(diǎn)，即為赤茵合劑作用于CHB 發(fā)揮治療作用的潛在靶點(diǎn)（圖1），其中槲皮素（Quercetin）、毛蕊異黃酮（Calycosin）、木犀草素（Luteolin）、山柰酚（Kaempferol）、丹參酮IIA（Tanshinone IIA）、芒柄花黃素（Formononetin）Degree 值排名靠前（圖2），認(rèn)為可能是發(fā)揮作用的主要成分。

圖1 藥物-疾病共同靶點(diǎn)

圖2 化合物Degree 值

2 “ 赤茵合劑-有效成分-潛在靶點(diǎn)-CHB”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建及分析

建立潛在靶點(diǎn)、有效成分與中藥、疾病的相關(guān)文件，將其導(dǎo)入Cytoscape3.7.2，構(gòu)建“中藥-有效成分-潛在靶點(diǎn)-CHB”可視化網(wǎng)絡(luò)圖（圖3）。

圖3 “赤茵合劑-有效成分-潛在靶點(diǎn)-CHB”網(wǎng)絡(luò)圖

3 PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及核心靶點(diǎn)篩選

將127 個(gè)潛在靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)，導(dǎo)出TSV 格式文件，再將其導(dǎo)入Cytoscape3.7.2 軟件，利用“Network Analyzer”進(jìn)行蛋白網(wǎng)絡(luò)互作分析，構(gòu)建可視化網(wǎng)絡(luò)圖（圖4）。CytoHubba 可以準(zhǔn)確地篩選出網(wǎng)絡(luò)中的重要節(jié)點(diǎn)，其中最大集團(tuán)中心度（maximal cliquecentrality，MCC）算法被證實(shí)是預(yù)測(cè)重要靶點(diǎn)較為精確的方法之一。通過(guò)MCC 算法，確定的關(guān)鍵靶點(diǎn)即為赤茵合劑治療CHB 的核心靶點(diǎn)（圖5），并根據(jù)degree 值繪制條形圖（圖6），再運(yùn)用Cytoscape3.7.2中的MCODE 插件，對(duì)交集靶點(diǎn)進(jìn)行聚類(lèi)功能模塊分析，共得到6 個(gè)功能模塊（圖7A-圖7F），并對(duì)其進(jìn)行打分（圖8），模塊1-3 的MCODE 聚類(lèi)得分分別為53.5 分、6 分和3.333 分。第一類(lèi)由65 個(gè)靶點(diǎn)組成，是MCODE 集群得分最高的功能模塊，該模塊的靶基因主要富集在病毒感染、免疫、和癌癥相關(guān)的通路中；第2 類(lèi)包含23 個(gè)靶點(diǎn)，涉及蛋白質(zhì)磷酸化、激酶活性的調(diào)節(jié)、有絲分裂細(xì)胞周期相變、凋亡信號(hào)通路的調(diào)控等生物過(guò)程；第3 類(lèi)包含4 個(gè)靶點(diǎn)，與外源代謝和分解過(guò)程、雌激素代謝過(guò)程、不飽和脂肪酸代謝過(guò)程相關(guān)。

圖4 PPI

圖5 核心靶點(diǎn)

圖6 核心靶點(diǎn)Degree 值

圖7 交集靶點(diǎn)功能模塊圖

圖8 模塊評(píng)分

4 GO 功能富集分析

利用PANTHER 在線平臺(tái)，對(duì)127 個(gè)潛在靶點(diǎn)進(jìn)行分類(lèi)（圖9），主要包括蛋白質(zhì)修飾酶、代謝物相互轉(zhuǎn)化酶、細(xì)胞間信號(hào)分子、跨膜信號(hào)受體、基因特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子、蛋白質(zhì)結(jié)合活性調(diào)節(jié)劑等。運(yùn)用Matescape 數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)127 個(gè)潛在靶點(diǎn)進(jìn)行GO 功能富集分析，閾值P 設(shè)定為＜0.05，包括了466 條生物過(guò)程、55 條細(xì)胞組分、107 條分子功能。生物過(guò)程（biological process，BP）（圖10）分析可以看出這些靶點(diǎn)主要涉及對(duì)RNA 聚合酶II 啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控、轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控、基因表達(dá)的正調(diào)控、凋亡過(guò)程的負(fù)調(diào)控、細(xì)胞增殖的正調(diào)控、凋亡過(guò)程等466 條生物過(guò)程。

