甄丹丹，黃耀斌，盧顯興，陳景敏，丘 琴，張 淼，史俊豪

基于UPLC-Q-TOF-MS和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討絲穗金粟蘭水提物抗炎鎮(zhèn)痛藥效物質(zhì)及作用機(jī)制

甄丹丹1，黃耀斌2#，盧顯興3，陳景敏4*，丘 琴1，張 淼1，史俊豪1

1. 廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530022 2. 廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣西 南寧 530200 3. 廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院，廣西 南寧 530200 4. 玉林市中醫(yī)醫(yī)院，廣西 玉林 537100

利用高效液相色譜-四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-Q-TOF-MS）分析絲穗金粟蘭水提物的主要成分，并結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法對其抗炎鎮(zhèn)痛藥效物質(zhì)及作用機(jī)制進(jìn)行預(yù)測分析。結(jié)合ChemSpider數(shù)據(jù)庫、mzCloud平臺及現(xiàn)有文獻(xiàn)研究，對目標(biāo)化合物二級質(zhì)譜特征碎片離子進(jìn)行比對確認(rèn)，鑒定絲穗金粟蘭水提物的化學(xué)成分；通過FAFDrug4數(shù)據(jù)庫篩選絲穗金粟蘭水提物的活性成分，運(yùn)用Pharmmapper平臺和Uniprot數(shù)據(jù)庫預(yù)測絲穗金粟蘭的成分靶點(diǎn)，GeneCards平臺獲得相關(guān)疾病靶點(diǎn)，利用Venny平臺獲得成分和疾病的交集靶點(diǎn)；通過String數(shù)據(jù)庫和Cytoscape3.7.0軟件構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)，并篩選核心靶點(diǎn)，利用David數(shù)據(jù)庫對潛在的核心靶點(diǎn)進(jìn)行基因本體（gene ontology，GO）功能和京都基因與基因組百科全書（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析，并構(gòu)建“活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)。從絲穗金粟蘭水提物中共鑒定45個(gè)成分，包括有機(jī)酸類、黃酮類、香豆素類、倍半萜類、含氮類化合物；篩選出33種活性成分，活性成分與疾病交集靶點(diǎn)70個(gè)；通過PPI網(wǎng)絡(luò)篩選出核心靶點(diǎn)13個(gè)；富集分析顯示，絲穗金粟蘭主要參與蛋白磷酸酶結(jié)合、胰島素受體結(jié)合、蛋白激酶活性等功能，通過酪氨酸激酶受體信號通路、腫瘤壞死因子信號通路、酪氨酸激酶抑制劑耐藥等通路抗炎鎮(zhèn)痛。通過對“活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)分析進(jìn)一步得到5個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)和8個(gè)關(guān)鍵活性成分。通過結(jié)合UPLC-Q-TOF-MS和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法闡明了絲穗金粟蘭是通過多成分、多靶點(diǎn)、多途徑發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛的作用，為絲穗金粟蘭的進(jìn)一步質(zhì)量評價(jià)及藥理活性的研究提供參考。

絲穗金粟蘭；抗炎鎮(zhèn)痛；活性成分；藥效物質(zhì)基礎(chǔ)；UPLC-Q-TOF-MS；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；木犀草素；綠原酸；新綠原酸；迷迭香酸；依斯坦布林A；莽草酸；石竹素；原兒茶酸

絲穗金粟蘭為金粟蘭屬植物絲穗金粟蘭(A. Gray) Solms-Laub的全草，有祛風(fēng)散寒、活血止痛、解毒消腫的功效，適用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、跌打腫痛、慢性腸胃炎、瘡癤腫毒等。目前對其抗炎鎮(zhèn)痛藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究鮮有報(bào)道。中藥化學(xué)成分復(fù)雜，傳統(tǒng)的鑒別方法在未知成分的結(jié)構(gòu)解析方面存在一定困難。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)將液相與質(zhì)譜的優(yōu)勢相結(jié)合，可以快速分離和鑒定中藥中的復(fù)雜成分，在中藥的成分分析、質(zhì)量控制及中藥血清藥物化學(xué)方面具有一定優(yōu)勢[1]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是大數(shù)據(jù)背景下的產(chǎn)物，融合了多門學(xué)科的概念和方法，通過構(gòu)建“藥物活性成分-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，可以從整體上分析多成分中藥的作用機(jī)制。因此，廣泛運(yùn)用于中藥或民族藥的研究中[2-3]。

