林雀躍，張穎婷，梁柳春，姚 力，鐘小清，唐 倩，羅 軼*

橫經(jīng)席藥材的生藥學(xué)研究及有效成分測(cè)定

林雀躍1，張穎婷1，梁柳春1，姚 力1，鐘小清2，唐 倩2，羅 軼1*

1. 廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 南寧 530021 2. 桂林三金藥業(yè)股份有限公司，廣西 桂林 541004

對(duì)廣西民族藥材橫經(jīng)席進(jìn)行基原調(diào)查和生藥學(xué)研究，并對(duì)有效成分進(jìn)行測(cè)定。通過(guò)查閱文獻(xiàn)厘清橫經(jīng)席的歷史使用沿革及植物分布情況，野外實(shí)地調(diào)研橫經(jīng)席的植物基原，采集并制作臘葉標(biāo)本，通過(guò)藥材性狀、顯微特征等方法進(jìn)行生藥學(xué)研究，采用島津液相色譜儀Nexera LC-40，島津Shim-pack GIST C18-AQ HP色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.9 μm），乙腈-0.4%甲酸水為流動(dòng)相，體積流量0.3 mL/min，梯度洗脫，柱溫35 ℃，PDA檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)275 nm，建立橫經(jīng)席藥材中穗花杉雙黃酮和異棘苷的含量測(cè)定方法。橫經(jīng)席的野外資源日益匱乏，市場(chǎng)上常見(jiàn)東南亞進(jìn)口的紅厚殼屬植物與橫經(jīng)席混用，采用建立的方法能夠有效地鑒別橫經(jīng)席藥材。所建立的含量測(cè)定方法穩(wěn)定性和重復(fù)性良好，線(xiàn)性范圍寬（5.360～379.800 μg/mL）、線(xiàn)性較好（2＞0.999），平均回收率在98.3%～99.0%。為完善橫經(jīng)席藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和藥合理應(yīng)用提供依據(jù)。

橫經(jīng)席；基原調(diào)查；性狀鑒別；顯微鑒別；穗花杉雙黃酮；異棘苷；UPLC

橫經(jīng)席為藤黃科紅厚殼屬植物薄葉紅厚殼Gardn. et Champ.的干燥全株，具有祛風(fēng)濕、壯筋骨、補(bǔ)腎強(qiáng)腰、活血止痛的功效，常用于治療風(fēng)濕骨痛、跌打損傷、月經(jīng)不調(diào)等癥[1-3]。橫經(jīng)席現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)《廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)》1990年版、《廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》第一卷以及《廣西壯族自治區(qū)瑤藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》第一卷，不僅是廣西民間常用草藥[4-18]，也是成方制劑“正骨水”“婦炎凈膠囊”“婦炎凈片”等的原料藥，年需求量較大。課題組在藥材市場(chǎng)上發(fā)現(xiàn)，除正品橫經(jīng)席藥材外，有部分從東南亞進(jìn)口的紅厚殼屬植物也充當(dāng)橫經(jīng)席售賣(mài)，造成了品種混亂。目前，關(guān)于橫經(jīng)席的研究多集中在化學(xué)成分分析[19-22]上，無(wú)任何有關(guān)其植物基原、生藥學(xué)研究及含量測(cè)定方面的報(bào)道，而藥材的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也僅有性狀的描述，需要增加顯微等其他鑒別特征以更好地鑒別橫經(jīng)席正品與偽品，增加指標(biāo)性成分的含量測(cè)定以評(píng)價(jià)橫經(jīng)席藥材質(zhì)量的優(yōu)劣。為解決上述問(wèn)題，課題組對(duì)橫經(jīng)席進(jìn)行了野外調(diào)研、生藥學(xué)及含量測(cè)定的研究，厘清了橫經(jīng)席藥材的植物基原，建立了橫經(jīng)席專(zhuān)屬性檢驗(yàn)方法，為完善橫經(jīng)席藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和藥廠(chǎng)橫經(jīng)席藥材收購(gòu)提供理論依據(jù)。

1 材料與試劑

1.1 材料

橫經(jīng)席藥材正品通過(guò)野外采集獲得，經(jīng)廣西中醫(yī)藥研究院黃云峰主任藥師鑒定均為薄葉紅厚殼Gardn. et Champ.，樣品編號(hào)為S1～S10，均有對(duì)應(yīng)的植物臘葉標(biāo)本，標(biāo)本保存于廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所中藥標(biāo)本室。橫經(jīng)席偽品為玉林藥材市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)，由于未收集到花、果等繁殖器官部位，只能鑒定到屬級(jí)，經(jīng)黃云峰主任藥師鑒定為紅厚殼屬sp.植物，樣品編號(hào)為S13～S16。

