謝希，高曦，鄧漢清，陳秋揚(yáng)，石曄，婁宏君，王文韜

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040；3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410208；4.中南大學(xué)計(jì)算機(jī)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410083；5.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410208）

頸椎病是一種椎間盤及相鄰結(jié)構(gòu)的退行性病變，根據(jù)其病理改變累積的結(jié)構(gòu)不同，可分為神經(jīng)根型頸椎病、脊髓型頸椎病、交感神經(jīng)型頸椎病、椎動(dòng)脈型頸椎病以及其他型頸椎病[1]，其中神經(jīng)根型頸椎?。–SR）是最常見的類型[2]。CSR 的臨床表現(xiàn)主要為頸部和單側(cè)或雙側(cè)手臂的持續(xù)性、彌漫性及放射性疼痛，常常伴隨著感覺異常和運(yùn)動(dòng)功能障礙[3]。

脊痛消膠囊是黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)鄧樹福教授根據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)，并結(jié)合中醫(yī)理論確立的處方，臨床常用于CSR 及腰椎間盤突出等疾病的治療，療效確切[4-6]。但目前對(duì)于脊痛消膠囊治療CSR 的有效活性成分及其作用機(jī)制研究較少。因此，本研究運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)對(duì)脊痛消膠囊治療CSR 的活性成分及潛在靶點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)，研究其發(fā)揮效應(yīng)的可能途經(jīng)，再利用分子對(duì)接技術(shù)對(duì)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，為研究脊痛消膠囊治療CSR 的作用機(jī)制提供新思路，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 脊痛消膠囊活性成分收集與篩選

脊痛消膠囊是黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院院內(nèi)制劑，由川芎、澤瀉、澤蘭、車前子、白芍、防己、當(dāng)歸、杜仲、黃芪、延胡索、五靈脂、地龍、莪術(shù)和三棱共14 味藥物組成。利用TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php）、TCM-ID數(shù)據(jù)庫(kù)（bidd.group/TCMID）和BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫(kù)（bionet.ncpsb.org.cn/batmantcm/index.php）收集脊痛消組方的活性成分，然后設(shè)置口服生物利用度（Oral bioavailability,OB）≥30%和類藥性（Drug-likeness,DL）≥0.18 為篩選條件對(duì)收集到的活性成分進(jìn)行篩選，得到脊痛消膠囊的有效活性成分。

1.2 脊痛消膠囊活性成分靶點(diǎn)檢索和校正

利用TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)篩選出的脊痛消膠囊活性成分進(jìn)行檢索，得到相關(guān)蛋白靶點(diǎn)，利用Uniprot 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.uniprot.org） 對(duì)蛋白靶點(diǎn)名稱進(jìn)行校正，以“Homo sapiens”為種屬來源，選擇已被驗(yàn)證的（reviewed）蛋白，刪除未經(jīng)驗(yàn)證（unreviewed）和無(wú)對(duì)應(yīng)基因名的蛋白，得到蛋白靶點(diǎn)的基因名稱。

1.3 CSR基因靶點(diǎn)篩選

利用GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.genecards.org）、OMIM 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.omim.org） 和DisGe-NET 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.disgenet.org） 檢索CSR 相關(guān)基因。CSR 屬于周圍神經(jīng)損傷的范疇，為了盡量得到全面準(zhǔn)確的檢索結(jié)果，故將關(guān)鍵詞peripheral nerve injury（周圍神經(jīng)損傷）、cervical radiculopathy（神經(jīng)根型頸椎病）分別進(jìn)行檢索，獲取與CSR 相關(guān)基因[7]。

1.4 脊痛消膠囊“藥物—成分—靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與有效活性成分篩選

將脊痛消膠囊活性成分靶點(diǎn)與CRS 基因靶點(diǎn)導(dǎo)入Venny2.1.0 網(wǎng)站[Venny 2.1.0 (csic.es)]進(jìn)行映射分析，將交集靶點(diǎn)基因與其對(duì)應(yīng)的活性成分導(dǎo)入Cytoscape 3.9.1 軟件構(gòu)建脊痛消膠囊“藥物 成分 靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，利用CytoNAC 插件進(jìn)行拓?fù)浞治?，篩選出有效活性成分并保存分析結(jié)果。