本研究采用UPLC-Q-TOF-MS技術(shù)對絲穗金粟蘭水提物中的化學(xué)成分進(jìn)行解析并采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法對其抗炎和鎮(zhèn)痛潛在藥效物質(zhì)及作用機(jī)制進(jìn)行預(yù)測，為絲穗金粟蘭今后藥理活性及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料

1.1 藥材與試劑

絲穗金粟蘭采自廣西來賓市金秀縣，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)朱意麟實(shí)驗(yàn)師鑒定為金粟蘭屬植物絲穗金粟蘭(A. Gray) Solms-Laub的全草。乙腈和甲醇均為質(zhì)譜純，購自美國Thermo Fisher Scientific公司；水為超純水，購自美國默克公司；甲酸和乙酸銨均為質(zhì)譜純，購自上海安譜科學(xué)儀器有限公司。

1.2 儀器

TripleTOF 5600型高分辨質(zhì)譜儀（美國SCIEX公司）；UltiMate 3000型超高效液相色譜（美國Thermo Fisher Scientific公司）。

2 方法

2.1 供試品溶液的制備

取絲穗金粟蘭藥材剪碎成1 cm大小，稱取500 g，加入10倍量蒸餾水浸泡30 min，回流提取2次，每次1.5 h，用醫(yī)療紗布濾過，合并2次濾液并濃縮成浸膏，精密稱取絲穗金粟蘭水提物浸膏250 mg，轉(zhuǎn)移置10 mL量瓶中并加入50%甲醇溶液，定容至刻度，超聲15 min，濾過后濾液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2 色譜條件

Acquity UPLC HSS T3色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；正離子模式流動相為0.1%甲酸水溶液（A）-0.1%甲酸乙腈（B），負(fù)離子模式流動相為2 mmol/L乙酸銨溶液（A）-乙腈（B）。正、負(fù)離子均梯度洗脫：0～1.5 min，5% B；1.5～2.5 min，5%～10% B；2.5～14 min，10%～40% B；14～22 min，40%～95% B；22～25 min，95% B；25～26 min，95%～5% B；26～30 min，5% B。體積流量0.4 mL/min；柱溫40 ℃；進(jìn)樣量3 μL。

2.3 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源；霧化氣壓60 psi（1 psi＝6.895 kPa）；輔助氣壓60 psi；氣簾氣壓35 psi；溫度650 ℃；噴霧電壓5000 V（正離子模式）或?4000 V（負(fù)離子模式），在每個(gè)數(shù)據(jù)采集循環(huán)中，篩選出強(qiáng)度最強(qiáng)且大于100的分子離子進(jìn)行采集對應(yīng)的二級質(zhì)譜數(shù)據(jù)。一級采集范圍/50～1200，轟擊能量30 eV，每50毫秒采集10張二級譜圖。

2.4 絲穗金粟蘭活性成分和靶點(diǎn)篩選

將解析得到的絲穗金粟蘭成分上傳至FAFDrug4（fafdrugs4.rpbs.univ-paris-diderot.fr）數(shù)據(jù)庫進(jìn)行活性成分的篩選[4]。

2.5 炎癥和疼痛的靶點(diǎn)篩選

將獲取的絲穗金粟蘭活性成分導(dǎo)入Pharmmapper（http://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/）平臺預(yù)測潛在的作用靶點(diǎn)，使用UniProt（http://www.uniprot.org/）平臺進(jìn)行校正。采用GeneCards（http://www.genecards.org/）平臺，分別以炎癥（inflammation）和疼痛（pain）為檢索詞，進(jìn)行搜索，獲得疾病靶點(diǎn)，并分別取前10%作為候選靶點(diǎn)，利用Venny平臺獲得成分和疾病的交集靶點(diǎn)作為潛在抗炎和鎮(zhèn)痛的藥效靶點(diǎn)。

