王俊曉，安 莉，馬 歡，朱會(huì)麗，賀素霞，郭 鑫，吳緒金，李 萌*

（1.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所/河南省糧食質(zhì)量安全與檢測重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，鄭州 450002；2.河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，鄭州 450046；3.黃河科技學(xué)院，鄭州 450063；4.河南省實(shí)驗(yàn)中學(xué)，鄭州 450002）

噻唑膦（Fosthiazate）屬于有機(jī)磷類殺線蟲劑，作用機(jī)制為對線蟲體內(nèi)乙酰膽堿酯酶的合成產(chǎn)生抑制作用，可用于防治根結(jié)線蟲等[1-2]；阿維菌素（Abamectin）屬于抗生素類殺蟲劑，作用方式為借助胃毒和觸殺作用對昆蟲進(jìn)行殺滅，作用機(jī)制為對神經(jīng)遞質(zhì)γ-氨基丁酸產(chǎn)生抑制，進(jìn)而激活氯化物通道，同樣可用于防治根結(jié)線蟲等[3-4]。

目前文獻(xiàn)主要報(bào)道了噻唑膦和阿維菌素對線蟲的防治效果[5-6]、劑型的制備[7]、毒力測定[8]、對植物活性成分的影響[9]，以及采用氣相色譜或液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用等技術(shù)進(jìn)行殘留檢測和膳食風(fēng)險(xiǎn)評估。例如，Lin等[10]將番茄和櫻桃番茄樣本經(jīng)乙腈提取，N-丙基乙二胺固相吸附劑（PSA）和十八烷基硅烷鍵合相吸附劑（C18）凈化，采用高效液相色譜借助紫外檢測器檢測噻唑膦的殘留量。Wu等[11]將黃瓜樣本用乙腈提取，經(jīng)過石墨化碳黑吸附劑（GCB）和PSA凈化，借助氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定噻唑膦的殘留量。張玉婷等[12]采用乙腈-水（3∶2，V/V）對西瓜樣本進(jìn)行提取，利用氣相色譜借助電子捕獲檢測器對噻唑膦殘留量進(jìn)行檢測。羅雪婷等[13]將茶樹菇樣本經(jīng)1%乙酸乙腈-水（8∶1，V/V）提取，采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜對阿維菌素的殘留量進(jìn)行檢測。陳曉蘭等[14]將羅漢果樣本用乙腈提取，土壤樣本用乙腈-水（2∶1，V/V）提取，PSA和C18凈化，采用超高效液相色譜對阿維菌素殘留量進(jìn)行檢測。然而，關(guān)于噻唑膦和阿維菌素在山藥中的殘留檢測方法、最終殘留量和長期膳食風(fēng)險(xiǎn)評估均未見報(bào)道。本研究旨在建立山藥中噻唑膦和阿維菌素的檢測方法，并對噻唑膦和阿維菌素的最終殘留量進(jìn)行長期膳食風(fēng)險(xiǎn)評估，為指導(dǎo)噻唑膦和阿維菌素在山藥上的合理使用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

供試試劑：10%噻唑膦微囊懸浮劑，鶴壁全豐生物科技有限公司；0.5%阿維菌素顆粒劑，汝陽自強(qiáng)生物科技有限公司；噻唑膦標(biāo)準(zhǔn)品（純度98.8%）、阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品（純度97.2%），德國Dr. Ehrenstorfer GmbH公司；甲酸（色譜純），CNW Technologies；乙腈（色譜純），默克股份兩合公司；氯化鈉（分析純），國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；N-丙基乙二胺固相吸附劑（PSA）、十八烷基硅烷鍵合相吸附劑（C18），天津博納艾杰爾科技有限公司。

供試儀器：LCMS-8050高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，日本島津儀器公司；TARGIN VX-Ⅲ多管渦旋振蕩器，北京踏錦科技有限公司；L-550臺(tái)式低速離心機(jī)，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司；Milli-Q超純水，默克Millipore公司。

1.2 田間試驗(yàn)

按照NY/T 788—2018《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[15]的要求，于河南焦作、河北邢臺(tái)、山西忻州、遼寧遼陽、安徽亳州、福建福安6地進(jìn)行田間試驗(yàn)。按照農(nóng)藥標(biāo)簽規(guī)定設(shè)置噻唑膦和阿維菌素試驗(yàn)有效劑量分別為3 000 g/hm2和375 g/hm2，于播種前施藥1次，在收獲期采集樣本。隨機(jī)采樣，每個(gè)小區(qū)采集2個(gè)平行樣品，每份樣品采集12個(gè)塊莖，用不銹鋼刀切碎樣品，并充分混勻，于-20℃儲(chǔ)藏。

