王晨越, 吳莉沙, 湯承博, 王 進, 解 偉,4

(1. 上海理工大學(xué)健康科學(xué)與工程學(xué)院, 上海 200093; 2. 上海健康醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院, 上海 201318;3. 上海健康醫(yī)學(xué)院上海市分子影像學(xué)重點實驗室, 上海 201318; 4. 上海理工大學(xué)研究生院, 上海 200093)

免疫檢查點阻斷療法可通過激活或重新激活腫瘤免疫循環(huán)治療癌癥, 因此是一種利用免疫系統(tǒng)(如腫瘤特異性細胞毒性T 細胞) 的細胞毒性潛力治療惡性腫瘤的策略[1], 已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于經(jīng)手術(shù)、放療、化療及靶向治療后的腫瘤患者治療, 其中以程序性死亡受體1(programmed cell death protein 1,PD-1)及其配體PD-L1 抑制劑為代表的免疫檢查點抑制劑(immune checkpoint inhibitors, ICIs) 在腫瘤免疫治療中取得了突破性進展, 尤其是在肺癌、腎癌和黑色素瘤的治療中[2]. 臨床數(shù)據(jù)表明, 可有效響應(yīng)ICIs 的瘤種較少, 一些常見的癌癥類型(如乳腺癌、前列腺癌和結(jié)腸癌) 對ICIs 反應(yīng)率較低, 即使對于反應(yīng)率相對較高的黑色素瘤,如非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)、膀胱癌等, 隨著藥物使用時間的延長,大部分患者均不可避免地出現(xiàn)耐藥性并伴隨腫瘤的復(fù)發(fā). 研究表明, 腫瘤浸潤T 細胞的缺失會導(dǎo)致ICIs 治療的失敗, 耐藥及反應(yīng)率低[3], 其中以PD-1/PD-L1 抑制劑為代表的ICIs 更是面臨腫瘤患者響應(yīng)率低以及耐藥性等問題. 新出現(xiàn)的臨床數(shù)據(jù)顯示, 患者對PD-1/PD-L1 治療的應(yīng)答率差異較大, 僅有不到20% 的患者會對PD-1/PD-L1 免疫治療進行有效應(yīng)答[1]. 腫瘤組織浸潤T 細胞的缺失及免疫抑制腫瘤微環(huán)境(tumor microenvironment, TME) 可能是制約ICIs 的重要原因, 而腫瘤內(nèi)源性促癌信號通路會造成非T 細胞浸潤(non-T cell-inflamed)TME, 其中Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路是最典型和最重要的促癌信號通路. 越來越多的研究表明, 腫瘤Wnt/β-連環(huán)蛋白通路的異常激活是免疫治療失敗的原因[1]. 本工作主要探討以PD-1/PD-L1 和細胞毒性T 淋巴細胞抗原4 (cytotoxic T lymphocyte antigen-4, CTLA-4) 為代表的免疫檢查點與Wnt/β-連環(huán)蛋白通路的相互關(guān)系, 并對聯(lián)合使用ICIs 與Wnt/β-連環(huán)蛋白抑制劑治療惡性腫瘤的研究進展進行綜述.

1 Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路與PD-1/PD-L1

目前, PD-1 的配體PD-L1(B7-H1, CD274) 在多種人類癌癥(包括乳腺癌、宮頸癌、肺癌、結(jié)直腸癌、黑色素瘤等) 中高表達. 腫瘤細胞中PD-L1 的高表達可導(dǎo)致細胞毒性T 細胞功能障礙和耗竭, 從而逃避免疫監(jiān)視, 阻止腫瘤細胞的清除, 是癌癥患者臨床不良預(yù)后的原因之一[1-2]. 越來越多的證據(jù)表明, 腫瘤內(nèi)源性促癌信號通路的活化或抑瘤基因的缺失均會通過促進T 細胞排斥, 驅(qū)動免疫抑制表型從而削弱抗腫瘤免疫應(yīng)答. 其中Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路是最為典型的腫瘤內(nèi)源性促癌信號通路. Wnt/β-連環(huán)蛋白異常激活的腫瘤, 往往伴有T 細胞腫瘤浸潤水平低下, 且對ICIs 耐藥[4].

