孫萬(wàn)林,王福財(cái),王淑芳,白天俊

(1.天?？h松山鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心, 甘肅 天祝 733299;2.天?？h動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心)

天祝藏族自治縣是甘肅省傳統(tǒng)的高寒牧區(qū)之一,轄區(qū)內(nèi)海拔2 040～4 874 m,年均氣溫-1～1.3℃,無(wú)絕對(duì)無(wú)霜期,年降水量265～630 mm,草原面積廣闊,牧區(qū)草場(chǎng)多位于海拔3 000 m以上,屬典型高山草甸草場(chǎng)。牛羊養(yǎng)殖以牧區(qū)草原放牧、農(nóng)區(qū)舍飼養(yǎng)殖為主要養(yǎng)殖方式,天祝草地型藏羊具有體質(zhì)高大健壯,耐高寒善攀爬,耐粗飼而飼養(yǎng)成本小,抗病能力和高寒牧區(qū)適應(yīng)能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),是天?？h旦馬、祁連、朵什、西大灘等牧區(qū)長(zhǎng)期以來(lái)飼養(yǎng)的主要綿羊品種。近年來(lái),天?？h充分發(fā)掘區(qū)域優(yōu)勢(shì)資源,積極推廣應(yīng)用藥物誘導(dǎo)藏羊同期發(fā)情、人工授精等先進(jìn)改良育種技術(shù),加速藏羊品種選育、改良進(jìn)程,大力發(fā)展羊產(chǎn)業(yè)。電刺激采精技術(shù)是模仿自然射精過(guò)程中的神經(jīng)和肌肉對(duì)各種由副交感神經(jīng)、交感神經(jīng)等神經(jīng)纖維介導(dǎo)的不同的化合物反應(yīng)的生理學(xué)反射,通過(guò)利用低電壓小脈沖交流電刺激公畜薦錐部低級(jí)神經(jīng)中樞而引起動(dòng)物性生殖器興奮并不自覺的產(chǎn)生射精來(lái)完成采精的一項(xiàng)種畜采精技術(shù)。高寒牧區(qū)藏系羊具有較大的野心,電刺激采集時(shí)對(duì)動(dòng)物具有一定的刺激性,為研究該技術(shù)能否在甘肅高寒牧區(qū)藏系羊繁殖中推廣應(yīng)用,是否對(duì)公羊精液品質(zhì)和采集量有影響,“天祝高寒牧區(qū)藏羊高效繁殖技術(shù)集成”項(xiàng)目課題組進(jìn)行了牧區(qū)藏羊種公羊電刺激采精試驗(yàn)。

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物選擇

本試驗(yàn)于2021年9月藏羊配種季,在天祝縣旦馬鄉(xiāng)某規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行,選用該場(chǎng)選育留用的歐拉型藏種公羊4只為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,體重和年齡分別是:1號(hào)羊3.5歲72 kg,2號(hào)羊3歲69 kg,3號(hào)羊4歲78 kg,4號(hào)羊3.5歲73 kg。4只藏羊種公羊均在該場(chǎng)生活2年以上,健康,平時(shí)采用自然交配方式進(jìn)行配種,對(duì)飼養(yǎng)人員具有良好的親和性。

1.2 試驗(yàn)場(chǎng)地與器械

1.2.1 采精室 該養(yǎng)殖場(chǎng)設(shè)置有專門的人工授精室和受配母羊活動(dòng)場(chǎng)地,人工授精室包括采集室10 m2和精液處理室8 m2,在采精室外單獨(dú)設(shè)置輸精場(chǎng)地。室內(nèi)光線充足,地面采用水泥硬化處理,堅(jiān)實(shí)平整,保持正常通風(fēng)。

1.2.2 采精器械與設(shè)備 倍特雙動(dòng)物電刺激采精器(北京倍特雙科技發(fā)展有限公司,型號(hào):BTS-QP),電子顯微鏡、電熱恒溫培養(yǎng)箱以及假陰道、集精杯、培養(yǎng)皿、玻璃棒、溫度計(jì)、酒精棉球、凡士林等采精設(shè)備,保持220V正常電源。

