張 陽 戴可可 閆海艷

腹主動脈瘤(AAA)為臨床常見的慢性主動脈退行性病變,具有高水平的患病率與致死率,對中老年群體的身心安全構(gòu)成嚴(yán)重威脅[1-2]。臨床相關(guān)研究提示,AAA的發(fā)生與發(fā)展與破裂同腔內(nèi)血栓(ILT)厚度聯(lián)系緊密[3-4]。微小RNA(miRNA)是由18～22個核苷酸共同組成的非編碼小RNA,與機(jī)體多種生理、病理過程存在顯著聯(lián)系,且臨床檢測便捷,穩(wěn)定性與特異性高。臨床相關(guān)研究指出,微小RNA-574-5p(miR-574-5p)、微小RNA-144-5p(miR-144-5p)的表達(dá)與主動脈瘤聯(lián)系緊密[5]。但臨床關(guān)于兩項指標(biāo)與AAA患者的ILT厚度之間關(guān)系有關(guān)報道較為缺乏,還有待進(jìn)一步研究?；诖?本研究分析miR-574-5p、miR-144-5p在AAA患者外周血內(nèi)的表達(dá)水平,以及兩項指標(biāo)表達(dá)水平與ILT厚度間的關(guān)系,旨在為臨床提參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析60例AAA患者的臨床資料,依據(jù)其腔內(nèi)厚度將所有研究對象劃分成兩組,其中對照組共28例(薄ILT,ILT≤7.89 mm),觀察組共32例(厚ILT,ILT>7.89 mm)。納入標(biāo)準(zhǔn):經(jīng)病理檢查證實為AAA;患者有關(guān)資料齊全;經(jīng)CT檢查顯現(xiàn)腎下腹主動脈≥3.00 cm。排除標(biāo)準(zhǔn):存在精神疾病者;合并全身性感染者;存在其他惡性腫瘤者;存有認(rèn)知、語言溝通、視聽、智力障礙,難以進(jìn)行正常交流者;合并免疫系統(tǒng)與凝血功能異常者;存在嚴(yán)重的腦器質(zhì)性疾病者;存有血液系統(tǒng)疾病者;存在酒精、藥物依賴史者;合并嚴(yán)重的臟器功能受損者。對照組男性18例,女性10例;年齡52～79歲,平均年齡(65.78±5.34)歲;體重指數(shù)(BMI)19.3～27.5 kg/m2,平均BMI(24.06±1.48)kg/m2;腹主動脈最大直徑3.5～6.1 mm,平均直徑(4.89±0.53)mm;吸煙史:有16例,無12例。觀察組男性20例,女性12例;年齡53～80歲,平均年齡(65.86±5.49)歲;BMI 19.4～27.3 kg/m2,平均BMI(24.01±1.45)kg/m2;腹主動脈最大直徑3.7～6.3 mm,平均直徑(4.93±0.56)mm;吸煙史:有18例,無14例。兩組一般資料比較,無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。

1.2 方法

標(biāo)本采集:所有患者入院后的第2 d,采集其晨起空腹5 ml外周靜脈血,以3000 r/min的速率行10 min的離心處理,離心半徑10 cm,獲取上層血清后,于-80 ℃的環(huán)境下留存待檢。檢測方法:以血漿RNA提取試劑盒提取所有血清標(biāo)本的總RNA,并以逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng);之后取逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物開展逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR)擴(kuò)增,擴(kuò)增條件為95 ℃預(yù)變性5 min,95 ℃ 30 s,60 ℃ 20 s,72 ℃ 20 s,共進(jìn)行40次循環(huán);以U6當(dāng)成內(nèi)參,以2-ΔΔCt法計算miR-574-5p、miR-144-5p相對表達(dá)量。所有的檢測操作均嚴(yán)格依據(jù)試劑盒操作說明行規(guī)范操作,以此保障檢測結(jié)果的可信度及準(zhǔn)確性。ILT厚度檢測:通過CT血管造影(CTA)檢測,于ILT橫截面上選取3、6、9、12點鐘方向,檢測其厚度,計算平均值即為ILT厚度,為7.89 mm。同時依據(jù)ILT厚度把患者分為兩組,其中ILT≤7.89 mm的薄ILT患者納入對照組,ILT>7.89 mm的厚ILT患者納入觀察組。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)兩組miR-574-5p、miR-144-5p表達(dá)水平對比。(2)以多因素Logistic回歸分析模型分析miR-574-5p、miR-144-5p表達(dá)水平與ILT厚度的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組miR-574-5p、miR-144-5p表達(dá)水平對比

觀察組miR-574-5p表達(dá)水平高于對照組,miR-144-5p表達(dá)水平低于對照組,有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),見表1。