1.1 Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路調(diào)節(jié)PD-L1 的表達

Wnt/β-連環(huán)蛋白通路可以阻斷腫瘤免疫的多個環(huán)節(jié), 包括腫瘤抗原釋放、抗原提呈、T細胞激活與浸潤、腫瘤細胞消除等[3]. Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路在阻斷腫瘤免疫的過程中可通過轉(zhuǎn)錄復(fù)合物β-連環(huán)蛋白/T 細胞因子/淋巴增強因子(T-cell factor/lymphoid enhancing factor, TCF/LEF) 或轉(zhuǎn)錄因子MYC 與PD-L1 的啟動子結(jié)合進而影響其轉(zhuǎn)錄.

PD-L1 的表達與β-連環(huán)蛋白-AKT 軸也密切相關(guān). Du[5]等發(fā)現(xiàn)在膠質(zhì)瘤、前列腺癌和肺癌細胞中由Wnt 配體或AKT 介導(dǎo)活化的Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路會誘導(dǎo)β-連環(huán)蛋白在S552 位的磷酸化和β-連環(huán)蛋白的核聚集, 并與腫瘤細胞PD-L1 的表達呈正相關(guān), 但與腫瘤組織CD8+T 細胞的浸潤程度呈負相關(guān). 經(jīng)進一步研究發(fā)現(xiàn), 激活的Wnt/β-連環(huán)蛋白信號會促進β-連環(huán)蛋白入核, 與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF 形成復(fù)合物, 并與CD274 的啟動子區(qū)域結(jié)合, 誘導(dǎo)PD-L1 的表達; β-連環(huán)蛋白敲除或AKT 抑制劑會下調(diào)腫瘤細胞PD-L1 的表達, 增強腫瘤組織中CD8+T 細胞的浸潤和活化. 將經(jīng)典的Wnt 通路抑制劑或AKT 抑制劑與靶向PD-1/PD-L1 抗體聯(lián)合用藥可以有效克服腫瘤免疫逃逸并顯著抑制腫瘤生長.

大規(guī)模測序揭示了編碼Wnt/β-連環(huán)蛋白通路蛋白的基因在許多癌癥(如結(jié)直腸癌、甲狀腺癌、卵巢癌和皮膚癌等) 細胞中頻繁突變. 大多數(shù)突變會導(dǎo)致β-連環(huán)蛋白的異常積累, 這種積累會導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄復(fù)合物β-連環(huán)蛋白/TCF/LEF 的形成, 并結(jié)合到Wnt 靶基因的啟動子上[3].腺瘤樣結(jié)腸息肉癌蛋白(adenomatous polyosis coli, APC) 功能喪失是結(jié)腸癌患者中常見的突變,大約80%的結(jié)直腸癌中都存在APC 基因的突變.APC 基因的突變和丟失可以誘導(dǎo)PD-L1的表達, 而β-連環(huán)蛋白是APC 誘導(dǎo)PD-L1 所依賴的關(guān)鍵蛋白[6-7]. APC 的缺失會抑制β-連環(huán)蛋白降解復(fù)合物的形成, 誘導(dǎo)β-連環(huán)蛋白的積累及入核, 當(dāng)β-連環(huán)蛋白入核后與TCF4 形成復(fù)合物并結(jié)合PD-L1 啟動子區(qū)域, 增強其表達. Cen 等[8]證明了在野生型APC 和β-連環(huán)蛋白基因的結(jié)直腸癌細胞和正常人結(jié)腸上皮細胞中APC 的缺失會通過誘導(dǎo)β-連環(huán)蛋白/TCF4復(fù)合物的形成并與PD-L1 啟動子的TBE3 (?467 至?460) 結(jié)合來誘導(dǎo)PD-L1 轉(zhuǎn)錄.

