王 晶 邱獻(xiàn)華

乳腺癌是指發(fā)生在乳腺的良性或惡性腫瘤,根據(jù)其發(fā)病情況可分為早、中、晚三個(gè)階段[1]。乳腺良性腫瘤患者一般通過手術(shù)治療,惡性腫瘤患者早期首選手術(shù)治療,中晚期患者手術(shù)加藥物或放療、化療等綜合治療[2]。但是存在部分患者會(huì)在術(shù)后出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的情況,因此能否及早的發(fā)現(xiàn)和治療對(duì)于疾病的預(yù)后至關(guān)重要。多項(xiàng)研究表明NuSAP1與FAM83A兩種因子均與乳腺癌細(xì)胞的生成、發(fā)展和轉(zhuǎn)移存在著一定關(guān)系[3],如果能夠探清兩者與乳腺癌復(fù)發(fā)之間的聯(lián)系,對(duì)于乳腺癌患者的預(yù)后來說有著重大價(jià)值。本次研究選取我院2019年1月至2020年5月期間收錄的221例乳腺癌并行改良根治術(shù)的患者作為觀察研究對(duì)象,具體研究報(bào)告內(nèi)容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2019年1月至2020年5月期間收錄的221例乳腺癌并行改良根治術(shù)的患者,將術(shù)后一年之內(nèi)出現(xiàn)復(fù)發(fā)情況的27例患者作為觀察組,其余194例未出現(xiàn)術(shù)后復(fù)發(fā)的患者作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn):①觀察組患者經(jīng)檢查均符合乳腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[4];②無術(shù)前癌細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移;③年齡18～71歲;④患者均行改良根治術(shù);⑤患者均為浸潤(rùn)性乳腺癌。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并心臟病等其他臟器重大疾病者;②合并有神經(jīng)系統(tǒng)疾病者;③孕期及分娩期婦女;④男性患者。其中觀察組27例,年齡18～68(42.38±8.33)歲;TNM分期:Ⅱ期16例,Ⅲ期11例;對(duì)照組194例,年齡18～71(43.09±8.16)歲;Ⅰ期患者109例,Ⅱ期患者61例,Ⅲ期患者24例。

1.2 方法

1.2.1 組織提取 取乳腺癌患者手術(shù)切除的腫瘤組織及其癌旁距腫瘤組織將其封存制片。

1.2.2 NuSAP1mRNA的檢測(cè) 使用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶聯(lián)反應(yīng)法( RT-PCR)對(duì)總RNA進(jìn)行提取,首先使用DEPC水將勻漿器進(jìn)行處理,取出備用患者組織樣本100 mg左右,將樣本與Trizol提取液以100∶1的比例進(jìn)行混合后倒入勻漿器,并使其完全混合、粉碎,將混合液倒進(jìn)EP管,分裝5～6管以備用,并置于常溫環(huán)境下放置10 min,以混合液:氯仿5∶1的比例將兩種液體完全混合,于常溫環(huán)境下放置10 min,隨后進(jìn)行10 min離心操作(1.2 kr/min)取其上清液以1∶1的比例加入異丙醇,常溫環(huán)境下放置15 min,再次進(jìn)行10 min離心操作(1.2 kr/min),棄上清,倒入Ep管內(nèi)備用,同時(shí)使用DEPC水配制出75%乙醇,將乙醇倒入處理后的樣本EP管內(nèi)復(fù)行離心操作(7000 r/Min)3 min,棄上清,置于常溫環(huán)境下5 min,最后加入DEPC水至總體積35 μl。濃度測(cè)定,使用紫外分光光度計(jì)測(cè)量Total RNA濃度,保持2.0>A280/A260>1.8的范圍,并將TotalRNA瓊脂糖凝膠電泳鑒定,能夠發(fā)現(xiàn)三條帶(5 s、18 s、28 s),在37 ℃逆轉(zhuǎn)錄15 min,及時(shí)逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,引物序列見表1。