對(duì)照品穗花杉雙黃酮（批號(hào)MUST-22111022）購(gòu)自成都曼斯特生物科技有限公司，異棘苷（批號(hào)TS22C063-DT11）購(gòu)自上海詩(shī)丹德標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)均≥98%。

1.2 試劑

島津Nexera LC-40超高壓液相色譜儀，島津Shim-pack GST C18-AQ HP色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.9 μm），CP224S型電子分析天平（德國(guó)賽多利斯公司），XS205型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司），KQ-600E型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），Milli-Q型超純水機(jī)（美國(guó)Millipore公司）。G12型數(shù)碼相機(jī)（佳能公司），BM2000型顯微鏡（南京江南永新光學(xué)有限公司）。

乙腈（色譜純）購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司，甲醇（批號(hào)20221026）、醋酸乙酯（批號(hào)20221227）、環(huán)己烷（批號(hào)20211102）、冰醋酸（批號(hào)20140422）、丙三醇（批號(hào)20220814）均為分析純，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

2 方法

2.1 橫經(jīng)席藥材資源情況

紅厚殼屬植物在我國(guó)一共分布有4個(gè)種，除了橫經(jīng)席的原植物為薄葉紅厚殼外，還有紅厚殼、滇南紅厚殼和蘭嶼紅厚殼。4種植物在我國(guó)的分布地域較為集中，薄葉紅厚殼僅分布在廣西和廣東的南部以及海南地區(qū)，紅厚殼僅分布在海南及臺(tái)灣地區(qū)，滇南紅厚殼僅分布在云南南部地區(qū)，蘭嶼紅厚殼僅分布在臺(tái)灣東部地區(qū)。課題組在廣西全區(qū)范圍進(jìn)行了野外調(diào)研，共采集了10個(gè)不同區(qū)域的植物臘葉標(biāo)本及對(duì)應(yīng)的10批橫經(jīng)席藥材（樣品編號(hào)S1～S10），植物臘葉標(biāo)本見(jiàn)圖1。

圖1 薄葉紅厚殼植物標(biāo)本圖

野外調(diào)研發(fā)現(xiàn)，橫經(jīng)席野生資源在廣西境內(nèi)分布呈片區(qū)狀，主要分布在桂東、桂東南及桂南地區(qū)，東經(jīng)108°0'～110°55'，北緯21°42'～24°7'，海拔56～609 m），包括梧州、賀州、欽州、桂平、貴港、玉林、防城港、東興等多個(gè)市（縣）行政區(qū)域，但資源量較小，種群呈零星分布。橫經(jīng)席多生長(zhǎng)于八角林、竹林、馬尾松林、雜木林等疏林或密林中，位于林分中下層，常伴有芒萁(Houttuyn) Nakaike、九節(jié)Wall.、粗葉榕Vahl、半邊旗L.sp.、南方紫金牛D. Don.、石柑子(Raf.) Merr.、求米草(Arduino) Beauv.、莎草屬sp.等植物。橫經(jīng)席植株生長(zhǎng)緩慢，呈低矮小灌木狀，根為直根系，主根發(fā)達(dá)，須根少，在土層肥厚，疏松肥沃的壤土、砂壤土中生長(zhǎng)較好，澇洼地或土壤貧瘠生境中生長(zhǎng)不良。

玉林藥材市場(chǎng)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，橫經(jīng)席為小宗藥材，隨機(jī)詢(xún)問(wèn)50家草藥售賣(mài)商鋪，共有6家售賣(mài)橫經(jīng)席藥材，分別購(gòu)買(mǎi)6批橫經(jīng)席藥材，經(jīng)本實(shí)驗(yàn)建立的方法進(jìn)行檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)2批為正品（樣品編號(hào)為S11、S12），4批為偽品（樣品編號(hào)S13～S16）。運(yùn)用DNA條形碼的方法，擴(kuò)增了野外采集的10批正品（編號(hào)S1～S10）的rbcL序列與4批偽品（樣品編號(hào)S13～S16）的進(jìn)行對(duì)比[23-24]，發(fā)現(xiàn)4批偽品的峰圖呈現(xiàn)一定程度的底峰和一定數(shù)量的SNP位點(diǎn)，與正品序列不一致，提示其植物基原可能不是我國(guó)分布的品種，與商家提供的從國(guó)外進(jìn)口的信息一致。