轉(zhuǎn)錄因子MYC 是Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路下游的一個靶點, 調(diào)節(jié)許多Wnt 相關(guān)基因的表達[9]. 癌細胞中Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路組分的突變可誘導(dǎo)MYC 過表達, 導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和發(fā)展. 此外, MYC 過表達也是腫瘤上調(diào)免疫檢查點表達從而逃避免疫監(jiān)視的一種普遍機制. MYC 可直接與PD-L1 基因的啟動子結(jié)合, 調(diào)節(jié)PD-L1 的表達. 在人肝癌細胞系HEPG2 與肝癌的轉(zhuǎn)基因小鼠模型中, MYC 抑制劑會下調(diào)PD-L1 的mRNA 和蛋白質(zhì)水平.同時, 研究發(fā)現(xiàn), 在人黑色素瘤及NSCLC 細胞中, 使用shRNA 對MYC 敲減或MYC 抑制劑都能降低PD-L1 mRNA 和蛋白的表達, 誘導(dǎo)T 細胞和巨噬細胞在腫瘤病灶的聚集, 增強抗腫瘤免疫應(yīng)答[10].

多羥基二磷寡糖-蛋白糖基轉(zhuǎn)移酶亞基(STT3) 是誘導(dǎo)PD-L1 所必須的誘導(dǎo)因子. Hsu等[11]發(fā)現(xiàn), 上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transition, EMT) 通過EMT/β-連環(huán)蛋白/STT3/ PD-L1 信號軸富集了腫瘤干細胞(cancer stem-like cells, CSCs) 中的PD-L1, 其中β-連環(huán)蛋白在細胞中異常積累并轉(zhuǎn)移到細胞核中, 激活了STT3 亞型的啟動子, 進而轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)STT3, 隨后STT3 促進PD-L1 糖基化并上調(diào)PD-L1. 這項研究還顯示, 依托泊苷通過拓撲異構(gòu)酶ⅡB(topoisomerase ⅡB, TOP2B) 途徑減少核β-連環(huán)蛋白而抑制EMT/β-連環(huán)蛋白/STT3/PD-L1 軸, 逆轉(zhuǎn)EMT, 下調(diào)PD-L1 表達, 并提高腫瘤對T 細胞免疫球蛋白黏蛋白-3 (T cell immunoglobulin mucin-3, Tim-3) 抑制劑的敏感性.

另一項關(guān)于三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer, TNBC) 的研究表明[12], PD-L1高表達腫瘤細胞大多伴有干細胞表型, 并且參與TNBC 相關(guān)的免疫逃逸的復(fù)雜機制. 在PD-L1 高表達的TNBC 中觀察到, Wnt 上游負調(diào)控因子的下調(diào)和下游效應(yīng)因子的上調(diào), 且在PD-L1 高表達的TNBC 中, 與PD-L1 低表達的TNBC 相比, Wnt 相關(guān)基因的表達顯著升高.進一步研究表明, 使用經(jīng)典Wnt 信號通路特異性抑制劑會下調(diào)PD-L1 的表達, 從而有效逆轉(zhuǎn)腫瘤浸潤T 細胞的失活狀態(tài), 為靶向Wnt/β-連環(huán)蛋白通路抑制劑聯(lián)合PD-1/PD-L1 抑制劑的臨床使用提供了依據(jù).

綜上, 腫瘤內(nèi)源性Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路的活化會介導(dǎo)β-連環(huán)蛋白/TCF/LEF 轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的形成, 并上調(diào)下游靶點MYC 的表達, β-連環(huán)蛋白/TCF/LEF 及MYC 均可與PD-L1的啟動子區(qū)域結(jié)合, 增強其轉(zhuǎn)錄. 另外, β-連環(huán)蛋白在細胞中異常積累并轉(zhuǎn)移到細胞核后會誘導(dǎo)STT3 的轉(zhuǎn)錄, 而STT3 促進PD-L1 糖基化并上調(diào)PD-L1, 從而誘導(dǎo)腫瘤免疫逃逸(見圖1).