表1 兩組miR-574-5p、miR-144-5p表達(dá)水平對比

2.2 miR-574-5p、miR-144-5p表達(dá)與ILT厚度的關(guān)系

多因素Logistic回歸分析顯示:miR-574-5p表達(dá)水平高、miR-144-5p表達(dá)水平低,為AAA患者ILT厚度增加的獨(dú)立危險因素(P<0.05),見表2。

表2 miR-574-5p、miR-144-5p表達(dá)與ILT厚度的關(guān)系

3 討論

AAA為動脈擴(kuò)張性病癥,主要由動脈壁退行性變而引發(fā),而外傷、感染、動脈炎的動均與該病的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)[6-7]。多數(shù)AAA患者發(fā)病早期無明顯癥狀,常于體檢時發(fā)現(xiàn),少數(shù)患者會出現(xiàn)腹痛、腹部搏動性腫塊等表現(xiàn),而當(dāng)瘤體壓迫四周組織器官時,將會導(dǎo)致對應(yīng)的壓迫癥狀[8]。同時,AAA與血小板活化和凝血功能紊亂相關(guān),故AAA患者多有不同程度的ILT形成[9]。雖血栓形成可在AAA發(fā)展早期發(fā)揮保護(hù)作用,但I(xiàn)LT與血栓面積、血栓覆蓋動脈瘤壁程度增加均會使得AAA擴(kuò)張速度加快,促使動脈瘤破裂風(fēng)險升高。ILT還會造成黏彈性蛋白降解、膠原合成與含量增加、血管平滑肌細(xì)胞凋亡與炎性細(xì)胞的過度浸潤破壞血管壁的結(jié)構(gòu)的完整性與穩(wěn)定性,從而使得AAA破裂風(fēng)險大大增加。而AAA破裂后會引起劇烈的腹痛、低血壓、大出血等嚴(yán)重狀況,增加患者死亡風(fēng)險。

臨床有關(guān)研究表明,ILT厚度被證實與動脈瘤直徑、血管平滑肌細(xì)胞凋亡等具有一定的關(guān)系,且miRNA與ILT厚度聯(lián)系緊密[10]。非編碼RNA(ncRNA)包括miRNA和ciRNA等。miRNA為短鏈非編碼RNA,可參與基因表達(dá)調(diào)節(jié)與機(jī)體較多的生命進(jìn)程,包含炎癥反應(yīng)、腫瘤生長等。從進(jìn)化層面而言,miRNA來自于植物界,可保護(hù)遺傳物質(zhì),避免外界干擾,且具有測定便捷等優(yōu)點,現(xiàn)已發(fā)展成較多疾病的生物標(biāo)志物。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),miRNA與RNA結(jié)合蛋白、高密度脂蛋白有一定關(guān)系,其表達(dá)水平與主動脈相關(guān),在與主動脈有關(guān)的疾病中可能會出現(xiàn)表達(dá)失調(diào)情況[11]。miR-574-5p位于人染色體的內(nèi)含子區(qū)域,miR-574-5p由人染色體4上編碼的Noxp20基因的第一個內(nèi)含子調(diào)節(jié)的,參與多種心血管疾病、惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展,在較多惡性腫瘤病癥中表達(dá)會異常升高[12]。miR-144-5p為前體miR-144的另一個成熟鏈,在多種疾病內(nèi)均表達(dá)異常,通過調(diào)控靶基因的表達(dá)參與疾病的進(jìn)程,具有抑制腫瘤作用[13-14]。本研究結(jié)果顯示,觀察組的miR-574-5p表達(dá)水平(4.95±0.83)高于對照組(3.20±0.69),miR-144-5p表達(dá)水平(0.26±0.09)低于對照組(0.48±0.13);多因素Logistic回歸分析顯示:miR-574-5p表達(dá)水平高、miR-144-5p表達(dá)水平低為AAA患者ILT厚度增加的獨(dú)立危險因素。表明miR-574-5p、miR-144-5p在AAA患者機(jī)體內(nèi)呈異常表達(dá),而miR-574-5p表達(dá)升高、miR-144-5p表達(dá)降低與ILT厚度密切相關(guān),有作為ILT生物標(biāo)志物的潛力。然而本次研究仍存在中心單一、數(shù)據(jù)少、樣本量少等不足,可能會影響本次研究的可信度。因此,臨床后續(xù)在進(jìn)行AAA相關(guān)的研究中尚需進(jìn)一步完善試驗設(shè)計,增加研究數(shù)據(jù),擴(kuò)大樣本量,進(jìn)行更為深入的分析,旨在為臨床提供更為可靠、客觀的指導(dǎo)。

綜上所述,miR-574-5p、miR-144-5p在AAA患者外周血中異常表達(dá),其中miR-574-5p呈過高表達(dá),miR-144-5p呈過低表達(dá),而兩項指標(biāo)異常表達(dá)水平與患者ILT厚度密切相關(guān)。