2.6 交集靶點(diǎn)的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及富集分析

將交集靶點(diǎn)上傳String（https://string-db.org/）數(shù)據(jù)庫，篩選條件為“Homo sapien”，置信度為0.9，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)。利用Cytoscape 3.7.0軟件中Network Analyer插件進(jìn)行分析，獲取絲穗金粟蘭抗炎鎮(zhèn)痛的核心靶點(diǎn)，篩選條件為大于介數(shù)中心性（betweenness centrality，BC）、接近中心性（closeness centrality，CC）和度值這3項(xiàng)的平均值。利用David數(shù)據(jù)庫（https://david.ncifcrf.gov/）對潛在的核心靶點(diǎn)進(jìn)行基因本體（gene ontology，GO）功能及京都基因與基因組百科全書（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析。

2.7 “活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將核心靶點(diǎn)、與核心靶點(diǎn)相關(guān)的活性成分、關(guān)鍵通路導(dǎo)入到Cytoscape 3.7.0軟件中，構(gòu)建“活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)，并以高于BC、CC和度值這3項(xiàng)的平均值為條件篩選出核心成分。

3 結(jié)果

3.1 絲穗金粟蘭水提物成分分析

將絲穗金粟蘭水提物樣品按“2.2”“2.3”項(xiàng)下條件進(jìn)行分析，得到絲穗金粟蘭水提物樣品在正、負(fù)離子模式下的總離子流圖，見圖1。采用Peakview1.2計(jì)算分子式，對比理論值和實(shí)際值，結(jié)合ChemSpider、mzCloud和維譜數(shù)據(jù)庫及現(xiàn)有文獻(xiàn)研究，從絲穗金粟蘭水提物中共推測了45個(gè)成分，其中有機(jī)酸25個(gè)、黃酮類3個(gè)、香豆素類7個(gè)、倍半萜5個(gè)、含氮類有機(jī)物5個(gè)，具體信息見表1。

圖1 正 (A)、負(fù) (B) 離子模式下絲穗金粟蘭水提取物的總離子流圖

3.2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測分析

3.2.1 絲穗金粟蘭活性成分的篩選及藥效靶點(diǎn)的預(yù)測 基于UPLC-Q-TOF-MS的分析結(jié)果得到絲穗金粟蘭成分45種，經(jīng)FAFDrugs4數(shù)據(jù)庫篩選，獲得33種主要活性成分（表1），包括綠原酸、新綠原酸、迷迭香酸等。將上述33種活性成分導(dǎo)入到Pharmmapper數(shù)據(jù)庫，并利用UniProt數(shù)據(jù)庫進(jìn)行查詢，去重后共收集到457個(gè)靶點(diǎn)。

3.2.2 炎癥和疼痛相關(guān)靶點(diǎn)篩選 在GeneCards數(shù)據(jù)庫中檢索獲得與炎癥相關(guān)的靶點(diǎn)1090個(gè)，與疼痛相關(guān)的靶點(diǎn)1218個(gè)。與活性成分457個(gè)靶點(diǎn)匹配后，交集得到70個(gè)絲穗金粟蘭抗炎鎮(zhèn)痛的潛在作用靶點(diǎn)，見圖2。

表1 絲穗金粟蘭水提取物中化學(xué)成分的鑒定

a～e依次為有機(jī)酸類、黃酮類、香豆素類、倍半萜類、含氮類化合物

a—e are organic acids, flavonoids, coumarins, sesquiterpenes and nitrogenous compounds

圖2 絲穗金粟蘭活性成分-抗炎鎮(zhèn)痛靶點(diǎn)Venn圖

3.2.3 PPI網(wǎng)絡(luò) 將上述活性成分抗炎鎮(zhèn)痛的70個(gè)潛在作用靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫平臺，得到由54個(gè)節(jié)點(diǎn)及182條邊組成的PPI網(wǎng)絡(luò)，見圖3，節(jié)點(diǎn)代表潛在作用靶點(diǎn)，圖中節(jié)點(diǎn)越大表示該節(jié)點(diǎn)度值越大。進(jìn)一步應(yīng)用Cytoscape 3.7.0軟件計(jì)算網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)的拓?fù)鋮?shù)，度值、BC、CC的平均數(shù)依次為6.740、0.028、0.418，基于以上3個(gè)參數(shù)進(jìn)行篩選，最終得到13個(gè)核心靶點(diǎn)，見表2。