圖9 潛在靶點(diǎn)分類(lèi)

圖10 BP 分析結(jié)果（前20 條）

5 KEGG 通路富集分析

運(yùn)用Matescape 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)對(duì)127 個(gè)潛在靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG 通路富集分析，閾值P設(shè)定為＜0.05，得到169 條KEGG 富集結(jié)果，包括PI3K-Akt 信號(hào)通路、Hepatitis B 信號(hào)通路、MAPK 信號(hào)通路等通路等，列出相關(guān)富集結(jié)果的前20 位（表2）。繪制KEGG 靶點(diǎn)-通路圖（圖11），并對(duì)KEGG 通路進(jìn)行分類(lèi)（圖12），主要包括人類(lèi)疾病、信息處理過(guò)程、細(xì)胞過(guò)程和組織系統(tǒng)，多與炎癥通路和病毒感染通路相關(guān)。

圖11 KEGG 靶點(diǎn)-通路圖

圖12 KEGG 通路分類(lèi)圖

表2 KEGG 通路富集分析（前20 條）

6 分子對(duì)接分析

將1 中的主要成分包括槲皮素、毛蕊異黃酮、木犀草素、山柰酚、丹參酮IIA、芒柄花黃素作為分子對(duì)接的配體，將存3 中的核心靶點(diǎn)作為受體，準(zhǔn)備相關(guān)文件，采用AutoDock Vina 進(jìn)行分子對(duì)接，同時(shí)評(píng)定自由結(jié)合能（圖13-圖14）。若自由結(jié)合能＜0，表明配體和受體可以自發(fā)地結(jié)合，若自由結(jié)合能≤-5.0 kcal/mol，則說(shuō)明兩者結(jié)合較好，若結(jié)合能≤-7.0 kcal/mol，則說(shuō)明兩者結(jié)合較強(qiáng)[9]。本研究選取≤-7.0 kcal/mol的對(duì)接結(jié)果，使用PyMol、LigPlot+軟件，將結(jié)合能前6位的對(duì)接結(jié)果制作2D 對(duì)接示意圖（圖15）。由圖13可知，所有的自由結(jié)合能均≤-5.0 kcal/mol，由圖14可見(jiàn)，自由結(jié)合能≤-7.0 kcal/mol 占比63%，說(shuō)明槲皮素、毛蕊異黃酮、木犀草素、山柰酚、丹參酮IIA、芒柄花黃素與核心靶點(diǎn)均能自發(fā)結(jié)合，且有較好的結(jié)合活性，且大部分均具有較強(qiáng)的結(jié)合活性。

圖13 自由結(jié)合能評(píng)分

圖14 自由結(jié)合能比例圖

圖15 分子對(duì)接2D 模型圖

討 論

CHB 是世界醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的難題，具有傳染性，尚不能完全治愈，容易發(fā)展成肝硬化、肝癌。目前主要以抗病毒治療為主，但長(zhǎng)期單一使用抗病毒藥物容易產(chǎn)生不良反應(yīng)。越來(lái)越多的臨床研究表明，中醫(yī)藥在改善慢乙肝患者臨床癥狀、保肝降酶、抗肝臟纖維化、調(diào)節(jié)免疫等方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)[10]。赤茵合劑由茵陳蒿湯化裁而來(lái)，其組成包括赤芍、茵陳、丹參、葛根、苦參、大黃、生甘草7 味中藥，其中赤芍、茵陳同入肝經(jīng)，共為君藥，清肝膽之濕，泄血分郁熱；丹參、葛根為臣藥，以宣暢氣機(jī)，通絡(luò)活血，佐以苦參、大黃，燥濕解毒，通腑散瘀；以甘草為使，淸熱解毒、調(diào)和諸藥。諸藥合用，共奏清熱利濕、解毒保肝之效。