1.2.3 器材清洗和消毒 對(duì)配種室內(nèi)外環(huán)境用0.1%新潔爾滅溶液噴灑消毒。用具、器械用3%碳酸鈉溶液清洗后,用溫水沖洗備用。消毒時(shí),除不易放入或不能放入高壓消毒鍋(或蒸籠)的金屬器械、玻璃輸精器及膠質(zhì)的內(nèi)胎以外,都采用高壓蒸汽消毒法消毒,其他器械設(shè)備采用酒精擦拭消毒,使用前用生理鹽水沖洗。

1.3 實(shí)驗(yàn)種公羊管理

實(shí)驗(yàn)種公羊日常管理中采用放牧加補(bǔ)飼的方式進(jìn)行。每天青干草自由采食,補(bǔ)飼混合精料1.0 kg,雞蛋2枚和豆奶粉200 g?；旌暇辖M成是:玉米54%,豆類20%,餅粕7%,麩皮16%,食鹽2%,鈣粉1%。保證種羊自由飲用清潔飲水。

2 試驗(yàn)方法

2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

配種期種公羊每日每只采精2次,即:首日(標(biāo)注為d1)早上采用傳統(tǒng)的假陰道采精法采精,下午采用電刺激法采精,次日(標(biāo)注為d2)早上采用電刺激法采精,下午采用傳統(tǒng)的假陰道采精法采精,依次不同采精方法交叉采精,減少誤差,連續(xù)采精6 d。

2.2 假陰道采精法采精

按照參考文獻(xiàn)規(guī)定的采精方法采精,并檢查精液量、精子活力等情況,記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2.3 電刺激采精法采精

保定種畜、控制電刺激儀開關(guān)、采集精液各1人協(xié)作配合完成采精操作。

2.3.1 種羊采精前準(zhǔn)備 將公羊側(cè)臥或站立保定,剪掉陰莖基部周圍的長(zhǎng)毛,陰莖及包皮用清水沖洗后,再用生理鹽水沖洗,直至干凈,最后用滅菌脫脂棉擦干陰莖及包皮。用酒精棉球?qū)㈦姌O棒與肛門消毒,然后涂抹凡士林將電刺激棒輕輕插入肛門直腸內(nèi),來(lái)回前后左右抽動(dòng)旋轉(zhuǎn),以刺激棒全部進(jìn)入直腸為止(約15 cm)。兩塊金屬條方向朝正下方,置于緊貼直腸底壁靠近輸精管壺腹部。

2.3.2 種公羊保定 種羊保定人員左手固定頭部,右手緊握住待采藏羊種公羊背部大腿基部,保持臀部略高于頭姿勢(shì),兩腿自然分開。保定員要適度用力,既要避免種羊過(guò)度緊張,又要防止掙脫。

2.3.3 儀器操作 控制電刺激儀開關(guān)人員將電源線一端連接儀器面板插座,插頭端插入220V交流電電源插板上。將刺激電極棒連線兩插頭插入“輸出”處。在開啟“電源”開關(guān)前,應(yīng)先將右下角開關(guān)搬向中間“關(guān)閉”狀態(tài),“電源輸入”處于關(guān)閉狀態(tài)。電壓選擇開關(guān)向上旋轉(zhuǎn)選擇0～50V電壓輸出模式,將“輸出選擇”開關(guān)選擇至“點(diǎn)動(dòng)”狀態(tài),使儀器處于“手動(dòng)”操作,向上撥動(dòng)為工作,松開后自動(dòng)歸為“關(guān)閉”狀態(tài),人為控制刺激輸出時(shí)間,順時(shí)針旋轉(zhuǎn)“電壓調(diào)節(jié)”開關(guān)電壓或電流增大;反之,電壓或電流減小,可在電壓表上看到相應(yīng)輸出電壓值。