3.2.4 GO功能富集分析 通過David數(shù)據(jù)平臺對13個(gè)核心靶點(diǎn)進(jìn)行生物功能分析，以＜0.01為條件，共篩選得到189個(gè)GO條目，其中生物過程139條、細(xì)胞組成22條、分子功能27條。將生物過程、分子功能和細(xì)胞組成中排名前10的條目繪制成圖（圖4），基因數(shù)代表主要活性成分富集在該通路下的靶點(diǎn)數(shù)目。結(jié)果顯示，生物過程方面，絲穗金粟蘭活性成分主要參與蛋白磷酸酶結(jié)合、胰島素受體結(jié)合、蛋白激酶活性等；細(xì)胞組成方面，主要參與細(xì)胞核、線粒體、分子復(fù)合物等；分子功能主要涉及血小板激活、信號傳導(dǎo)、凋亡過程的負(fù)調(diào)控等。綜上所述，絲穗金粟蘭的活性成分可通過調(diào)控多種生物學(xué)途徑聯(lián)合發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛作用。

圖3 PPI網(wǎng)絡(luò)

表2 核心靶點(diǎn)

圖4 GO功能富集分析 (前10)

3.2.5 KEGG通路富集分析 通過David數(shù)據(jù)平臺將潛在作用靶點(diǎn)與KEGG信號通路進(jìn)行匹配，以＜0.01為篩選條件，共富集得到信號轉(zhuǎn)導(dǎo)Ras信號通路、酪氨酸激酶受體ErbB2信號通路、FoxO信號通路等128條。結(jié)合文獻(xiàn)研究，篩選出值最小的前16條信號通路進(jìn)行后續(xù)研究，并繪制氣泡圖（圖5）。圖中節(jié)點(diǎn)越大，表示富集在這條通路上的靶點(diǎn)數(shù)量越多。

3.2.6 “活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò) 將絲穗金粟蘭活性成分、潛在靶點(diǎn)、前16條KEGG通路導(dǎo)入到Cytoscape 3.7.0軟件，構(gòu)建“活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)見圖6。該網(wǎng)絡(luò)共有62個(gè)節(jié)點(diǎn)，321條相互作用連線，其中紅色節(jié)點(diǎn)代表活性成分，共33個(gè)；黃色節(jié)點(diǎn)代表13個(gè)核心潛在作用靶點(diǎn)；紫色節(jié)點(diǎn)代表通路，共16條。節(jié)點(diǎn)越大，度值越高。應(yīng)用Network Analyzer分析對網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析，活性成分的度值、BC、CC的平均數(shù)依次為6.727、0.004、0.501；關(guān)鍵靶點(diǎn)的度值、BC、CC的平均數(shù)依次為24.692、0.063、0.521?；谝陨?個(gè)參數(shù)進(jìn)行篩選，最終得到5個(gè)核心靶點(diǎn)，依次為蛋白激酶B1（protein kinase B1，AKT1）、絲裂原活化蛋白激酶14（mitogen- activated protein kinase 14，MAPK14）、非受體酪氨酸激酶（sarcoma receptor coactivator，SRC）、表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）和內(nèi)糖苷酶F2；8個(gè)關(guān)鍵活性成分，分別為木犀草素、綠原酸、新綠原酸、迷迭香酸、依斯坦布林A、莽草酸、石竹素和原兒茶酸。通過分析網(wǎng)絡(luò)圖發(fā)現(xiàn)，絲穗金粟蘭活性成分中，同一活性成分能同時(shí)作用于多個(gè)靶點(diǎn)，而相同靶點(diǎn)亦對應(yīng)多種活性成分，說明絲穗金粟蘭化學(xué)成分能夠多成分、多靶點(diǎn)發(fā)揮治療抗炎和鎮(zhèn)痛作用。

圖5 KEGG通路富集分析(前16)

圖6 “活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)