本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法分析預(yù)測(cè)赤茵合劑治療CHB 的作用機(jī)制，通過(guò)篩選共預(yù)測(cè)出赤茵合劑中治療CHB 的有效成分152 個(gè)，潛在作用靶點(diǎn)127個(gè)。“赤茵合劑-有效成分-靶點(diǎn)-CHB”網(wǎng)絡(luò)圖分析得知槲皮素、丹參酮IIA、芒柄花黃素、毛蕊異黃酮、和山柰酚、木犀草素等能連接到較多的靶點(diǎn)，可能是赤茵合劑治療CHB 的關(guān)鍵有效成分。槲皮素是茵陳、苦參和甘草的共有成分，有研究發(fā)現(xiàn)槲皮素可以減少乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）和乙肝e 抗原（hepatitis B virus e antigen，HBeAg）的分泌，降低HBV 基因組DNA 的水平，進(jìn)一步探究發(fā)現(xiàn)槲皮素對(duì)HBV 的復(fù)制也有抑制作用，具有保護(hù)肝臟的作用[11-12]。有研究表明芒柄花黃素可以顯著抑制肝癌細(xì)胞中COX-2 和cyclin D1 的表達(dá)，將細(xì)胞阻滯在G0/G1 期，抑制肝癌的發(fā)生[13]。山柰酚則可通過(guò)下調(diào)IL-6 與TNF-α 的水平，減輕肝臟炎癥反應(yīng)損傷[14]。丹參酮IIA 可將細(xì)胞阻滯在G0/G1 期，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。研究表明丹參酮IIA 可以抑制多種人類(lèi)癌癥的增殖，包括肝細(xì)胞癌[15]。木犀草素可降低HBsAg、HBeAg、HBV DNA 復(fù)制中間體水平，以及HBsAg 和乙肝核心抗原（hepatitis B core antigen，HBcAg） 的表達(dá)[16]，能夠抑制肝星狀細(xì)胞HSCs 的遷移，拮抗肝臟纖維化[17]。結(jié)果顯示，赤茵合劑可能通過(guò)抗炎、抑制HBV 復(fù)制、抗纖維化等多途徑實(shí)現(xiàn)治療CHB 的目標(biāo)[18]。

通過(guò)PPI 網(wǎng)絡(luò)分析得到TP53、AKT1、PTGS2、TNF、IL6、JUN、STAT3、1L1B 等核心靶點(diǎn)，可能是赤茵合劑治療CHB 的核心靶點(diǎn)。TP53 能誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯、凋亡和衰老，進(jìn)而抑制腫瘤的發(fā)展[19]。TP53 是人類(lèi)癌癥中最常發(fā)生突變的基因之一[20]，當(dāng)TP53 發(fā)生突變時(shí)，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖異常，從而促進(jìn)癌癥發(fā)生[21]。AKT1 是人類(lèi)腫瘤中重要的調(diào)節(jié)因子，慢病毒介導(dǎo)Akt1 shRNA 載體可抑制肝癌HepG2 細(xì)胞增殖和侵襲，并促進(jìn)其凋亡，進(jìn)而抑制肝癌的發(fā)生發(fā)展[22]。PTGS2，又名COX-2，相關(guān)研究[23-24]已經(jīng)證明，COX-2 通過(guò)抑制凋亡和誘導(dǎo)增殖促進(jìn)肝癌細(xì)胞系的生長(zhǎng)。c-Jun通過(guò)細(xì)胞自主方式調(diào)節(jié)肝臟骨橋蛋白（Opn）表達(dá)，在HBV 相關(guān)腫瘤發(fā)生過(guò)程中通過(guò)促進(jìn)肝細(xì)胞增殖和不典型增生的進(jìn)展發(fā)揮重要作用[25]。STAT3 作為一種轉(zhuǎn)錄激活因子，經(jīng)磷酸化激活后可誘導(dǎo)細(xì)胞中癌基因的異常表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展[26]。HBV 通過(guò)下調(diào)miR-340-5p 表達(dá)，誘導(dǎo)STAT3 過(guò)表達(dá)，促進(jìn)肝癌細(xì)胞遷移[27]。IL-1B 是一種促炎細(xì)胞因子，通過(guò)氧化應(yīng)激抑制HBV 復(fù)制發(fā)揮抗病毒作用[28]。TNF-α是參與HBV 感染免疫應(yīng)答的最重要的細(xì)胞因子之一[29]，被認(rèn)為是HBV 感染的關(guān)鍵因素，可促進(jìn)免疫介導(dǎo)的病毒學(xué)控制[30]，抑制HBV 在肝臟中的表達(dá)和復(fù)制，從而誘導(dǎo)清除HBV[31]。IL6 是動(dòng)態(tài)免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的重要組成部分，可與IL8 共同促進(jìn)炎癥細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)，參與乙型肝炎的炎癥反應(yīng)，使吞噬細(xì)胞吞噬游離的乙肝病毒和乙肝病毒感染的細(xì)胞[32]。