2.3.4 采精 采精人員右手中指與無(wú)名指指尖固定好已經(jīng)消毒好的集精杯(杯口向外),左固定插入公畜肛門內(nèi)的手持電極棒端。儀器控制人員打開采精儀電源開關(guān),接通電源刺激,刺激電壓由低到高,同時(shí)采精員持電極繞直腸壁做圓周運(yùn)動(dòng)。重復(fù)通電刺激3～5次,每次通電持續(xù)5 s,斷電5 s,并根據(jù)公畜反應(yīng),不斷升高電壓,至排精。公畜有排精表現(xiàn)時(shí),采精員右手迅速反轉(zhuǎn),立即將集精杯口移至陰莖口下方,接取精液。

2.3.5 規(guī)整 采精結(jié)束后,采精人員立即將精液送檢,儀器控制人員將采精儀各調(diào)節(jié)旋鈕逐檔回零,切斷電源,然后拔出電極棒,洗凈,消毒。

2.4 精液品質(zhì)檢查

2.4.1 外觀檢查 外觀觀察法檢查精液顏色、性狀、氣味。

2.4.2 精液密度判定標(biāo)準(zhǔn) 用顯微鏡檢查精子密度,公羊精子的密度分為“密”、“中”和“稀”三級(jí)。

密:精液中精子數(shù)目很多,充滿整個(gè)視野,精子與精子之間的空隙很小,不足一個(gè)精子的長(zhǎng)度,由于精子非常稠密,所以很難看出單個(gè)精子的活動(dòng)情形。

中:在視野中看到的精子也很多,但精子與精子之間有著明晰的空隙,彼此間的距離相當(dāng)于1～2個(gè)精子的長(zhǎng)度。

稀:在視野中只有少數(shù)精子,精子與精子之間的空隙很大,超過(guò)兩個(gè)精子的長(zhǎng)度。另外,在視野中如看不到精子,則以“0”表示

2.4.3 精子活力判定標(biāo)準(zhǔn) 以直線運(yùn)動(dòng)的精子數(shù)占總精子數(shù)的百分率作為精子活力評(píng)定指標(biāo)。一般采用十級(jí)評(píng)分制,呈直線運(yùn)動(dòng)的精子達(dá)100%,評(píng)為1.0級(jí),呈直線運(yùn)動(dòng)的精子達(dá)90%,評(píng)為0.9級(jí),呈直線運(yùn)動(dòng)的精子達(dá)80%,評(píng)定為0.8級(jí),以此類推。