4 討論

本研究通過UPLC-Q-TOF-MS技術(shù)從絲穗金粟蘭水提物中解析出45種化學(xué)成分，其中有機(jī)酸25個(gè)、黃酮類3個(gè)、香豆素類7個(gè)、倍半萜5個(gè)、含氮類有機(jī)物5個(gè)。運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，本研究共篩選出絲穗金粟蘭水提物活性成分33個(gè)，與抗炎鎮(zhèn)痛相關(guān)的靶點(diǎn)70個(gè)，涉及AKT1、F2、MAPK14、SRC、EGFR、ErbB2、胰島素樣生長因子1（insulin-like growth factor 1，IGF1）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3，CASP3）、MAPK8等核心靶點(diǎn)，說明絲穗金粟蘭發(fā)揮抗炎和鎮(zhèn)痛作用具有多成分、多靶點(diǎn)的優(yōu)勢。針對上述“活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)分析，發(fā)現(xiàn)原兒茶酸、木犀草素、綠原酸、新綠原酸、迷迭香酸、依斯坦布林A、莽草酸、石竹素8個(gè)活性成分在網(wǎng)絡(luò)中度值較大。研究表明，原兒茶酸可以抑制腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6的分泌，對多數(shù)炎癥性疾病有一定治療作用[33-34]。綠原酸類成分是具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎作用的一類成分，能夠通過抑制Toll樣受體4（Toll-like receptor 4，TLR4）/髓樣分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88）/ 核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）信號通路的激活，從而減輕炎癥的發(fā)生[35]。此外，綠原酸與AKT1、CASP3、F2、IGF1、MAPK14、MAPK8、磷脂酰肌醇-3激酶調(diào)節(jié)亞基1（phosphoinositide-3-kinase regulatory subunit 1，PIK3R1）、SRC這8個(gè)靶點(diǎn)有關(guān)聯(lián)。此外，原兒茶酸也可以通過調(diào)節(jié)沉默信息調(diào)節(jié)因子1（SIRT1）/NF-κB途徑抑制脂多糖激活的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥反應(yīng)[36]。通過PPI網(wǎng)絡(luò)分析可知SRC、MAPK1、PIK3R1、蛋白酪氨酸磷酸酶非受體型11（protein tyrosine phosphatase nonreceptor 11，PTPN11）、MAPK8、EGFR、AKT1、IGF1在網(wǎng)絡(luò)中所占的度值較大，極可能為絲穗金粟蘭治療炎癥和疼痛性疾病過程中發(fā)揮重要作用的關(guān)鍵靶標(biāo)。

為進(jìn)一步研究絲穗金粟蘭抗炎鎮(zhèn)痛的潛在機(jī)制，對PPI網(wǎng)絡(luò)篩選出的13個(gè)核心靶點(diǎn)通路富集分析得到128個(gè)富集條目，其中ErbB信號通路、TNF信號通路、EGFR酪氨酸激酶抑制劑耐藥等條目值顯著性較高（＜0.01），可能為其發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛作用重要通路之一。TNF是一種促炎細(xì)胞因子，其異常分泌可導(dǎo)致炎癥的發(fā)生，研究表明可以通過調(diào)控TNF信號通路發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛的作用[37]。免疫系統(tǒng)的細(xì)胞表達(dá)存在各種模式識別受體，這些受體在清除病原體時(shí)會存在無法區(qū)分自身和非自身分子，持續(xù)的TLR信號傳導(dǎo)會導(dǎo)致炎癥性疾病。TLR是最顯著的模式識別受體，其在對病原體感應(yīng)時(shí)會引起炎癥反應(yīng)，TLR拮抗劑的開發(fā)是目前免疫疾病研究的熱點(diǎn)[38]。本研究發(fā)現(xiàn)13個(gè)潛在靶點(diǎn)中有3個(gè)富集在Toll樣信號通路上，分別為MAPK8、MAPK1、AKT1、PIK3R1、MAPK14，可能為絲穗金粟蘭調(diào)控該通路的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

綜上，絲穗金粟蘭可能通過原兒茶酸、木犀草素、綠原酸、新綠原酸、迷迭香酸、依斯坦布林A、隱綠原酸等33個(gè)成分調(diào)控SRC、MAPK1、PIK3R1、PTPN11、MAPK8、EGFR、AKT1、IGF等13個(gè)核心靶點(diǎn)進(jìn)而影響ErbB信號通路、TNF信號通路、EGFR酪氨酸激酶抑制劑耐藥等16條通路來發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛作用。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] Xu L L, Tang X L, Hao F R,. Hepatotoxicity and nephrotoxicity assessment on ethanol extract ofin Sprague Dawley rats using a UPLC-Q-TOF-MS analysis of serum metabolomics [J]., 2021, 35(6): e5064.

