邱厚兵 王春燕 楊清明

彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤中極為常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,好發(fā)于女性,遺傳、免疫、感染等因素對(duì)DLBCL的發(fā)生起著不可忽視的作用[1,2]。DLBCL腫瘤細(xì)胞核較大,是正常B淋巴細(xì)胞的5倍,具有增長(zhǎng)迅速快、侵襲性強(qiáng)、任何器官均可涉及等特點(diǎn),雖然其治療方案在不斷改善,但仍有部分DLBCL患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,因此尋找與DLBCL有關(guān)的生物標(biāo)志物,對(duì)患者預(yù)后評(píng)估及有效治療具有重要意義[3-5]。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)是真核細(xì)胞基因組編碼的轉(zhuǎn)錄本,雖不參與編碼蛋白質(zhì),但可在表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后等不同水平調(diào)控基因表達(dá)[6,7]。多項(xiàng)研究表明,lncRNAs的異常表達(dá)與DLBCL等惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和侵襲密切相關(guān),lncRNA人去泛素化酶含有卵巢腫瘤結(jié)構(gòu)域的6B反義RNA 1(OTUD6B-AS1)作為一種lncRNA,在多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用[8,9],例如Wang等[10]研究結(jié)果表明,透明細(xì)胞腎細(xì)胞癌患者腫瘤組織中l(wèi)ncRNA OTUD6B-AS1表達(dá)下調(diào),lncRNA OTUD6B-AS1通過(guò)抑制Wnt/β-catenin通路來(lái)抑制癌細(xì)胞增殖,且該研究還表明,lncRNA OTUD6B-AS1低表達(dá)患者預(yù)后不良,lncRNA OTUD6B-AS1具有抗癌基因的功能,但目前關(guān)于lncRNA OTUD6B-AS1在DLBCL中的表達(dá)及發(fā)揮的作用研究較少,因此,本研究通過(guò)對(duì)lncRNA OTUD6B-AS1在DLBCL中的表達(dá)及臨床意義分析,為患者預(yù)后評(píng)估提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年2月至2017年2月在本院就診的110例DLBCL患者作為研究對(duì)象,其中男47例,女63例;年齡44～57歲,平均年齡(50.80±6.10)歲。另選擇111例淋巴結(jié)反應(yīng)性增生(reactive hyperplasia of lymph node,RLH)患者,其中男48例,女63例;年齡42～58歲,平均年齡(50.00±7.21)歲。取手術(shù)切除的DLBCL組織作為研究組以及取RLH患者的淋巴組織為對(duì)照組。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)病理學(xué)診斷為DLBCL;②首次患DLBCL;③所有DLBCL患者均未進(jìn)行任何免疫治療、放化治療或其他輔助治療;④患者知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn):①有腫瘤疾病史;②長(zhǎng)期服用激素藥物治療者;③患腎、肺、心臟等其他重要器官疾病;④臨床資料不全。

1.3 方法

1.3.1 qRT-PCR檢測(cè)組織lncRNA OTUD6B-AS1的表達(dá)水平:Trizol試劑(美國(guó)Invitrogen公司)提取樣本的總RNA,之后采用SuperScript RT Kit試劑盒(日本TAKARA公司)將所得RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,以其為模板,使用SYBR Green PCR masterMix試劑盒(日本TAKARA公司)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)對(duì)lncRNA OTUD6B-AS1進(jìn)行擴(kuò)增,lncRNA OTUD6B-AS1的qRT-PCR反應(yīng)條件為95℃,10 min;95℃,15 s;55℃,30 s,30次循環(huán);lncRNA OTUD6B-AS1及內(nèi)參GAPDH的上下游引物序列(由上海生工生物工程有限公司合成),采用2-ΔΔCT法分析lncRNA OTUD6B-AS1的表達(dá)水平。PCR基因擴(kuò)增儀購(gòu)自美國(guó)BIO-RAD公司。見(jiàn)表1。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3.2 隨訪:研究人員以電話、規(guī)律復(fù)診等方式對(duì)DLBCL患者出院后進(jìn)行隨訪,終點(diǎn)事件為DLBCL患者死亡或5年隨訪時(shí)間結(jié)束,術(shù)后第1年每3個(gè)月隨訪1次,第2年每6個(gè)月隨訪1次,之后第3～5年每年隨訪1次。

2 結(jié)果

2.1 2組lncRNA OTUD6B-AS1表達(dá)水平比較 與對(duì)照組比較,研究組DLBCL組織中l(wèi)ncRNA OTUD6B-AS1水平明顯降低(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 2組lncRNA OTUD6B-AS1表達(dá)水平比較

2.2 DLBCL組織中l(wèi)ncRNA OTUD6B-AS1與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 根據(jù)DLBCL組織中l(wèi)ncRNA OTUD6B-AS1表達(dá)水平平均數(shù)分為高表達(dá)組54例,低表達(dá)組56例,lncRNA OTUD6B-AS1表達(dá)與DLBCL患者性別、年齡、腫瘤大小、免疫分型、化療敏感性、原發(fā)部位、血清乳酸脫氫酶無(wú)關(guān)(P>0.05),在美國(guó)東部腫瘤協(xié)作組評(píng)分(Eastern Cooperative Oncology Group,ECOG評(píng)分)(>2分)、霍奇金淋巴瘤HL分期(Ann Arbor分期)(Ⅲ、Ⅳ期)、國(guó)際預(yù)后指數(shù)(international prognostic index,IPI)評(píng)分(≥3分)的DLBCL患者組織中l(wèi)ncRNA OTUD6B-AS1表達(dá)水平均低于ECOG評(píng)分(≤2分)、Ann Arbor分期(Ⅰ、Ⅱ期)、IPI評(píng)分(<3分)的DLBCL患者(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 DLBCL組織中l(wèi)ncRNA OTUD6B-AS1表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 例