1.3 提取及凈化

準(zhǔn)確稱取10.00 g山藥樣品置于50 mL離心管中，加入提取溶劑（乙腈∶水=2∶1，V/V）30 mL，3 g氯化鈉，振蕩提取20 min后于4 000 r/min離心，取1.5 mL上清液裝入含有0.02 g PSA和0.03 g C18的2 mL離心管中，渦旋混勻2 min，于4 000 r/min離心5 min，取上清液過0.22 μm有機(jī)濾膜至進(jìn)樣小瓶，待分析。

1.4 儀器條件

色譜條件。液相色譜柱：島津Shim-pack GISS C18（2.1 mm×100 mm，1.9 μm）；柱溫：40℃；流速：0.4 mL/min；進(jìn)樣量：5 μL。洗脫程序：流動(dòng)相A為0.2%甲酸水溶液，B為乙腈溶液。梯度洗脫程序?yàn)?～1 min，80%A；1～2 min，80%～20%A；2～5 min，20%A；5～6 min，20%～80%A；6～8 min，80%A。

質(zhì)譜條件。掃描方式：電噴霧離子源ESI＋；碰撞氣（氬氣）：270 kPa；霧化氣流速：3.0 L/min；加熱氣流速：10 L/min；接口溫度：300℃；脫溶劑管溫度：250℃；加熱塊溫度：400℃；多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）下監(jiān)測離子和碰撞電壓見表1。

表2 山藥中噻唑膦和阿維菌素的添加回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=5）

1.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別稱取噻唑膦標(biāo)準(zhǔn)品0.010 2 g和阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品0.010 2 g于10 mL容量瓶中，加入乙腈超聲至完全溶解，冷卻后定容成1 000 mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。分別用乙腈和山藥空白基質(zhì)溶液進(jìn)行稀釋，稀釋成0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在1.4條件下進(jìn)行檢測。

1.6 添加回收

分別在山藥空白對照樣品中添加噻唑膦和阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加水平為0.01、0.1、1 mg/kg，混合均勻，靜置2 h，按照1.3的提取和凈化方法進(jìn)行處理，在1.4條件下進(jìn)行檢測，計(jì)算山藥中噻唑膦和阿維菌素的添加回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.7 數(shù)據(jù)處理

1.7.1 基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)。樣品的基質(zhì)效應(yīng)（ME）按式（1）計(jì)算。

式中：當(dāng)ME＞0時(shí)，為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，當(dāng)ME＜0時(shí)，為基質(zhì)減弱效應(yīng)；-20%≤ME≤20%為弱基質(zhì)效應(yīng)；-50%≤ME＜-20%或20%＜ME≤50%為中等基質(zhì)效應(yīng)；ME＜-50%或ME＞50%為強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)。

1.7.2 慢性膳食風(fēng)險(xiǎn)評估

膳食風(fēng)險(xiǎn)評估。按照我國膳食結(jié)構(gòu)的組成，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果得到的殘留試驗(yàn)中值與國家規(guī)定的最大殘留限量，采用公式（2）計(jì)算噻唑膦和阿維菌素的國家估算每日攝入量（NEDI），再依據(jù)2種藥劑的每日允許攝入量（ADI），按式（3）計(jì)算風(fēng)險(xiǎn)商（RQ）。

式中：STMRi為農(nóng)藥在某種食品中的規(guī)范殘留中值，mg/kg；STMR-Pi為加工因子核正的規(guī)范殘留試驗(yàn)中值，mg/kg；Fi為一般人群對該食品的消費(fèi)量，kg；bw為中國人均體重，kg（一般以63 kg計(jì)）；ADI為農(nóng)藥的每日允許攝入量mg/(kg bw)。

當(dāng)RQ≤100%時(shí)，表示其風(fēng)險(xiǎn)可以接受，RQ值越小，風(fēng)險(xiǎn)越??；當(dāng)RQ＞100%時(shí)，表示有不可接受的慢性風(fēng)險(xiǎn)，RQ值越大，風(fēng)險(xiǎn)越大。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法驗(yàn)證