2.2 橫經(jīng)席藥材生藥學(xué)鑒定研究

2.2.1 性狀鑒別 本品主根呈長(zhǎng)圓錐形或圓柱形，粗細(xì)不等，表面棕色至淡棕色，有細(xì)縱皺紋，栓皮脫落處呈棕紅色。莖圓柱形，表面灰綠色至灰褐色。幼枝四棱形，有翅，黃綠色。單葉對(duì)生，薄革質(zhì)，長(zhǎng)圓形長(zhǎng)圓狀或披針形，長(zhǎng)6～12 cm，寬1.5～4 cm，黃綠色至灰綠色，兩面有光澤，無(wú)毛，頂端漸尖，急尖或尾狀漸尖，基部楔形，邊緣全緣，微反卷，中脈兩面凸起，側(cè)脈多而細(xì)密，排列整齊，與中脈近垂直。有時(shí)可見(jiàn)核果生于葉腋，長(zhǎng)圓形，直徑約8 mm。根、莖質(zhì)堅(jiān)硬，難折斷，斷面纖維性。氣微，味苦、澀。見(jiàn)圖2。偽品與正品相比，區(qū)別在于部分小枝可見(jiàn)密被銹紅色柔毛，葉革質(zhì)，質(zhì)地比正品厚，上表面主脈處的毛常脫落，下表面主脈被銹紅色柔毛，相鄰兩條側(cè)脈寬度相較于正品更小。見(jiàn)圖3。

2.2.2 顯微鑒別 橫經(jīng)席藥材根橫切面為木栓層細(xì)胞數(shù)列，黃棕色。皮層有大型分泌道散在，直徑可達(dá)200 μm，薄壁細(xì)胞中含草酸鈣方晶和簇晶。韌皮部纖維束壁薄，有分泌道分布，韌皮射線(xiàn)明顯，有時(shí)可見(jiàn)韌皮射線(xiàn)延伸至皮層。木質(zhì)部射線(xiàn)細(xì)胞多為1列，導(dǎo)管單個(gè)散在或數(shù)個(gè)相聚，斷續(xù)排列成放射狀。見(jiàn)圖4。

橫經(jīng)席藥材莖橫切面為表皮或殘存，細(xì)胞一列，外壁角質(zhì)增厚。木栓細(xì)胞數(shù)列。皮層窄，薄壁細(xì)胞含淀粉粒和草酸鈣方晶，分泌道散在，橢圓形，直徑可達(dá)150 μm。韌皮部纖維束壁薄，有分泌道分布，韌皮射線(xiàn)明顯。木質(zhì)部寬廣，木射線(xiàn)多為1列。髓部類(lèi)方形，髓薄壁細(xì)胞有的含淀粉粒、草酸鈣方晶和簇晶，分泌道散在，直徑約50 μm。見(jiàn)圖5。

1-藥材全貌 2-根 3-莖 4-小枝 5-葉 6-葉側(cè)脈

1-藥材全貌 2-莖 3-葉 4-小枝 5-葉中脈 6-葉側(cè)脈

圖4 橫經(jīng)席根橫切面顯微圖

圖5 橫經(jīng)席莖橫切面顯微圖

橫經(jīng)席葉橫切面為上下表皮細(xì)胞一列，外側(cè)角質(zhì)層增厚。柵欄組織不發(fā)達(dá)，細(xì)胞1列，類(lèi)方形，排列緊密，占葉肉組織1/6，不通過(guò)主脈；海綿組織發(fā)達(dá)，排列疏松。主脈維管束類(lèi)半月形，木質(zhì)部位于上部，導(dǎo)管扇形排列，下部韌皮部狹小，外側(cè)纖維束壁薄；薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶和簇晶，分泌道散在，直徑約50 μm。見(jiàn)圖6。

圖6 橫經(jīng)席葉橫切面顯微圖

橫經(jīng)席粉末顯微特征為莖表皮細(xì)胞黃棕色，長(zhǎng)方形或類(lèi)多角形。葉下表皮細(xì)胞垂周壁波浪狀彎曲，氣孔不定式。纖維成束或散在，直徑約8～20 μm，壁稍木化。淀粉粒甚多，類(lèi)圓形，直徑4～15 μm；復(fù)粒由2～3分粒組成。見(jiàn)圖7。