圖1 腫瘤內(nèi)源性Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路調(diào)控PD-L1 的表達Fig.1 Tumor endogenous Wnt/β-catenin signaling pathway regulates the expression of PD-L1

AKT/Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路的激活會誘導(dǎo)MYC 介導(dǎo)的PD-L1 表達上調(diào), 另外β-連環(huán)蛋白入核后會通過誘導(dǎo)STT3 轉(zhuǎn)錄來上調(diào)PD-L1.

1.2 Wnt/β-連環(huán)蛋白介導(dǎo)PD-1/PD-L1 抑制劑耐藥

Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路在阻斷腫瘤免疫的過程中除可通過轉(zhuǎn)錄復(fù)合物β-連環(huán)蛋白/TCF/LEF 或轉(zhuǎn)錄因子MYC 與PD-L1 的啟動子結(jié)合影響其轉(zhuǎn)錄外, 還可通過Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路的激活抑制趨化因子C-C 配體4 (chemokine (C-C motif) ligand 4, CCL4)、樹突狀細胞(dendriticcell, DC) 的聚集等影響T 細胞的招募, 誘導(dǎo)非T 細胞浸潤TME, 進而削弱PD-1/PD-L1 抑制劑的治療效果(見圖2).

圖2 腫瘤內(nèi)源性Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路誘導(dǎo)非T 細胞浸潤TMEFig.2 Tumor endogenous Wnt/β-catenin signaling pathway induces non-T cell-inflamed TME

Luke 等[13]通過癌癥基因組圖譜(the cancer genome atlas, TCGA) 對肝癌、胃癌、膀胱癌、腎癌和肺癌等31 種惡性腫瘤中T 細胞炎癥相關(guān)基因和Wnt/β-連環(huán)蛋白通路分子突變、靶基因及β-連環(huán)蛋白蛋白表達水平進行分析, 發(fā)現(xiàn)非T 細胞浸潤腫瘤組織中的Wnt/β-連環(huán)蛋白通路分子突變富集程度是T 細胞浸潤腫瘤的3 倍, 90% 瘤種中Wnt/β-連環(huán)蛋白信號的活化與T 細胞浸潤相關(guān)基因表達呈負相關(guān). 同時Trujillo 等[14]在基因工程小鼠模型中發(fā)現(xiàn),Wnt/β-連環(huán)蛋白信號活化的黑色素瘤中缺乏腫瘤浸潤T 細胞, 這可能是由于特異性DC 未能募集到腫瘤中, 從而影響T 細胞向TME 的募集, 與黑色素瘤患者中觀察到的浸潤表型相似.

免疫排斥和Wnt/β-連環(huán)蛋白通路之間的關(guān)系在轉(zhuǎn)移性黑色素瘤中被首次確認[15].Spranger 等[16]在β-連環(huán)蛋白信號傳導(dǎo)活躍的基因工程黑色素瘤小鼠模型中發(fā)現(xiàn), β-連環(huán)蛋白信號激活與TME 中低水平的腫瘤浸潤CD8+T 細胞相關(guān); 相反, β-連環(huán)蛋白信號缺失的小鼠伴有高水平的CD8+T 細胞浸潤. 進一步的研究表明, 激活的β-連環(huán)蛋白會通過誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄抑制因子ATF3 的表達, 使得趨化因子CCL4 表達下調(diào), 進而導(dǎo)致堿性亮氨酸拉鏈ATF 樣轉(zhuǎn)錄因子(basic leucine-zipper ATF-like transcription factor 3, Batf3) 依賴性CD103+DC 細胞浸潤和活化受損, CD8+T 細胞浸潤和激活減少, 從而減弱對ICIs 的響應(yīng), 該結(jié)果與Ding等[17]在黑色素瘤小鼠模型中觀察到的結(jié)果一致. Spranger 等[16]的進一步研究發(fā)現(xiàn), 在黑色素瘤中抗PD-1 和抗CTLA-4 抗體在Wnt 激活小鼠中無效, 但在Wnt 失活小鼠中有效, 表明β-連環(huán)蛋白上調(diào)確實可能誘導(dǎo)ICIs 抵抗, 該結(jié)果為聯(lián)合使用Wnt/β-連環(huán)蛋白通路抑制劑與ICIs 提供了理論支持.

