徐薇薇, 易宗艷, 彭登發(fā)

恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院 1.兒內(nèi)科,2.外科,湖北恩施 445000

癲癇為臨床常見神經(jīng)系統(tǒng)疾病,由于兒童神經(jīng)系統(tǒng)尚未發(fā)育成熟,因此癲癇在兒童中較為多發(fā)[1-2],其治療多以藥物干預(yù)為主,但因其反復(fù)發(fā)作導(dǎo)致整體療效并不理想[3]?？R西平是治療癲癇常用藥物,能夠?qū)εd奮性神經(jīng)遞質(zhì)的釋放進(jìn)行阻斷,降低對神經(jīng)系統(tǒng)的損害,縮短癲癇的發(fā)作持續(xù)時間,但其單獨(dú)使用療效有限[4]。缺乏維生素B6的兒童易患癲癇,維生素B6對特發(fā)性嬰兒痙攣,尤其是癲癇和結(jié)節(jié)性硬化癥療效顯著[5-6]。水通道蛋白-4(aquaporin-4,AQP4)被認(rèn)為與中樞神經(jīng)系統(tǒng)癲癇、腦水腫、腦卒中等密切相關(guān)。膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)為膠質(zhì)細(xì)胞所特有的結(jié)構(gòu)蛋白,具有營養(yǎng)神經(jīng)、維持膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整等作用。核氨基丁酸B受體亞單位1(nuclear aminobutyric acid B receptor subunit 1,GABABR1)基因可能為癲癇的一種易感基因。因此,本文采用維生素B6聯(lián)合卡馬西平對癲癇患兒進(jìn)行治療,觀察其治療效果及對患兒AQP4、GFAP、GABABR1水平的影響,為臨床提供參考。

1 資料和方法

1.1 研究對象

選取本院2019年2月—2020年7月治療的癲癇患兒144例,隨機(jī)均分為卡馬西平組和聯(lián)合組。卡馬西平組男44例,女性28例,年齡(10.2±2.8)歲;病程(1.5±0.8)年,發(fā)作頻率(4.5±1.1)次/月,其中原發(fā)性癲癇48例,繼發(fā)性癲癇24例;強(qiáng)直性發(fā)作21例,復(fù)雜部分性發(fā)作31例,陣攣性發(fā)作20例。聯(lián)合組男43例,女29例,年齡(10.5±3.2)歲;病程(1.3±0.7)年,發(fā)作頻率(4.7±1.2)次/月,其中原發(fā)性癲癇45例,繼發(fā)性癲癇27例;強(qiáng)直性發(fā)作23例,復(fù)雜部分性發(fā)作28例,陣攣性發(fā)作21例。兩組患兒一般資料比較差異無顯著性(P>0.05)。本研究獲得本院倫理委員會批準(zhǔn),所有患兒或家屬均知情同意。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合國際抗癲癇聯(lián)盟對小兒癲癇相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[7],且經(jīng)過腦電圖及臨床表現(xiàn)明確診斷為癲癇;②經(jīng)頭顱CT檢查明確無腦內(nèi)血管畸形、占位性病變。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并其他全身免疫系統(tǒng)疾病或感染性疾病;②一般資料不完整;③腫瘤;④嚴(yán)重心、肝、腎等重要臟器損傷;⑤具有精神性疾病遺傳史或個人史;⑥具有本研究藥物禁忌證。

1.2 治療方法

兩組均進(jìn)行常規(guī)食物干預(yù),確保研究無干擾因素?？R西平組口服卡馬西平(上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè),國藥準(zhǔn)字H31021366),15 mg/kg,1次/天,連續(xù)6個月。聯(lián)合組在卡馬西平組基礎(chǔ)上口服維生素B6片(辰欣藥業(yè)股份有限公司,國藥準(zhǔn)字H3702185),0.5～1.0片/天,根據(jù)病情調(diào)整,連續(xù)3周后停藥3周,再繼續(xù)給藥3周,共治療6個月。

1.3 療效評價

對兩組療效進(jìn)行評價,顯效為經(jīng)腦電圖檢測顯示結(jié)果正常,癲癇癥狀完全消失;有效為癲癇發(fā)作得到基本緩解,發(fā)作次數(shù)減少75%以上;無效為癲癇發(fā)作未出現(xiàn)明顯變化與改善,發(fā)作次數(shù)減少不足25%?？傆行轱@效加有效。觀察治療期間兩組患兒癲癇發(fā)作頻率、發(fā)作持續(xù)時間、不良反應(yīng)情況(頭暈頭痛、低鈉血癥、嗜睡疲勞、共濟(jì)失調(diào))。