[2] 牛明, 張斯琴, 張博, 等.《網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)評價(jià)方法指南》解讀 [J]. 中草藥, 2021, 52(14): 4119-4129.

[3] Meng Y X, Li X J, Guan J Q. Network-based pharmacology to predict the mechanism of Ginger andcombined treatment of viral pneumonia [J]., 2021, 14(9): 964-971.

[4] Lagorce D, Bouslama L, Becot J,. FAF-Drugs4: Free ADME-tox filtering computations for chemical biology and early stages drug discovery [J]., 2017, 33(22): 3658-3660.

[5] 牛研, 王書芳. LC-Q-TOF-MS和LC-IT-MSn分析當(dāng)歸芍藥散中化學(xué)成分 [J]. 中草藥, 2014, 45(8): 1056-1062.

[6] 侯小濤, 韋棪婷, 夏中尚, 等. 基于血清藥物化學(xué)的厚藤治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎質(zhì)量標(biāo)志物研究 [J]. 中草藥, 2021, 52(9): 2638-2652.

[7] 侯婭, 馬陽, 鄒立思, 等. 基于UPLC-Triple TOF-MS/ MS技術(shù)的不同產(chǎn)地太子參水提物化學(xué)組成分析 [J]. 食品工業(yè)科技, 2015, 36(15): 275-280.

[8] Li J, Wang S P, Wang Y Q,. Comparative metabolism study on chlorogenic acid, cryptochlorogenic acid and neochlorogenic acid using UHPLC-Q-TOF MS coupled with network pharmacology [J]., 2021, 19(3): 212-224.

[9] 郝藝銘, 霍金海, 王濤, 等. UPLC-Q-TOF/MS技術(shù)分析黃連中非生物堿類成分 [J]. 中藥材, 2020, 43(2): 354-358.

[10] 楊璐萌, 楊凌鑒, 賈璞, 等. 基于HPLC-Q-TOF-MS/MS的廣棗果肉化學(xué)成分分析 [J]. 第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào), 2016, 37(2): 159-166.

[11] 王少敏, 胡青, 季申. GC/MS法和UPLC/Q-TOF-MS法研究丹香冠心注射液中的有效成分 [J]. 中成藥, 2012, 34(1): 78-84.

[12] 蔣鵬娜, 李竹英, 孫國東, 等. 基于UPLC-Q-TOF/MS技術(shù)的平喘顆?；瘜W(xué)成分分析 [J]. 廣東藥科大學(xué)學(xué)報(bào), 2021, 37(5): 42-53.

[13] 王藝, 馮麗萍, 黃李璐, 等. UPLC-Q-Orbitrap HRMS技術(shù)快速鑒定木芙蓉花化學(xué)成分 [J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2021, 33(12): 2042-2052.

[14] 張水寒, 蔡萍, 陳林, 等. 高效液相色譜-四級桿-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜分析雪峰蟲草化學(xué)成分 [J]. 中草藥, 2015, 46(6): 817-821.

[15] 劉建庭, 仉瑜, 卜睿臻, 等. 基于UPLC-Q/TOF-MS的痹祺膠囊化學(xué)物質(zhì)組及入血成分的研究 [J]. 中草藥, 2021, 52(18): 5496-5513.

[16] 李志強(qiáng), 張皓男, 何明珍, 等. 基于UHPLC-Q-TOF/MS分析的長鞭紅景天化學(xué)成分及其體外抗氧化活性研究 [J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥, 2021, 32(10): 2361-2365.

[17] 晏利芝, 王英鋒, 余啟榮. 大鼠灌胃白花蛇舌草有效部位提取物血漿中代謝產(chǎn)物的液質(zhì)分析 [J]. 中國中藥雜志, 2011, 36(10): 1301-1304.

[18] Chen Y,. A Platelet/CMC coupled with offline UPLC-QTOF-MS/MS for screening antiplatelet activity components from aqueous extract of Danshen [J]., 2016, 117: 178-183.

[19] Lin P, Dai Y, Yao Z H,. Metabolic profiles and pharmacokinetics of Qingre Xiaoyanning Capsule, a traditional Chinese medicine prescription of, in rats by UHPLC coupled with quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry [J]., 2019, 42(4): 784-796.