活化的Wnt 信號通路會誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄抑制因子ATF3 的表達, 并下調(diào)CCL4 的表達, 進而導(dǎo)致Batf3 依賴性的DC 招募受損, 抑制CD8+T 細胞的啟動和腫瘤浸潤.

1.3 Wnt/β-連環(huán)蛋白抑制劑增強PD-1/PD-L1 抑制劑的抗腫瘤效果

β-連環(huán)蛋白激活在腫瘤免疫逃避中具有重要的臨床意義. 考慮到Wnt/β-連環(huán)蛋白通路可以調(diào)節(jié)Batf3 依賴性CD103+DC 細胞介導(dǎo)的CD8+T 細胞激活與腫瘤浸潤, 以及β-連環(huán)蛋白/TCF/LEF 可特異性結(jié)合CD274 的啟動子區(qū)域并誘導(dǎo)PD-L1 的轉(zhuǎn)錄, 因此阻斷β-連環(huán)蛋白可能會提高抗PD-1/PD-L1 單藥在相同劑量給藥下的療效[6].

在Huang 等[1]的研究中發(fā)現(xiàn), 骨髓來源的癌相關(guān)成纖維細胞BMFs 中Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路的激活可誘導(dǎo)PD-L1 過表達, 從而對抗PD-L1 抗體產(chǎn)生耐藥性. β-連環(huán)蛋白信號通路選擇性抑制劑XAV-939 和Wnt-C59 可顯著降低腫瘤細胞中PD-L1 的表達. 在對荷瘤小鼠進行進一步的研究發(fā)現(xiàn), Wnt 信號通路抑制劑XAV-939 與抗PD-L1 抗體的聯(lián)合使用可顯著增強抗PD-L1 抗體的治療效果, 可逆轉(zhuǎn)TME 中的免疫抑制狀態(tài). 可見, Wnt/β-連環(huán)蛋白是重建腫瘤對抗PD-L1 免疫療法敏感性的潛在靶點. E7386 可選擇性地抑制β-連環(huán)蛋白和環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件(cAMP-response element binding protein, CREB) 結(jié)合蛋白(一種調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的蛋白) 之間的相互作用, 且調(diào)節(jié)β-連環(huán)蛋白信號通路. Yamada等[18]證明, 在小鼠乳腺腫瘤病毒(mouse mammary tumor virus, MMTV)-Wnt1 小鼠腫瘤模型中, E7386 與抗PD-1 抗體的聯(lián)合治療與各單藥治療相比顯示出協(xié)同抗腫瘤的作用. 最近, Feng 等[19]開發(fā)了一種針對β-連環(huán)蛋白/B 細胞淋巴瘤(B-cell lymphoma, BCL9) 相互作用的強效選擇抑制劑hsBCL9CT-24, 該抑制劑可通過促進免疫細胞的瘤內(nèi)浸潤, 減少調(diào)節(jié)性T 細胞(regulatory cell, Treg) 比例, 增加DCs 比例, 抑制BCL9/BCL9L 和轉(zhuǎn)化生長因子, 從而克服腫瘤對ICIs的耐藥性, 與抗PD-1 抗體聯(lián)用, 顯著降低了腫瘤的生長速度, 為其他不可治的癌癥提供協(xié)同抗腫瘤的作用.

DKN-01 是一種針對Dickkopf-1 (DDK-1) 的單克隆抗體, 可調(diào)節(jié)Wnt 信號. 在一項DKN-01 聯(lián)合Pembrolizumab 治療胃食管癌患者的Ⅰb 期研究中, 聯(lián)合治療后疾病控制率明顯提高, 且無明顯毒性. 由于DKK1 通常在Wnt 信號通路被激活的轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌(metastaticcolorectal, mCRC) 中過表達, 因此在臨床上DKN-01 與抗PD-L1 聯(lián)合治療可能適用于微衛(wèi)星穩(wěn)定(micro satellite stability, MSS) 型mCRC 的治療[20]. 在MSS 型mCRC 中, ICIs 單藥治療無效, STAT/β-連環(huán)蛋白/PD-L1 信號軸是誘導(dǎo)發(fā)生免疫逃逸的驅(qū)動因素. 臨床實驗結(jié)果表明[21], STAT/β-連環(huán)蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑BBI608 與抗PD-L1 抗體Pembrolizumab 聯(lián)合使用可增強抗PD-L1 抗體治療效果.