2.3 COX回歸分析影響DLBCL患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素 單因素COX回歸分析表明,ECOG評(píng)分、Ann Arbor分期、IPI評(píng)分、lncRNA OTUD6B-AS1均是影響DLBCL患者預(yù)后的有關(guān)因素(P<0.05);多因素COX分析表明,lncRNA OTUD6B-AS1低表達(dá)是影響DLBCL患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 COX回歸分析影響DLBCL患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素

2.4 lncRNA OTUD6B-AS1表達(dá)對(duì)DLBCL患者預(yù)后的影響 對(duì)DLBCL患者進(jìn)行5年隨訪,lncRNA OTUD6B-AS1低表達(dá)組生存率23.21%(13/56)低于高表達(dá)組生存率61.11%(33/54)(χ2=16.227,P<0.05)。見(jiàn)圖1。

圖1 lncRNA OTUD6B-AS1表達(dá)與DLBCL患者預(yù)后的關(guān)系

3 討論

DLBCL是臨床上較為常見(jiàn)的具有侵襲性的免疫系統(tǒng)惡性腫瘤疾病,是非霍奇金淋巴瘤中最常見(jiàn)的類型,在非霍奇金淋巴瘤中約占30%～40%[11],有較高發(fā)病率、死亡率,且進(jìn)展迅速、易全身擴(kuò)散,DLBCL患者發(fā)病年齡一般偏大,體質(zhì)較弱,近年來(lái),DLBCL發(fā)病率呈上升趨勢(shì),盡管隨著新藥的不斷開(kāi)發(fā)和治療方案的不斷成熟。關(guān)于DLBCL的治療取得了很大進(jìn)展,醫(yī)生可根據(jù)患者血液病理學(xué)檢測(cè)和B細(xì)胞免疫表型確認(rèn)治療方案,能夠提高患者的生存率,但仍有患者復(fù)發(fā),預(yù)后較差,雖然IPI、ECOG評(píng)分等是評(píng)估癌癥患者預(yù)后的指標(biāo),但研究發(fā)現(xiàn)相同IPI分值的DLBCL患者預(yù)后情況大不相同,因此,尋找與DLBCL有關(guān)的新型腫瘤標(biāo)志物,對(duì)改善患者預(yù)后具有重要意義[12,13]。

lncRNAs是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一類RNA,在多種惡性腫瘤疾病的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中發(fā)揮重要作用,最近越來(lái)越多研究表明,lncRNA在DLBCL的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用[14,15]。吳艷珺等[16]總結(jié)了lncRNAs與DLBCL的關(guān)系,提到lncRNAEN-TPD1-AS1、lncRNA ACS-AS1、lncRNA H3BP5-AS1等17個(gè)lncRNA在DLBCL的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要的作用。lncRNA OTUD6B-AS1作為一種lncRNA,研究表明lncRNA OTUD6B-AS1在乳腺癌[17],結(jié)直腸癌[18],膀胱癌[19]等多種癌癥的發(fā)生中發(fā)揮重要的作用,如Ma等[17]從癌癥基因組圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)中得到與乳腺癌有關(guān)的lncRNA,共鑒定出lncRNA OTUD6B-AS1等937個(gè)免疫相關(guān)lncRNA。Wang等[18]研究結(jié)果表明,lncRNA OTUD6B-AS1過(guò)表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、侵襲、遷移等具有抑制作用。Wang等[19]研究結(jié)果表明,lncRNA OTUD6B-AS1通過(guò)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激顯著加劇三氧化二砷介導(dǎo)的氧化損傷,從而參與膀胱癌的發(fā)生。Wang等[20]研究結(jié)果表明,甲狀腺癌患者癌組織中l(wèi)ncRNA OTUD6B-AS1表達(dá)下調(diào),lncRNA OTUD6B-AS1表達(dá)變化與甲狀腺癌的腫瘤大小、臨床分期和淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān),lncRNA OTUD6B-AS1過(guò)表達(dá)明顯降低甲狀腺癌細(xì)胞的活力、遷移和侵襲。本研究結(jié)果表明,研究組lncRNA OTUD6B-AS1表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組,提示lncRNA OTUD6B-AS1可能具有抑制DLBCL發(fā)生的作用;在ECOG評(píng)分(>2分)、Ann Arbor分期(Ⅲ、IV期)、IPI評(píng)分(≥3分)的DLBCL患者組織中l(wèi)ncRNA OTUD6B-AS1表達(dá)水平均低于ECOG評(píng)分(≤2分)、Ann Arbor分期(Ⅰ、Ⅱ期)、IPI評(píng)分(<3分)的DLBCL患者,進(jìn)一步說(shuō)明lncRNA OTUD6B-AS1與DLBCL發(fā)生有關(guān);Kaplan-Meier結(jié)果顯示lncRNA OTUD6B-AS1低表達(dá)者生存率低于高表達(dá)者,提示lncRNA OTUD6B-AS1低表達(dá)患者預(yù)后不良;多因素COX分析表明,lncRNA OTUD6B-AS1低表達(dá)是影響DLBCL患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素,提示lncRNA OTUD6B-AS1可作為評(píng)估DLBCL患者預(yù)后情況的輔助指標(biāo)。

綜上所述,lncRNA OTUD6B-AS1與DLBCL的發(fā)生及預(yù)后有關(guān),檢測(cè)lncRNA OTUD6B-AS1水平對(duì)DLBCL的發(fā)生及預(yù)后評(píng)估具有重要意義。