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

以基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制供試試劑標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)溶液范圍為0.005～0.5 mg/L時(shí)，噻唑膦的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=17 200 560.3x-14 477.99，相關(guān)系數(shù)R2為1.000；阿維菌素的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=286 581x-147.28，相關(guān)系數(shù)R2為0.999 5。對比乙腈溶液和山藥空白基質(zhì)溶液配制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，噻唑膦在山藥中的基質(zhì)效應(yīng)為1.1%，為弱基質(zhì)效應(yīng)；而阿維菌素在山藥中的基質(zhì)效應(yīng)為45.9%，在20%～50%范圍內(nèi)，為中等基質(zhì)效應(yīng)，因此采用山藥空白基質(zhì)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.1.2 添加回收率

當(dāng)添加水平在0.01、0.1、1 mg/kg時(shí)，噻唑膦和阿維菌素的平均回收率分別為87%～110%、80%～89%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.6%～5.5%、1.0%～2.6%。2種藥劑在山藥中的最低檢測濃度均為0.01 mg/kg，添加回收率、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差、最低檢測濃度均符合NY/T 788—2018《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[15]規(guī)定。

2.2 最終殘留量

噻唑膦和阿維菌素施藥劑量分別為3 000 g/hm2和375 g/hm2，于播種前施藥1次，在收獲期采收，山藥中噻唑膦和阿維菌素的最終殘留量均為＜0.01 mg/kg。GB 2763—2021《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[16]規(guī)定山藥中阿維菌素的最大殘留限量為0.02 mg/kg，因此本試驗(yàn)山藥中阿維菌素的最終殘留量低于我國制定的限量標(biāo)準(zhǔn)。

2.3 慢性膳食攝入評估

我國規(guī)定阿維菌素的每日允許攝入量（ADI）為0.001 mg/kg bw，噻唑膦的ADI值為0.004 mg/kg bw，結(jié)合試驗(yàn)所得的殘留試驗(yàn)中值（STMR）0.01 mg/kg，根據(jù)1.7.2中公式進(jìn)行計(jì)算，得到普通人群的慢性膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評估結(jié)果（表3、表4）。結(jié)果表明，噻唑膦和阿維菌素膳食風(fēng)險(xiǎn)均小于100%，說明噻唑膦和阿維菌素對一般消費(fèi)人群的危害是可以接受的。

表3 噻唑膦膳食風(fēng)險(xiǎn)評估

表4 阿維菌素膳食風(fēng)險(xiǎn)評估

3 討論與結(jié)論

在農(nóng)藥殘留檢測過程中，基質(zhì)效應(yīng)是影響定量準(zhǔn)確性的關(guān)鍵因素[17]，基質(zhì)中的干擾物會(huì)與待測物共同競爭色譜柱上的活性位點(diǎn)，影響待測物進(jìn)入質(zhì)譜檢測器中，改變定量結(jié)果的準(zhǔn)確度[18]。本試驗(yàn)噻唑膦為弱基質(zhì)效應(yīng)，而阿維菌素的基質(zhì)效應(yīng)均在20%～50%范圍內(nèi)，屬于中等基質(zhì)效應(yīng)，在使用高效液相色譜-質(zhì)譜分析山藥中噻唑膦和阿維菌素菌殘留量時(shí)，建議使用空白基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行定量。

最終殘留試驗(yàn)測定了山藥塊莖中噻唑膦和阿維菌素的殘留量。結(jié)果表明，在山藥塊莖中噻唑膦和阿維菌素的最終殘留量較低，均為＜0.01 mg/kg。分析原因可能是噻唑膦和阿維菌素的半衰期均小于30 d[19-20]，屬于易降解農(nóng)藥；山藥的生長周期為210 d左右，噻唑膦和阿維菌素均是播種前施藥，農(nóng)藥在山藥生長過程中可能被環(huán)境中的微生物分解，因而不易在山藥中富集。

為指導(dǎo)噻唑膦和阿維菌素在山藥上的合理使用，對其進(jìn)行膳食風(fēng)險(xiǎn)評估。當(dāng)噻唑膦施藥有效劑量為3 000 g/hm2，播種前藥土法施藥1次；阿維菌素施藥有效劑量為375 g/hm2，播種前溝施施藥1次，在收獲期采收山藥，噻唑膦和阿維菌素的普通人群國家估計(jì)每日攝入量分別是0.047、0.059 mg，分別占日允許攝入量的18.7%、93.4%，因此對一般消費(fèi)人群是安全的。