盡管ICIs 的使用徹底改變了抗腫瘤的治療策略, 但大多數(shù)患者(約80%) 對ICIs 產(chǎn)生不同程度的耐藥, 尤其是在β-連環(huán)蛋白異常激活的腫瘤中[1,4]. 因此, 阻斷Wnt 信號通路可以通過解除免疫抑制來促進免疫細胞腫瘤浸潤和增強免疫治療效果等提高臨床治療效果. 表1 對處于不同臨床階段的Wnt/β-連環(huán)蛋白抑制劑和ICIs 聯(lián)合用藥進行了總結(jié).

表1 Wnt/β-連環(huán)蛋白抑制劑聯(lián)合ICIs 治療作用研究進展Table 1 Progress in treatment of Wnt/β-catenin inhibitors combined with ICIs

2 Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路與CTLA-4

CTLA-4 也稱CD152, 主要在活化的CD4+、CD8+T 細胞以及腫瘤浸潤Treg 上表達,能夠與配體CD80/CD86 結(jié)合[22-23], 中止激活的T 細胞的反應(yīng)以及介導(dǎo)Treg 的抑制功能[24].此外,CTLA-4 還可直接介導(dǎo)DC 結(jié)合CD80/CD86 并誘導(dǎo)吲哚胺2,3 雙加氧酶(indoleamine 2, 3-dioxygenase, IDO) 的表達, 從而導(dǎo)致T 細胞受體(T cell receptor, TCR) 的抑制[25-26],促進TME 的免疫抑制. 越來越多的研究表明, Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路的激活不僅能調(diào)控CTLA-4 的表達, 還能通過調(diào)控DCs 參與CTLA-4 抑制劑的耐藥[27], 且其抑制劑能通過增加CD8+T 細胞的浸潤來增強CTLA-4 抑制劑的抗腫瘤效果.

2.1 Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路在CTLA-4 介導(dǎo)免疫逃逸中的作用

CTLA-4 是Wnt/β-連環(huán)蛋白信號的直接靶點, 由Wnt/β-連環(huán)蛋白途徑轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié).CTLA-4 啟動子區(qū)域的β-連環(huán)蛋白應(yīng)答需要TCF1/LEF1 存在于轉(zhuǎn)錄起始位點. Shah等[24]在β-連環(huán)蛋白激活的黑色素瘤中發(fā)現(xiàn), CTLA-4 的表達量明顯上升, 并通過RT-PCR 和流式細胞術(shù)進一步證明Wnt/β-連環(huán)蛋白信號在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平誘導(dǎo)黑色素瘤細胞中CTLA-4的表達. 在CTLA-4 轉(zhuǎn)錄起始位點發(fā)現(xiàn)存在4 個潛在的TCF/LEF 轉(zhuǎn)錄應(yīng)答元件, 通過PCR技術(shù)分離這些區(qū)域可以發(fā)現(xiàn), 與分離區(qū)域相比, 未分離區(qū)域加入Wnt3a 后, Wnt3a 通過TCF/LEF 結(jié)合位點以劑量依賴性增加CTLA-4 啟動子的活性, 且此過程可被Wnt 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑DDK-1 阻斷.

2.2 Wnt/β-連環(huán)蛋白抑制劑增強CTLA-4 抑制劑的抗腫瘤效果

目前, 靶向CTLA-4 的單克隆抗體包括伊匹單抗和曲美木單抗, 阻斷CTLA-4 和CD80/CD86 的相互作用[28]. 解除抑制T 細胞活化的信號, 從而維持T 細胞激活狀態(tài).但抗CTLA-4 單藥治療范圍在很大程度上僅限于黑色素瘤[29].