1.5 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與關(guān)鍵靶點(diǎn)篩選

將脊痛消和CSR 交集靶點(diǎn)基因?qū)隨tring 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://string-db.org） ，設(shè)置置信度≥0.7，隱藏網(wǎng)絡(luò)中孤立的節(jié)點(diǎn)，將結(jié)果保存為TSV 格式文件并在Cytoscape 3.9.1 軟件中，對(duì)蛋白相互作用結(jié)果進(jìn)行分析，構(gòu)建可視化網(wǎng)絡(luò)，利用Cytoscape 3.9.1 軟件中的插件CytoNCA 進(jìn)行關(guān)鍵靶點(diǎn)篩選。

1.6 GO功能分析和KEGG通路富集分析

將潛在治療靶點(diǎn)導(dǎo)入R Studio 軟件，利用ClusterProfiler 包對(duì)潛在靶點(diǎn)進(jìn)行GO 功能和KEGG 通路富集分析，設(shè)置P ＜0.05，物種為Homo sapiens，再通過ggplot2 包對(duì)分析結(jié)果進(jìn)行可視化。

1.7 分子對(duì)接及可視化

從Protein Data Bank（PDB）數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.rcsb.org）下載各靶點(diǎn)基因的蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)，從TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)下載藥物有效活性成分的3D 結(jié)構(gòu)，利用Discover Studio 軟件對(duì)受體蛋白進(jìn)行去水和去配體等操作，運(yùn)用AutoDockTools 軟件對(duì)受體蛋白和配體小分子進(jìn)行加氫和平衡電荷等修飾。利用AutoDock Vina軟件對(duì)受體蛋白與配體小分子進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)合能打分，之后利用PyMOL 軟件將對(duì)接結(jié)果可視化。

2 結(jié)果

2.1 脊痛消膠囊活性成分收集與篩選

利用TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)、TCM-ID 數(shù)據(jù)庫(kù)和BATMAN-TCM 數(shù)據(jù)庫(kù)收集脊痛消的活性成分，結(jié)果當(dāng)歸2 種、地龍2 種、杜仲28 種、黃芪20 種、莪術(shù)3 種、三棱5 種、延胡索49 種、白芍13 種、防己3 種、車前子9 種、澤蘭2 種、澤瀉10 種、五靈脂6 種和川芎7 種。所有化合物去重后得到133 種活性成分。

2.2 脊痛消膠囊活性成分靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

利用TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)查詢脊痛消膠囊所含的133種活性成分，結(jié)果得到1 182 個(gè)靶點(diǎn)，其中當(dāng)歸50 個(gè)、地龍60 個(gè)、杜仲211 個(gè)、防己36 個(gè)、黃芪川芎27 個(gè)、208 個(gè)、三棱76 個(gè)、莪術(shù)22 個(gè)、延胡索208 個(gè)、白芍80 個(gè)、澤蘭45 個(gè)、澤瀉5 個(gè)和車前子154 個(gè)。去重后共得到275 個(gè)唯一靶點(diǎn)。

2.3 CSR靶點(diǎn)篩選

在數(shù)據(jù)庫(kù)中以peripheral nerve injury（周圍神經(jīng)損傷）和cervical radiculopathy（神經(jīng)根型頸椎病）進(jìn)行檢索后，分別獲得7 783 和102 個(gè)基因靶點(diǎn)，刪除重復(fù)值后共獲得7 111 個(gè)與CSR 有關(guān)的基因靶點(diǎn)。