3 結(jié)果

3.1 采精量數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果

4只種公羊每天采精早晚各1次,假陰道采精法采精量為0.78～0.93 mL,電刺激采精法平均采精量在0.80～0.96 mL,詳見表1。

表1 藏羊種公羊采精量統(tǒng)計(jì)表 mL

3.2 精液外觀檢查結(jié)果

4只藏羊種公羊兩種方法采集的精液外觀檢查,精液顏色呈乳白色或略顯黃白色,無(wú)氣味或略呈腥膻味、淡腥臭味,性狀呈現(xiàn)上下漩渦狀翻滾云霧狀。

3.3 精子活力檢查結(jié)果

兩種方法采集的藏羊種公羊平均精子活力均在0.80以上,詳見表2。

表2 藏羊種公羊精子活力統(tǒng)計(jì)表

3.4 精子密度檢查結(jié)果

兩種方法采集的藏羊種公羊平均精液密度均“中”以上,平均密度達(dá)到“密”級(jí)標(biāo)準(zhǔn),詳見表3。

表3 藏羊種公羊精液密度統(tǒng)計(jì)表

4 討論

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,電刺激采集技術(shù)在國(guó)外動(dòng)物人工采精中使用廣泛,我國(guó)畜牧生產(chǎn)中電刺激采精技術(shù)應(yīng)用也越來(lái)越廣泛,尤其在野生動(dòng)物或人工馴養(yǎng)的大熊貓、猴、烏蘇里貂、野生及雜交盤羊等動(dòng)物人工采精中常采用電刺激采精法采集精液。張建濱等人用電刺激采集技術(shù)完成對(duì)熊的精液采集,孔慶松在狐貍?cè)斯な诰夹g(shù)研究中采用電刺激法采精,孫廣生、洪振銀等人分別進(jìn)行了梅花鹿、小靈貓的電刺激采精研究,尚未見甘肅高寒牧區(qū)藏羊電刺激采精研究的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。余忠祥在青海省祁連縣進(jìn)行了青海省高寒牧區(qū)藏羊公羊電刺激采精試驗(yàn)研究,應(yīng)用電刺激采精儀(型號(hào):EJ6CCGS,澳大利亞產(chǎn)),未對(duì)公羊麻醉和調(diào)教訓(xùn)練的情況下進(jìn)行電刺激采精,參與試驗(yàn)的9只青年藏種公羊,平均采精量、密度、活力分別為0.6 mL、“中等”以上、0.7。楊俊等人對(duì)山東煙臺(tái)本地種山羊采用電刺激采精研究表明,用電刺激采精法采精對(duì)山東煙臺(tái)山羊品種精液量和精子活力影響較小,精子活力良好,都在80%左右,這與本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致,在天祝牧區(qū)藏羊種公羊電刺激采精平均精子活力均在0.80以上,平均精液密度均“中”以上,4只藏羊種公羊采集的精液外觀檢查,精液顏色呈乳白色或略顯黃白色,無(wú)氣味或略呈腥膻味、淡腥臭味,性狀呈現(xiàn)上下漩渦狀翻滾呈云霧狀,精液品質(zhì)符合人工授精精液品質(zhì)要求。本次在天祝牧區(qū)藏系種羊電刺激采精法所得精液量均在0.80～0.96 mL之間,符合藏系羊正常精液量,但楊俊等人在山羊電刺激采精時(shí)平均采精量相對(duì)較少,這就需要進(jìn)一步開展電刺激采精對(duì)采精數(shù)量影響的相關(guān)試驗(yàn)研究,確定電刺激采精對(duì)精液量是否有影響。

藏羊電刺激采精技術(shù)比較成熟,對(duì)種公羊刺激影響不大,采精儀器價(jià)格廣大規(guī)模養(yǎng)殖戶易于接受,另外,采精儀器攜帶方便,操作方法簡(jiǎn)單易于掌握,采集的精液活力、平均密度等品質(zhì)符合人工授精標(biāo)準(zhǔn),可應(yīng)用于甘肅高寒牧區(qū)藏系羊繁殖生產(chǎn)實(shí)踐。在天祝牧區(qū)藏系羊繁殖中,電刺激采精的推廣應(yīng)用可以有效解決牧區(qū)藏系羊種公羊配種控制或調(diào)教訓(xùn)練的困難和藏系羊選育種應(yīng)種公羊管理不到位產(chǎn)生的系譜混亂不清、血統(tǒng)不純不明,甚至出現(xiàn)近交退化等問(wèn)題,提高牧區(qū)藏羊繁育水平和生產(chǎn)性能。

加強(qiáng)種公羊管理,控制采精頻率,有助于種公羊的合理利用和保證精液品質(zhì)穩(wěn)定。應(yīng)選擇優(yōu)質(zhì)的天然或人工草場(chǎng)放牧,補(bǔ)飼日糧應(yīng)富含蛋白質(zhì)、維生素和礦物質(zhì),品質(zhì)優(yōu)良、易消化、體積較小和適口性好等。在管理上,可采取單獨(dú)組群飼養(yǎng),并保證有足夠的運(yùn)動(dòng)量。實(shí)踐證明,種公羊最好的飼養(yǎng)方式是放牧加補(bǔ)飼。在羊群配種高峰季節(jié),健康的種公羊可采精2次/d,每天每只公羊除提供充足的青干草外,補(bǔ)充胡蘿卜1 kg,雞蛋2個(gè),精料0.5～1 kg,每天運(yùn)動(dòng)保持在早晚2h以上,如無(wú)特殊需要,一般不得提高采精頻率。