RX-5902 是一種新型的β-連環(huán)蛋白小分子抑制劑, 在臨床前模型中可降低β-連環(huán)蛋白的核聚集. Tenlter 等[30]證明在TNBC 小鼠模型中, 與RX-5902 單藥治療相比, 較低劑量的RX-5902 和抗CTLA-4 聯(lián)合治療對腫瘤生長的抑制作用更強. 膜結(jié)合O-?；D(zhuǎn)移酶(PORCN) 是Wnt 生物合成的關(guān)鍵酶. C59 是一種PORCN-Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路抑制劑, 在黑色素瘤模型[31]中發(fā)現(xiàn), 與抗CTLA-4 抗體聯(lián)合使用可增強腫瘤浸潤CD8+T 細胞的活化和腫瘤抗原特異性CD8+T 細胞的擴增, 顯著抑制黑色素瘤的生長, 增強抗腫瘤免疫的協(xié)同作用. DCR-BCAT 是一種納米顆粒藥物產(chǎn)品, 可靶向CTNNB1 (編碼β-連環(huán)蛋白的基因) 的RNAi 觸發(fā)器, 選擇性沉默腫瘤中的CTNNB1 在各種Wnt 依賴性臨床前模型中能快速抑制腫瘤生長. Ganesh 等[32]證明, 在黑色素瘤的乳腺癌神經(jīng)母細胞瘤和腎腺癌中, 用DCR-BCAT 抑制β-連環(huán)蛋白顯著增加了T 細胞浸潤及抗原提呈細胞和趨化因子的表達, 并增強了腫瘤對PD-1/PD-L1、CTLA-4 抑制劑的敏感性. 當(dāng)在MMTV Wnt1 轉(zhuǎn)基因小鼠中(一種自發(fā)性Wnt driven 腫瘤的遺傳模型), DCR-BCAT 與抗CTLA-4 抗體聯(lián)合使用時, 接受治療的小鼠實現(xiàn)了腫瘤的完全消退. 表1 對處于不同臨床階段的Wnt/β-連環(huán)蛋白抑制劑和ICIs 聯(lián)合用藥進行了總結(jié).

3 Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路與其他免疫檢查點

Tim-3 是活化和耗盡T 細胞上的抑制性受體[30], 主要在T 細胞、Treg 細胞、先天免疫細胞表面表達[33]. Tim-3 配體半乳糖凝集素9 (galectin 9, Gal9) 與Tim-3 結(jié)合后導(dǎo)致T 細胞功能下調(diào), 形成抑制腫瘤免疫的負反饋調(diào)節(jié)機制. 淋巴細胞活化基因-3 (lymphocyte activation gene 3, LAG-3) 主要表達在活化的T 淋巴細胞、B 淋巴細胞、自然殺傷細胞和漿細胞樣樹突狀細胞(plasma cytoid dendritic cells, pDCs) 中, 與主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類分子和Gal3結(jié)合, 并負調(diào)控T 細胞功能[34-35]. 一直以來, 腫瘤中LAG-3 表達水平和LAG-3+細胞浸潤與腫瘤進展、預(yù)后不良和各種類型的人類腫瘤相關(guān)[36]. T 細胞免疫球蛋白和ITIM 結(jié)構(gòu)蛋白(T cell immunoglobulin and ITIM domain protein, TIGIT), 在原始T 細胞弱表達. TIGIT 和競爭性共刺激受體CD226 競爭結(jié)合配體CD155 和CD113[33]. 在癌癥中, TIGIT 與PD-1 在小鼠、人類腫瘤抗原特異性CD8+T 細胞和CD8+腫瘤浸潤淋巴細胞上共表達[37].