2.4 脊痛消活性成分-作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與有效活性成分篩選

將上述獲得的脊痛消作用靶點(diǎn)與CSR 靶點(diǎn)取交集后，得到潛在作用靶點(diǎn)，共245 個(gè)（圖1）。使用Cytoscape 3.9.1 軟件構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)（圖2）。網(wǎng)絡(luò)由368 個(gè)節(jié)點(diǎn)和2 586 條邊組成，其中紅色V 形節(jié)點(diǎn)代表藥物，綠色方形節(jié)點(diǎn)代表基因靶點(diǎn)，黃色圓形節(jié)點(diǎn)代表藥物化學(xué)成分，藍(lán)色六邊形節(jié)點(diǎn)代表有效活性成分，每條邊表示藥物 活性成分、活性成分 潛在靶點(diǎn)之間的關(guān)系。根據(jù)度值（degree）大小篩選出排名前六的有效活性成分，見表1。

表1 有效活性成分信息Table 1 Active ingredient information

圖1 脊痛消靶點(diǎn)和CSR 靶點(diǎn)交集Fig.1 Intersection of Jitongxiao capsule target and CSR target

圖2 藥物-活性成分-潛在靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)Fig.2 Drug active ingredient potential target network

2.5 蛋白 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

將245 個(gè)潛在靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)，設(shè)置置信度＞0.7，構(gòu)建蛋白 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)，并利用Cytoscape 軟件進(jìn)行分析（圖3），PPI 網(wǎng)絡(luò)去除孤立節(jié)點(diǎn)后，共涉及228 個(gè)節(jié)點(diǎn)和3 308 條邊。根據(jù)度值大小決定各節(jié)點(diǎn)大小、顏色深度和字體大小，節(jié)點(diǎn)越大、顏色越深，說明該節(jié)點(diǎn)是脊痛消作用于神經(jīng)根型頸椎病的關(guān)鍵靶點(diǎn)，篩選出11 個(gè)核心靶點(diǎn)，見表2。

表2 核心靶點(diǎn)信息Table 2 Core target information

圖3 蛋白互作可視化結(jié)果Fig.3 Visualization results of protein interaction

2.6 GO功能分析

借助R 語(yǔ)言進(jìn)行分子功能（MF）、生物過程（BP）和細(xì)胞組成（CC）分析，繪制結(jié)果排名前十的柱狀圖和氣泡圖（圖4）。生物學(xué)過程主要表現(xiàn)為對(duì)異種刺激的反應(yīng)、對(duì)氧氣水平降低的反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)化學(xué)刺激的反應(yīng)和對(duì)脂多糖的反應(yīng)等；細(xì)胞組分主要包括突觸后膜、膜微結(jié)構(gòu)域、突觸前膜組成部分和細(xì)胞膜上的膜筏等；分子功能主要包括神經(jīng)遞質(zhì)受體活性、G 蛋白偶聯(lián)受體活性、突觸后神經(jīng)遞質(zhì)受體活性、核受體活性、配體激活的轉(zhuǎn)錄因子活性、DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子的活性和兒茶酚氨結(jié)合等。

圖4 GO 功能分析Fig.4 GO function analysis

2.7 KEGG通路富集分析

KEGG 分析結(jié)果顯示，潛在靶點(diǎn)主要涉及脂質(zhì)、動(dòng)脈粥樣硬化（Lipidandatherosclerosis）、晚期糖基化終末產(chǎn)物 糖基化終末產(chǎn)物受體信號(hào)通路（AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications）、前列腺癌（Prostate cancer）、白介素-17 信號(hào)通路（IL-17 signaling pathway）、乙型肝炎（Hepatitis B）、人類巨細(xì)胞病毒感染（Human cytomegalovirus infection）、絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路（MAPK signaling pathway）、非小細(xì)胞肺癌（Non-small cell lung cancer）、腫瘤壞死因子信號(hào)通路（TNF signaling pathway）和人類T 細(xì)胞白血病病毒 型感染（Human T-cell leukemia virus 1 infection）等，見圖5。