表1 PCR引物序列

1.2.3 FAM83AmRNA檢測(cè) TRIZOL試劑提取兩組細(xì)胞標(biāo)本中的總RNA 。將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA 并進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶聯(lián)反應(yīng)法檢測(cè),檢測(cè)步驟同NuSAP1相同,引物序列如表1 。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)兩組患者術(shù)后局部復(fù)發(fā)的單因素分析;(2)兩組患者術(shù)后局部復(fù)發(fā)的多因素回歸分析;(3)NuSAP1、FAM83A與患者術(shù)后局部復(fù)發(fā)的預(yù)后價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組患者術(shù)后局部復(fù)發(fā)的單因素分析

兩組患者的年齡對(duì)比無顯著差異(P>0.05),觀察組NuSAP1及FAM83A表達(dá)水平均高于對(duì)照組,且兩組腫瘤類型、腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、NuSAP1、FAM83A水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。

表2 兩組患者術(shù)后局部復(fù)發(fā)的單因素分析

2.2 兩組患者術(shù)后局部復(fù)發(fā)的多因素分析

腫瘤類型、腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、NuSAP1、FAM83A均為患者術(shù)后局部復(fù)發(fā)的獨(dú)立影響因素(P<0.05),見表3。

表3 兩組患者術(shù)后局部復(fù)發(fā)的多因素回歸分析

2.3 NuSAP1、FAM83A水平對(duì)預(yù)測(cè)患者術(shù)后局部復(fù)發(fā)的價(jià)值

根據(jù)ROC 曲線獲得,最佳界限以NuSAP1(0.78)、FAM83A(36.86)可獲得ROC 曲線下最大面積,兩項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果陽性,表明乳腺癌術(shù)后局部復(fù)發(fā)與Survivin-mRNA、OTUD3-mRNA密切相關(guān),單項(xiàng)檢測(cè)敏感度分別63.0%、70.4%,特異度89.7%、82.8%,且兩項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的敏感度(77.8%)、特異度(87.9%)均高于單項(xiàng)檢測(cè)(P<0.05),見表4,圖1。

表4 NuSAP1、FAM83A對(duì)預(yù)測(cè)患者術(shù)后局部復(fù)發(fā)的價(jià)值

3 討論

流行病學(xué)研究顯示,乳腺癌在世界范圍內(nèi)的發(fā)病率長(zhǎng)年居高不下,據(jù)統(tǒng)計(jì)乳腺癌人數(shù)占比世界女性癌癥人數(shù)的兩成及以上,而這其中有將近半數(shù)的患者都位于亞洲地區(qū)的發(fā)展中國(guó)家。國(guó)內(nèi)的女性乳腺癌確診人數(shù)高達(dá)三十萬每年,而且從目前來看,這個(gè)數(shù)字呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)[5]。國(guó)內(nèi)45歲及以上的中老年患者發(fā)病率要顯著高于年輕的女性,雖然國(guó)內(nèi)乳腺癌的發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢(shì),但是由于近年來對(duì)于乳腺癌出現(xiàn)各種新的治療方式,該病的死亡率正在逐漸降低[6]。近年來對(duì)于乳腺癌患者進(jìn)行個(gè)體化治療,預(yù)測(cè)早期療效和預(yù)后效果的研究已經(jīng)成為癌癥治療的熱門話題[7]。改良根治術(shù)在乳腺癌的治療方面占有重要地位,但是存在部分患者會(huì)因?yàn)楦鞣N原因出現(xiàn)術(shù)后局部復(fù)發(fā)的情況,因此如果能夠?qū)θ橄侔└涡g(shù)后的復(fù)發(fā)進(jìn)行一定程度上的評(píng)估和預(yù)測(cè),能夠?qū)εR床癌癥治療方面起著重大影響[8]。目前來說,常用的形態(tài)影像學(xué)預(yù)測(cè)效果并不理想,而對(duì)于生物標(biāo)志物方面的研究似乎可以作為新的方向,因此找到能夠預(yù)測(cè)評(píng)估癌癥術(shù)后復(fù)發(fā)的生物標(biāo)志物以成為目前的重要研究方向[9]。