KEGG 富集結(jié)果顯示，顯示赤茵合劑的成分可作用于Hepatitis B 信號(hào)通路、PI3K-Akt 信號(hào)通路、MAPK 信號(hào)通路、TNF 信號(hào)通路等，這表明赤茵合劑可能通過(guò)免疫細(xì)胞分化和調(diào)控免疫應(yīng)答參與調(diào)控CHB 進(jìn)程。Hepatitis B 通路是其中一種顯著富集的信號(hào)通路，通過(guò)調(diào)控下游的AKt 蛋白，作用于PI3KAkt 通路，進(jìn)而調(diào)控下游的轉(zhuǎn)錄因子TP53，再作用于TP53 信號(hào)通路的caspase3 蛋白，進(jìn)而阻斷TGFβ 誘導(dǎo)的干細(xì)胞凋亡，達(dá)到抑制肝癌的進(jìn)展的目的[33]。Hepatitis B 信號(hào)通路通過(guò)調(diào)控下游的HBx 蛋白，可激活MAPK 細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，發(fā)揮抑制腫瘤抑制蛋白p53 的作用，同時(shí)具備抑制細(xì)胞凋亡和前凋亡的功能[34]。結(jié)果表明，赤茵合劑藥物成分可能通過(guò)調(diào)控乙型肝炎通路中多種蛋白的表達(dá)，參與肝細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等過(guò)程，從而減緩HBV 病程的進(jìn)展[35]。絕大多數(shù)病毒都會(huì)通過(guò)調(diào)控PI3K-Akt 信號(hào)通路，調(diào)節(jié)病毒在早期感染的活力[36]。研究表明，MAPK 信號(hào)通路參與炎癥反應(yīng)、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、腫瘤侵襲等多種生物學(xué)過(guò)程[37]。綜合分子對(duì)接結(jié)果分析，丹參酮IIA、槲皮素、木犀草素可能為赤茵合劑治療CHB 的關(guān)鍵核心成分，PTGS2、JUN、STAT3、1L1B 可能為赤茵合劑治療CHB 的關(guān)鍵核心靶點(diǎn)。

綜上，通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法和分子對(duì)接技術(shù)，預(yù)測(cè)出赤茵合劑治療CHB 的主要有效成分包括丹參酮IIA、槲皮素、木犀草素等，可能通過(guò)參與RNA 聚合酶II 啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控、轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控、基因表達(dá)的正調(diào)控、凋亡過(guò)程的負(fù)調(diào)控、細(xì)胞增殖的正調(diào)控等發(fā)揮治療CHB 的作用，其機(jī)制可能與Hepatitis B、PI3KAkt、MAPK、TNF 等相關(guān)炎癥信號(hào)通路和病毒感染信號(hào)通路相關(guān)，有助于從新的角度挖掘赤茵合劑治療CHB 的潛在價(jià)值，為后續(xù)進(jìn)一步的生物實(shí)驗(yàn)研究與臨床應(yīng)用提供了一定的理論基礎(chǔ)。

本研究以網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測(cè)的潛在有效成分是由藥物有效成分和疾病靶點(diǎn)對(duì)比映射后所得，隨著有效成分的篩選條件及所研究疾病的改變，可能導(dǎo)致中藥復(fù)方中公認(rèn)的有效成分未入選。且中藥方劑以中醫(yī)藥理論的配伍為基礎(chǔ)，各中藥協(xié)同發(fā)揮治療作用，機(jī)制復(fù)雜，并不是將單獨(dú)的中藥材分解成已知化學(xué)成分簡(jiǎn)單的加和，未入選的有效成分作用也不可忽略。研究發(fā)現(xiàn)，許多生物利用度低的中藥成分在腸道聚集的濃度高于血藥濃度，由于腸道菌群的穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)，這些中藥才能夠發(fā)揮良好的療效。對(duì)于那些生物利用度低及血藥濃度低的中藥來(lái)說(shuō)，只以O(shè)B 和DL作為篩選，考慮欠全面，且忽視了成分含量對(duì)藥效影響和成分之間的相互作用。鑒于以上所述網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的局限性，赤茵合劑治療CHB 的作用機(jī)制是否與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)的結(jié)果一致，將來(lái)需要進(jìn)一步的生物實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證預(yù)測(cè)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。