[20] Zhou H, Liang J L, Lv D,. Characterization of phenolics ofby non-targeted high-performance liquid chromatography fingerprinting and following targeted electrospray ionisation tandem mass spectrometry/time-of-flight mass spectrometry analyses [J]., 2013, 138(4): 2390-2398.

[21] 孫進(jìn)華, 李先榮. UPLC-LTQ-Orbitrap快速鑒定丹參川芎嗪注射液中化學(xué)成分 [J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2016, 22(15): 64-67.

[22] 蘇日娜, 羅維早, 魏榮銳, 等. 基于UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS技術(shù)的特色藏族藥高原蕁麻化學(xué)成分快速識別研究 [J]. 中國中藥雜志, 2019, 44(8): 1607-1614.

[23] 宋玉玲, 汪海林. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定氧化損傷標(biāo)志物8-羥基脫氧鳥苷 [J]. 色譜, 2010, 28(12): 1123-1127.

[24] 黃斌, 胡燕珍, 李雪, 等. 基于UPLC-Q-TOF-MS技術(shù)分析烏蕨中的化學(xué)成分 [J]. 實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床, 2021, 21(9): 155-159.

[25] 蘭曉燕, 朱龍波, 黃顯章, 等. 艾葉中主要化學(xué)成分的鑒定及其含量測定研究 [J]. 中草藥, 2021, 52(24): 7630-7637.

[26] 王曉燕, 張麗, 王添琦, 等. 梔子化學(xué)成分的UHPLC-Q-TOFMS分析 [J]. 中藥材, 2013, 36(3): 407-410.

[27] 高越. 基于組學(xué)和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的養(yǎng)心氏片抗心衰作用機(jī)理研究 [D]. 上海: 第二軍醫(yī)大學(xué), 2016.

[28] 譚林威, 金輝輝, 劉永祥, 等. 基于HPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù)快速分析腸炎寧片中主要化學(xué)成分 [J]. 中草藥, 2020, 51(16): 4124-4132.

[29] 頓珠次仁, 鄧敏芝, 朱根華, 等. 基于UPLC-Q-TOF-MS技術(shù)快速分析裂葉獨(dú)活中香豆素類成分 [J]. 中藥新藥與臨床藥理, 2022, 33(1): 105-114.

[30] 孫彩虹, 田野, 李瑞明, 等. 基于UPLC-Q-TOF-MS和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的連夏消痞顆粒治療功能性消化不良的潛在藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究 [J]. 中國藥學(xué)雜志, 2022, 57(1): 44-51.

[31] 呂渭升, 位翠杰, 潘曉君, 等. UPLC-MS/MS法分析旋覆花蜜炙后化學(xué)成分的變化 [J]. 中國藥房, 2021, 32(20): 2478-2484.

[32] 李佳美, 徐偉, 張雪, 等. 基于HPLC-MS/MS對枇杷葉水提組分分析及萜類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)鑒定 [J]. 食品工業(yè)科技, 2022, 43(1): 295-303.

[33] 劉暢, 程曉丹, 孫家安, 等. 綠原酸通過調(diào)控miR-223/NLRP3軸減輕脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷的機(jī)制[J]. 中南大學(xué)學(xué)報(bào): 醫(yī)學(xué)版, 2022, 47(3): 280-288.

[34] Wu H Q, Wang J, Zhao Q,. Protocatechuic acid inhibits proliferation, migration and inflammatory response in rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes [J]., 2020, 48(1): 969-976.

[35] Zhou X F, Zhang B W, Zhao X L,. Chlorogenic acid supplementation ameliorates hyperuricemia, relieves renal inflammation, and modulates intestinal homeostasis [J]., 2021, 12(12): 5637-5649.

[36] Kaewmool C, Kongtawelert P, Phitak T,. Protocatechuic acid inhibits inflammatory responses in LPS-activated BV2microglia via regulating SIRT1/NF-κB pathway contributed to the suppression of microglial activation-induced PC12 cell apoptosis [J]., 2020, 341: 577164.

[37] Conaghan P G, Cook A D, Hamilton J A,. Therapeutic options for targeting inflammatory osteoarthritis pain [J]., 2019, 15(6): 355-363.