本次研究對(duì)兩組患者術(shù)后局部復(fù)發(fā)的單因素分析結(jié)果顯示兩組患者的年齡對(duì)比無顯著差異,腫瘤類型、腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、NuSAP1、FAM83A差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而多因素檢測(cè)結(jié)果也顯示腫瘤類型、腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、NuSAP1、FAM83A均為術(shù)后局部復(fù)發(fā)的獨(dú)立影響因素,與以往學(xué)者研究的結(jié)果相符合?，F(xiàn)在臨床上對(duì)乳腺癌根治術(shù)的術(shù)后復(fù)發(fā)多是根據(jù)患者病理學(xué)結(jié)果來進(jìn)行判斷,眾多數(shù)據(jù)研究表明患者的腫瘤類型和腫瘤分期等因素與術(shù)后復(fù)發(fā)之間存在著密切聯(lián)系,不過指依據(jù)病理學(xué)分型結(jié)果進(jìn)行判斷不能完整體現(xiàn)出癌癥的分子層面的表達(dá)差異[10]。NuSAP1屬于微管核蛋白的一種,它能夠在機(jī)體細(xì)胞進(jìn)程中呈現(xiàn)循環(huán)性變化趨勢(shì),并且NuSAP1mRNA表達(dá)狀況以及自身蛋白的表達(dá)情況接受著嚴(yán)格的管控[11]。NuSAP1的基因啟動(dòng)子區(qū)域存在著能夠與轉(zhuǎn)錄因子E2F進(jìn)行結(jié)合的基點(diǎn),而轉(zhuǎn)錄因子則是與細(xì)胞的周期性進(jìn)程存在著密切聯(lián)系。轉(zhuǎn)錄因子會(huì)對(duì)NuSAP1的轉(zhuǎn)錄情況起到調(diào)控作用,已有研究表明NuSAP1在很多癌癥中會(huì)呈現(xiàn)明顯過表達(dá)狀況,而這也能夠表明NuSAP1與癌細(xì)胞的侵襲和預(yù)后存在著重要聯(lián)系[12-13]。FAM83A則是屬于近年來新發(fā)現(xiàn)的腫瘤特異性抗原[14]。Yu等[15]的研究表明FAM83A在肺腺癌患者的癌組織中呈現(xiàn)過表達(dá)狀態(tài),而在癌旁組織及正常組織都呈現(xiàn)低表達(dá)或不表達(dá)狀態(tài),同時(shí)FAM83A還與病理學(xué)因素中的腫瘤分期,腫瘤類型以及孕激素等指標(biāo)存在聯(lián)系[16]。與本研究結(jié)果相一致,提示該指標(biāo)對(duì)于癌癥的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)存在著相關(guān)關(guān)系。對(duì)NuSAP1、FAM83A與患者術(shù)后局部復(fù)發(fā)的預(yù)后價(jià)值的計(jì)算結(jié)果顯示,根據(jù)ROC 曲線獲得,最佳界限以NuSAP1(0.78)、FAM83A(36.86)可獲得ROC 曲線下最大面積,兩項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果陽性,表明乳腺癌術(shù)后局部復(fù)發(fā)與Survivin-mRNA、OTUD3-mRNA密切相關(guān),單項(xiàng)檢測(cè)敏感度分別63.0%、70.4%,特異度89.7%、82.8%,且兩項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的敏感度(77.8%)、特異度(87.9%)均高于單項(xiàng)檢測(cè),提示兩者對(duì)乳腺癌患者術(shù)后局部復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)及診斷具有預(yù)后價(jià)值。

綜上所述,NuSAP1、FAM83A與乳腺癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)都存在密切聯(lián)系,對(duì)乳腺癌術(shù)后局部復(fù)發(fā)的臨床診斷及預(yù)測(cè)具有預(yù)后價(jià)值。