圖5 KEGG 富集分析Fig.5 KEGG enrichment analysis

2.8 分子對(duì)接驗(yàn)證結(jié)果

蛋白互作結(jié)果顯示：AKT1（PDB ID:1UNQ）、TP53（PDB ID:1AIE）、JUN（PDB ID:1S9K）、TNF（PDB ID:2AZ5）、HSP90AA1（PDB ID:3Q6N）、EGFR（PDB ID:2GS7）、IL6（PDB ID:4CNI）、CTNNB1（PDB ID:1G3J）、CASP3（PDB ID:1NMS）、RELA（PDB ID:3QSY）、MAPK1（PDB ID:4IZ5）在脊痛消膠囊治療CSR 的過程中發(fā)揮著重要作用。利用Autodock 軟件將脊痛消的關(guān)鍵活性成分與潛在靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)合能≤20.93 kJ/mol表明活性成分與靶點(diǎn)有較強(qiáng)的結(jié)合活性，分子對(duì)接結(jié)合能結(jié)果，見圖6。用PyMOL 軟件將對(duì)接的結(jié)果進(jìn)行可視化（圖7），活性成分與作用靶點(diǎn)之間主要是通過氫鍵等分子作用力形成較強(qiáng)結(jié)合力，槲皮素與TYR-285、HIS-252 兩個(gè)氨基酸以氫鍵結(jié)合到RELA（圖7 A）；山柰酚與HIS-252以氫鍵結(jié)合到RELA（圖7 B）；山柰酚與ALA-422、CYS-569 和LYS-520三個(gè)氨基酸以氫鍵結(jié)合到JUN（圖7 C）；谷甾醇與ASP-831 和LYS-721 以氫鍵結(jié)合到EGFR（圖7 D）；山柰酚與SER-65、GLY-44、TRP-47、TYR-96和PHE-98五個(gè)氨基酸以氫鍵結(jié)合到IL-6（圖7 E）；槲皮素與ASP-831、YHR-830、LYS-721 和MET-769 4 個(gè)氨基酸以氫鍵結(jié)合到EGFR（圖7 F）；谷甾醇與ASP-1、GLU-64以氫鍵結(jié)合到IL-6（圖7 G）；谷甾醇與MET-108 以氫鍵結(jié)合到MAPK1（圖7 H）；山柰酚與GLU-29、HIS-61以氫鍵結(jié)合到MAPK1（圖7 I）；谷甾醇與TRP-80、LEU-78以氫鍵結(jié)合到AKT1（圖7J）；山柰酚與MET-769、THR-830 和LYS-721 以氫鍵結(jié)合到EGFR（圖7 K）；谷甾醇與LEU-260 以氫鍵結(jié)合到RELA（圖7 L）。

圖6 分子對(duì)接結(jié)合能熱圖Fig.6 Thermograph of molecular docking binding energy

圖7 分子對(duì)接示意圖Fig.7 Molecular docking diagram

3 討論

CSR 屬于中醫(yī)“痹癥”和“項(xiàng)強(qiáng)”的范圍，外傷或勞損等原因，導(dǎo)致局部氣血運(yùn)行紊亂，正氣虛弱，瘀血內(nèi)停，水濕內(nèi)阻，血水互結(jié)，經(jīng)脈不通，日久失養(yǎng)從而致病，總的病機(jī)是氣機(jī)不暢、經(jīng)脈閉阻。根據(jù)不同臨床表現(xiàn)可將其分為風(fēng)寒阻絡(luò)證、寒濕阻絡(luò)證、氣滯血瘀證、氣血虧虛證和肝腎虧虛證，可分別予以祛風(fēng)散寒、散寒除濕、活血化瘀、補(bǔ)益氣血和滋補(bǔ)肝腎之法[8]。脊痛消膠囊是黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院院內(nèi)制劑，由當(dāng)歸、川芎、澤蘭、澤瀉、車前子、白芍、防己、杜仲、黃芪、延胡索、三棱、地龍、莪術(shù)和五靈脂共14 味藥物組成，其中當(dāng)歸和白芍補(bǔ)血；車前子、澤瀉和防己利水消腫除濕；川芎和延胡索行氣止痛；黃芪補(bǔ)氣升陽(yáng)，以助血行；五靈脂活血化瘀、緩急止痛，共奏活血化瘀、祛風(fēng)通絡(luò)之功效[9]。臨床此方用于治療CSR 療效顯著，但尚未明確是哪些活性成分通過何種作用機(jī)制發(fā)揮相應(yīng)效應(yīng)的。