[38] Tiotiu A, Kermani N Z, Badi Y,. U. Sputum macrophage diversity and activation in asthma: Role of severity and inflammatory phenotype [J]., 2021, 76(3): 775-788.

Anti-inflammatory and analgesic substances and mechanisms of aqueous extracts ofbased on UPLC-Q-TOF-MS and network pharmacology

ZHEN Dan-dan1, HUANG Yao-bin2, LU Xian-xing3, CHEN Jing-min4, QIU Qin1, ZHANG Miao1, SHI Jun-hao1

1. Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530022, China 2. The First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530200, China 3. Ruikang Hospital Affiliated to Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530200, China 4. Yulin Hospital of Traditional Chinese Medicine, Yulin 537100, China

To analyze the main components of the aqueous extract ofby ultra performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry (UPLC-Q-TOF-MS), and predict its anti-inflammatory and analgesic potent substances and mechanisms by combining network pharmacology methods.Based on ChemSpider database, mzCloud platform and existing literature research, the secondary mass spectra of target compounds were compared and confirmed to identify the chemical composition of the aqueous extracts of. The active ingredients of the aqueous extracts ofwere screened by the FAFDrug4 database. The constituent targets ofwere predicted using the Pharmmapper platform and Uniprot database. The relevant disease targets were obtained using GeneCards platform, and the intersection targets of constituents and diseases were obtained using Venny platform. PPI network was constructed by using String database and Cytoscape 3.7.0 software, and the core targets were screened. Gene ontology (GO) function and Kyoto encyclopedia of genes and genomes (KEGG) pathway enrichment analysis of potential core targets were performed by using David database, and “active ingredient-target-pathway” network was constructed.A total of 45 components, including organic acids, flavonoids, coumarins, sesquiterpenoids and nitrogen-containing compounds, were identified from the aqueous extracts of. A total of 33 active components were screened and 70 active components and disease intersection targets were identified. A total of 13 core targets were screened through PPI network. Enrichment analysis showed thatmainly participated in protein phosphatase binding, insulin receptor binding, protein kinase activity and other functions, and presented the effects of resisting inflammation and pain through tyrosine kinase receptor signaling pathway, tumor necrosis factor signaling pathway, tyrosine kinase inhibitor resistance and other pathways. Five key targets and eight key active components were further obtained through the analysis of the “active ingredient-target-pathway” network.By combining UPLC-Q-TOF-MS and network pharmacology, it is clarified thatplays an anti-inflammatory and analgesic role through multi-component, multi-target and multi-channel, which provides reference for further quality evaluation and pharmacological activity research of.

(A. Gray) Solms-Laub; anti-inflammatory and analgesic activity; active components; pharmacophore basis; UPLC-Q-TOF-MS; network pharmacology; luteolin; chlorogenic acid; neochlorogenic acid; rosmarinic acid; istanbulin A; shikimic acid; epoxycaryophyllene; protocatechuic acid

R285.5

A

0253 - 2670(2023)12 - 3903 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.12.017

2022-12-01

廣西中醫(yī)藥大學(xué)“桂派杏林青年英才”培養(yǎng)項(xiàng)目（2022C032）；中藥學(xué)廣西一流學(xué)科（桂教科研[2018]12號）；壯瑤藥協(xié)同創(chuàng)新中心（桂教科研[2013]20號）；廣西壯瑤藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（桂科基字[2014]32號）；廣西八桂學(xué)者中藥創(chuàng)新理論與藥效研究項(xiàng)目（J13162）；廣西重點(diǎn)學(xué)科壯藥學(xué)（桂教科研[2013]16號）；國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃資助項(xiàng)目（2019YFC1712300）

甄丹丹（1983—），女，碩士，助理研究員，從事中藥與藥學(xué)的科研與教學(xué)。E-mail: 8zhen@163.com

通信作者：陳景敏（1975—），女，本科，副主任護(hù)師，從事腦病臨床護(hù)理和醫(yī)院藥學(xué)工作。E-mail: 294363022@qq.com

#共同第一作者：黃耀斌（1983—），男，本科，主管中藥師，從事藥學(xué)科研和醫(yī)院藥學(xué)工作。E-mail: 350365847@qq.com

[責(zé)任編輯 李亞楠]