1-莖表皮細(xì)胞 2-葉表皮細(xì)胞 3-纖維束 4-淀粉粒

橫經(jīng)席藥材偽品的根、莖、葉橫切面顯微特征與正品較為相似，區(qū)別僅在于偽品葉橫切面有時(shí)可觀(guān)察到非腺毛。偽品粉末顯微特征與正品有一定差異，體現(xiàn)在偽品粉末可觀(guān)察到較多石細(xì)胞及非腺毛（圖8）。

圖8 橫經(jīng)席藥材偽品粉末圖

3 橫經(jīng)席的定量測(cè)定

3.1 色譜條件

UPLC-UV分析，流動(dòng)相為0.4%甲酸水溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脫：0～2 min，45% B，2～15 min，45%～90% B，15～18 min，90% B，18～20 min，90%～45% B；島津Shim-packGST C18-AQ HP色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.9 μm），檢測(cè)波長(zhǎng)275 nm，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量2 μL。色譜圖見(jiàn)圖9。

1-穗花杉雙黃酮 2-異棘苷

3.2 對(duì)照品溶液的制備

分別取穗花杉雙黃酮、異棘苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成混合對(duì)照品母液，并逐級(jí)稀釋成5個(gè)質(zhì)量濃度，待用。

3.3 供試品溶液的制備

取本品約1 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入甲醇20 mL，密塞，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理（功率360 W，頻率45 kHz）30 min，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

3.4 線(xiàn)性關(guān)系考察

取稀釋好的混合對(duì)照品溶液，每個(gè)濃度進(jìn)樣2 μL，按上述“3.1”項(xiàng)下的條件進(jìn)樣分析，以峰面積為縱坐標(biāo)，以各對(duì)照品的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。計(jì)算2個(gè)對(duì)照品的線(xiàn)性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線(xiàn)性范圍、定量限和檢測(cè)限見(jiàn)表1。結(jié)果表明穗花杉雙黃酮和異棘苷2個(gè)成分均具有良好的線(xiàn)性范圍和線(xiàn)性關(guān)系，且檢測(cè)靈敏度較高。

3.5 精密度試驗(yàn)

取供試品溶液（S3），按“3.1”項(xiàng)下條件連續(xù)進(jìn)樣6次，穗花杉雙黃酮和異棘苷色譜峰峰面積的RSD分別為1.26%、1.59%。

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液（S3），按“3.1”項(xiàng)下條件分別于0、2、4、8、16、24 h進(jìn)樣2 μL分析，計(jì)算穗花杉雙黃酮和異棘苷色譜峰峰面積的RSD分別為1.85%、1.67%。

3.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密平行稱(chēng)取6份S3樣品1 g，按“3.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，計(jì)算穗花杉雙黃酮和異棘苷含量的RSD值分別為1.67%、1.95%。

3.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)定已測(cè)定的S3樣品6份，各0.5 g，按照1∶1的質(zhì)量比例分別加入單一對(duì)照品，按“3.3”項(xiàng)下條件制備，按“3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，計(jì)算加樣回收率，穗花杉雙黃酮、異棘苷的加樣回收率分別為98.3%、99.0%，RSD分別為1.70%、2.33%。

表1 2種化學(xué)成分的線(xiàn)性方程、相關(guān)系數(shù)、線(xiàn)性范圍、定量限和檢測(cè)限

3.9 樣品含量測(cè)定

對(duì)12批橫經(jīng)席正品及4批橫經(jīng)席偽品進(jìn)行含量測(cè)定分析，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 12批橫經(jīng)席正品及4批橫經(jīng)席偽品中2種化學(xué)成分含量測(cè)定結(jié)果