本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法從脊痛消膠囊14味藥物中篩選出了133 種活性成分，275 個(gè)靶點(diǎn)基因，其中245 個(gè)靶點(diǎn)基因與CSR 相關(guān)，構(gòu)建藥物 活性成分 靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖，顯示有385 個(gè)節(jié)點(diǎn)和2 648 條邊，顯示了脊痛消膠囊多成分、多靶點(diǎn)作用于CSR 的特點(diǎn)。GO 分析結(jié)果顯示，-谷甾醇、山柰酚、槲皮素、豆甾醇和常春藤皂苷元等化學(xué)成分與對(duì)異種刺激的反應(yīng)、對(duì)氧氣水平降低的反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)化學(xué)刺激的反應(yīng)和對(duì)脂多糖的反應(yīng)等作用機(jī)制相關(guān)。分子對(duì)接結(jié)果顯示，-谷甾醇、山柰酚、槲皮素、豆甾醇和常春藤皂苷元與AKT1、JUN、TNF、HSP90AA1、P53 和IL-6 等關(guān)鍵靶點(diǎn)有較強(qiáng)的結(jié)合力，KEGG 分析結(jié)果顯示，脊痛消的有效成分可以調(diào)控AGE-RAGE 信號(hào)通路、腫瘤壞死因子信號(hào)通路、白介素 17 信號(hào)通路和絲裂原蛋白活化激酶信號(hào)通路等，說明脊痛消膠囊包含的多種活性成分是通過多靶點(diǎn)和多通路實(shí)現(xiàn)對(duì)CSR 的治療作用的。

AKT 也稱為蛋白激酶B，是一組絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，AKT1 是最重要的亞型之一，在多種生物學(xué)過程中發(fā)揮重要作用[10]。研究顯示，AKT1 是治療神經(jīng)根型頸椎病的關(guān)鍵靶點(diǎn)之一，激活A(yù)KT 信號(hào)通路可抑制神經(jīng)細(xì)胞自噬和凋亡，修復(fù)受損神經(jīng)根，顯著抑制椎間盤軟骨細(xì)胞的凋亡[11,12]。-谷甾醇和山柰酚可通過激活A(yù)KT 通路抑制細(xì)胞凋亡[13,14]，槲皮素可減輕神經(jīng)縮窄引起的神經(jīng)病理性疼痛[15]，抑制由脊髓損傷引起的神經(jīng)元自噬[16]。腫瘤壞死因子（TNF），是一種炎癥介質(zhì)，可以增加破骨細(xì)胞的分化從而加重關(guān)節(jié)損傷和骨質(zhì)丟失[17]，頸椎間盤退化患者血清中TNF和IL-6水平顯著上升[18]，本團(tuán)隊(duì)前期研究發(fā)現(xiàn)，脊痛消膠囊可顯著降低神經(jīng)根型頸椎病模型大鼠神經(jīng)根IL-6 的水平[19]。槲皮素可降低TNF- 水平從而減輕脊髓炎癥反應(yīng)[20]，山柰酚可以靶向調(diào)節(jié)TLR4/NF- B信號(hào)通路，降低TNF 水平發(fā)揮保護(hù)神經(jīng)元的作用。JUN 蛋白是激活蛋白-1（AP-1）復(fù)合體中研究最廣泛的蛋白，參與增殖、凋亡、存活和腫瘤發(fā)生等多種細(xì)胞活動(dòng)[21]。據(jù)報(bào)道，JUN 蛋白在周圍神經(jīng)系統(tǒng)損傷后修復(fù)中發(fā)揮重要作用，其表達(dá)上調(diào)可促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)，然而隨著失神經(jīng)時(shí)間延長(zhǎng)，JUN的表達(dá)逐漸降低[22]，研究表明[23]，槲皮素可下調(diào)JUN 蛋白磷酸化水平發(fā)揮保護(hù)雪旺細(xì)胞（SCs）的成髓鞘功能。熱休克蛋白90（HSP90）是一種重要的分子伴侶，用以保證其他蛋白質(zhì)在生物學(xué)過程中保持結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定[24]。在周圍神經(jīng)損傷模型中，HSP90通過與雙亮氨酸鏈激酶結(jié)合促進(jìn)軸突損傷信號(hào)的傳遞，增加神經(jīng)元的修復(fù)與再生[25]。研究表明，HSP90 在抑制神經(jīng)病理性疼痛的過程中與TLR4 發(fā)揮著協(xié)同作用[26]。