基因敲除和荷瘤小鼠抗體治療實驗結(jié)果顯示[38], 與抗CTLA-4 和抗PD-1 抗體相比,Tim-3 抗體自身沒有明顯的免疫毒副作用, 具有良好的臨床應(yīng)用前景. 上文中提到, Hsu等[11]已經(jīng)證明依托泊苷可通過TOP2B 降解依賴性核β-連環(huán)蛋白, 抑制EMT/β-連環(huán)蛋白/STT3/PD-L1 軸. 在間質(zhì)樣小鼠癌基因模型中, 依托泊苷與抗Tim-3 抗體聯(lián)合應(yīng)用時可誘導(dǎo)腫瘤CD8+T 細胞群的浸潤活化, 從而增強Tim-3 阻斷治療對腫瘤的抑制能力. LAG-3 的表達與Wnt/糖原合成酶激酶-3 (glycogen synthase kinase 3, GSK-3)/Tbet-LAG-3 軸密切相關(guān), GSK-3 可誘導(dǎo)β-連環(huán)蛋白磷酸化, 從而降解β-連環(huán)蛋白, 抑制其進入細胞核, 進一步Wnt信號通路的激活被抑制. Issa 等[39]的研究表明GSK-3 的激活可調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子(nuclear factor of activated T cell, NFAT) 的表達, NFAT 又可反過來抑制LAG-3 的轉(zhuǎn)錄, 減少LAG-3 的表達. 該課題組還發(fā)現(xiàn)抗LAG-3 和GSK-3 抑制劑聯(lián)合用藥可進一步阻止腫瘤的生長, 并延長小鼠的存活期.GSK-3 增強抗腫瘤作用主要是通過GSK-3 的抑制來增加轉(zhuǎn)錄因子Tbet (Tbx21)的表達, Tbet 又可反過來抑制LAG-3 的轉(zhuǎn)錄. 使用GSK-3 小分子抑制劑(SMI) 或SiRNA抑制GSK-3 的表達, 會導(dǎo)致LAG-3 表達減少, 并顯著增加CD8+T 細胞的活性, 抑制腫瘤的生長.

4 總結(jié)與展望

免疫治療技術(shù)是過去十年腫瘤治療領(lǐng)域中具有實質(zhì)性的突破之一, 改變了癌癥醫(yī)療設(shè)備. 本工作討論了Wnt/β-連環(huán)蛋白與負性調(diào)節(jié)免疫檢查點介導(dǎo)的免疫逃逸的關(guān)系, 并介紹了Wnt/β-連環(huán)蛋白抑制劑與免疫檢查點聯(lián)合用藥的抗腫瘤研究進展, 為改善癌癥患者的治療提供了一種可能的方法. 上述研究表明, Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路活性與免疫檢查點的表達呈正相關(guān), 與T 細胞的浸潤呈負相關(guān), 從而造成對ICIs 的抵抗, 為以重塑免疫細胞浸潤和增強免疫治療效果為目標的針對Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路開發(fā)靶向藥物提供了堅實的論據(jù). 但也有研究表明[2], 阻斷Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路不僅抑制了膠質(zhì)母細胞瘤細胞的增殖和遷移, 而且促進了腫瘤組織中T 細胞的浸潤和效應(yīng)細胞因子IFN-γ 等的釋放, 從而提高PD-1 抑制劑的治療效果. 然而, 這一發(fā)現(xiàn)與其他研究結(jié)果不同的原因是, 在PD-L1 的表達提高后, 通過與T 細胞PD-1 的相互作用, T 細胞的浸潤提高, 但是浸潤的T 細胞并不被有效激活, Treg 細胞也同時被招募, T 細胞耗竭同時發(fā)生, 故即使是PD-L1 上調(diào)T 細胞浸潤, 也不能逆轉(zhuǎn)免疫抑制的TME. 因此, Zhang 等[2]關(guān)于PD-L1 表達與T 細胞浸潤的相關(guān)性研究需要進一步探討.由于β-連環(huán)蛋白在免疫細胞的增殖、分化和遷移等生物學(xué)過程中發(fā)揮了重要作用, 因此在通過抑制Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路來增強腫瘤免疫的過程中, 如何衡量Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路的抑制程度是未來Wnt/β-連環(huán)蛋白抑制劑與ICIs 聯(lián)合用藥過程中需要重點考慮的問題.