4 討論

從植物基原上看，橫經(jīng)席藥材的來(lái)源只有薄葉紅厚殼一個(gè)種，該植物在我國(guó)地理分布區(qū)域較窄，僅見(jiàn)于廣西、廣東及海南部分地區(qū)，其野生資源已呈匱乏態(tài)勢(shì)。薄葉紅厚殼為灌木或小喬木，與其同屬另外3種植物在原植物形態(tài)（均為喬木）上差別較大，特別是在葉子的大小及形狀上有明顯的區(qū)別，因此，僅我國(guó)分布的其他3種紅厚殼植物基原與橫經(jīng)席藥材基原發(fā)生混用的機(jī)率不高。但隨著橫經(jīng)席藥材國(guó)內(nèi)資源的匱乏及國(guó)際貿(mào)易頻次的增加，越來(lái)越多來(lái)自東南亞國(guó)家的紅厚殼屬其他種植物也以橫經(jīng)席藥材的名義出現(xiàn)在市場(chǎng)中，且從性狀上看，與橫經(jīng)席藥材較為相似，不易于區(qū)別，造成了目前橫經(jīng)席藥材使用品種的混亂。

從生藥學(xué)研究結(jié)果來(lái)看，橫經(jīng)席正品與偽品具有差異，性狀特征主要體現(xiàn)在葉子的形狀、質(zhì)地及側(cè)脈間距上，顯微特征體現(xiàn)在偽品的粉末中可觀(guān)察到石細(xì)胞及非腺毛（正品均無(wú)）。

從含量測(cè)定的結(jié)果來(lái)看，橫經(jīng)席正品異棘苷含量較高，異棘苷為橫經(jīng)席藥材主要化學(xué)成分之一，但橫經(jīng)席偽品幾乎不含異棘苷，可通過(guò)測(cè)定異棘苷的含量來(lái)評(píng)價(jià)橫經(jīng)席藥材質(zhì)量的優(yōu)劣。

橫經(jīng)席野生資源已經(jīng)不能滿(mǎn)足目前醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的需求，開(kāi)展橫經(jīng)席藥材仿野生馴化和良種選育迫在眉睫，同時(shí)，建立橫經(jīng)席種質(zhì)資源庫(kù)對(duì)于橫經(jīng)席藥材資源的保護(hù)和可持續(xù)開(kāi)發(fā)利用具有重要意義。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Pharmacognostic identification and determination of active ingredient of

LIN Que-yue1, ZHANG Ying-ting1, LIANG Liu-chun1, YAO Li1, ZHONG Xiao-qing2, TANG Qian2, LUO Yi1

1. Guangxi Institute for Food and Drug Control, Nanning 530021, China 2. Gulin Sanjin Pharmaceutical Co., Ltd., Guilin 541004, China

To study present resource situation and establish methods for the pharmacognostic identification and determination of the active ingredient of Hengjingxi ().To investigate the original plant sources and the folk useby referring to the herbal literature. The original plants ofwere surveyed and the original plant specimens were collected through field investigation. The pharmacognosy ofwas studied by morphologic characteristics, character identification, microscopic identifications and TLC identification. A UPLC-UV method for simultaneous determination amentoflavone and isoapetalic acid inwas established by using Shimadzu Shim-pack GIST C18-AQ HP column (100 mm × 2.1 mm, 1.9 μm), acetonitrile-0.4% formic acid water as mobile phase, gradient elution with the flow rate of 0.3 mL/min, the column temperature was 35 ℃, and the detection wavelength of PDA detector was 275 nm.The wild resource ofhad reduced gradually. The other plants of genuswhich imported from Southeast Asia were mixed with. The established method can be used for the identification of. The two compounds have good separation, stability and repeatability, with wide linear range (5.360—379.8 μg/mL) and good linearity (2＞0.999). The average recovery was 98.3%—99.0%.The pharmacognostic identification can provide a theoretical basis for quality control and medical material supply offor pharmaceutical factory.

; original plant survey; character identification; microscopic identifications; amentoflavone; isoapetalic acid; UPLC

R286.2

A

0253 - 2670(2023)12 - 4012 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.12.027

2022-11-09

國(guó)家藥監(jiān)局藥品注冊(cè)司專(zhuān)項(xiàng)“特色民族藥檢驗(yàn)方法的示范性研究”（NIFDC-TCM2021-047-MZY009）；廣西科技重大專(zhuān)項(xiàng)“80種桂產(chǎn)特色中藥材配方顆粒制備工藝與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及產(chǎn)品開(kāi)發(fā)研究”（桂科AA22096019）

林雀躍（1983—），女，副主任藥師，碩士研究生，從事中藥質(zhì)量研究。E-mail: linqueyue@163.com

通信作者：羅 軼（1972—），女，主任藥師，學(xué)士，從事中藥質(zhì)量研究。E-mail: luoyi20010211@163.com

[責(zé)任編輯 時(shí)圣明]