脊痛消膠囊治療神經(jīng)根型頸椎病的生物學(xué)過程主要涉及對(duì)（細(xì)胞）外刺激的反應(yīng)、對(duì)缺氧的反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)化學(xué)刺激的反應(yīng)、對(duì)活性氧的反應(yīng)和對(duì)脂多糖的反應(yīng)等。炎癥反應(yīng)是神經(jīng)根型頸椎病的重要病理過程，臨床研究表明，神經(jīng)根型頸椎病患者血清中TNF、IL-1 和IL-6 水平顯著升高，IL-2 水平顯著降低，炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致神經(jīng)根性痛的主要原因[27,28]。活性氧（ROS）是一種分子質(zhì)量小但活性高的物質(zhì)，主要包括氧陰離子、氧自由基（超氧化物和羥基自由基）和過氧化氫等過氧化物，可以氧化包括蛋白質(zhì)、DNA 和脂質(zhì)在內(nèi)的多種細(xì)胞組分[29]。最新研究顯示，ROS靶向介導(dǎo)NOX2/PI3K/AKT 信號(hào)通路的激活促進(jìn)損傷后神經(jīng)軸突的再生和功能恢復(fù)[30]。KEGG 富集分析發(fā)現(xiàn)，脊痛消膠囊治療神經(jīng)根型頸椎病的靶向信號(hào)通路主要有AGE-RAGE 信號(hào)通路、TNF 信號(hào)通路、IL-17 信號(hào)通路和MAPK 信號(hào)通路等。AGEs 是葡萄糖或者果糖等其他糖類對(duì)蛋白質(zhì)、核酸等大分子進(jìn)行翻譯后非酶修飾得到的異質(zhì)分子，在各年齡相關(guān)性疾病中，AGEs 與受體RAGEs結(jié)合，可促進(jìn)氧化應(yīng)激從而加強(qiáng)炎癥反應(yīng)[31]。MAPK/ERK 信號(hào)通路在周圍神經(jīng)損傷修復(fù)過程中發(fā)揮著重要作用，研究顯示，周圍神經(jīng)損傷后，神經(jīng)元和軸突中的MAPK/ERK1 通路激活，且ERK 磷酸化水平隨時(shí)間變化而不同[32]。免疫反應(yīng)是神經(jīng)根型頸椎病根性痛發(fā)生的原因之一[33]，白介素17（IL-17）是由輔助性T細(xì)胞17 分泌的一種促炎因子，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生，周圍神經(jīng)損傷后，TH17 數(shù)量顯著增加，釋放IL-17 促進(jìn)機(jī)械性疼痛超敏反應(yīng)的發(fā)生[34]。

綜上，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接技術(shù)預(yù)測(cè)脊痛消膠囊治療神經(jīng)根型頸椎病的分子機(jī)制，結(jié)果表明，脊痛消膠囊中包括-谷甾醇、槲皮素、山柰酚和豆甾醇在內(nèi)的多種活性成分可以穩(wěn)定結(jié)合AKT1、TNF、JUN和MAPK等作用靶點(diǎn)，通過TNF信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、IL-17 信號(hào)通路和AGE-RAGE 信號(hào)通路調(diào)控氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)等生物學(xué)過程發(fā)揮治療神經(jīng)根型頸椎病的作用。但本研究也存在一定的局限性，只研究了分子對(duì)接對(duì)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果的驗(yàn)證，應(yīng)進(jìn)一步研究體內(nèi)、外試驗(yàn)，使試驗(yàn)結(jié)果更具有科學(xué)性和準(zhǔn)確性，為脊痛消膠囊的臨床應(yīng)用提供理論參考依據(jù)。