1.4 qRT-PCR檢測GABABR1

治療前后空腹抽取患者靜脈血3 mL,3 000 r/min離心10 min后保存待測。提取細(xì)胞總RNA,逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA,以β-actin為內(nèi)參基因,采用2-ΔΔCt法計(jì)算GABABR1表達(dá),PCR引物設(shè)計(jì)以Primer Premier 6.0軟件進(jìn)行,β-actin上游引物5′-AGAGCTACGAGCTGCCTGAC-3′,下游引物5′-AGCACTGTGTTGGCGTACAG-3′;GABABR1上游引物5′-AACAGTAACACAAACCCATCC-3′,下游引物5′-GCATGTTTGTAGAAGGTGCC-3′。

1.5 酶聯(lián)免疫法檢測TNF-α、IL-2及IFN-γ

碳酸鹽緩沖液稀釋后加入到反應(yīng)孔中,行抗原處理,冷藏后次日洗滌,拋干,將待測標(biāo)本放入每個孔中,同時放入陽性和陰性對照標(biāo)本,保存,將液體移除后,洗滌并拋干,于每孔內(nèi)加抗體,保存60 min,移除液體。洗滌后拋干,在每個孔中加低物液,放入鄰苯二胺,遮光,再次放入H2SO4終止反應(yīng)。酶標(biāo)儀A450值處檢測腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白細(xì)胞介素-2(interleukin-2,IL-2)及γ干擾素(interferon-γ,IFN-γ)水平[8]。

1.6 免疫組化法檢測HMGB1、AQP4及GFAP

以PBS為陰性對照,以CK19>10 μg/L為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn),細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色或棕褐色為CK19染色陽性信號。將組織蠟塊切塊,厚度4 μm,常規(guī)脫蠟、脫水,進(jìn)行抗原修復(fù),滴加細(xì)胞間黏附分子-1一抗,4 ℃置放12 h,2次PBS清洗,滴加聚合酶輔助劑,37 ℃水浴20 min;2次PBS清洗,滴加IgG多聚體。37 ℃水浴30 min,檢測HMGB1、AQP4及GFAP水平。

1.7 言語智力、操作智力的評估

應(yīng)用中國版韋氏兒童智力表對患兒智力情況進(jìn)行測量[9],分別為言語測試與操作測試,其中言語測試主要包含常識、理解、背數(shù)等,操作主要包括積木、拼圖、排列等,結(jié)果以年齡進(jìn)行效正,得出言語智力及操作智力。分?jǐn)?shù)越高,改善效果越好。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 兩組發(fā)作頻率、發(fā)作持續(xù)時間及GABABR1的比較

與卡馬西平組比較,聯(lián)合組發(fā)作頻率、發(fā)作持續(xù)時間降低,GABABR1水平升高(P<0.05;表1)。

表1 兩組癲癇患兒發(fā)作頻率、發(fā)作持續(xù)時間及GABABR1水平的比較(n=72)

2.2 兩組言語智力、操作智力的比較

治療前兩組患兒言語智力、操作智力比較差異無顯著性(P>0.05);治療后與卡馬西平組比較,聯(lián)合組言語智力、操作智力均較高(P<0.05;圖1)。

圖1 兩組癲癇患兒言語智力、操作智力的比較a為P<0.05,與卡馬西平組治療后比較。

2.3 兩組TNF-α、IL-2、IFN-γ、HMGB1、AQP4及GFAP的比較

與同組治療前比較,兩組患兒TNF-α、IL-2、IFN-γ、HMGB1、AQP4及GFAP水平均降低(P<0.05);且聯(lián)合組上述指標(biāo)水平降低更顯著(P<0.05;表2)。

表2 兩組癲癇患兒TNF-α、IL-2、IFN-γ、HMGB1、AQP4及GFAP的比較

2.4 兩組治療總有效率和不良情況的比較

與卡馬西平組比較,聯(lián)合組治療總有效率較高(P<0.05;表3)?？R西平組和聯(lián)合組頭暈頭痛、低鈉血癥、嗜睡疲勞、共濟(jì)失調(diào)分別為4、3、3、2例和1、0、2、1例,聯(lián)合組不良反應(yīng)總發(fā)生率低于卡馬西平組(5.56%比16.67%,P<0.05)。

表3 兩組癲癇患兒治療總有效率的比較(n=72) 例(%)

3 討 論

癲癇是兒科常見疾病,尋求其更加安全且有效的方案對治療小兒癲癇具有重要的意義?？R西平是臨床常見的治療癲癇藥物,可降低癲癇對神經(jīng)細(xì)胞的影響以及對神經(jīng)系統(tǒng)的損害[10]。維生素B6能夠提高神經(jīng)興奮閾值,從而降低癲癇發(fā)作次數(shù)、縮短癲癇持續(xù)時間,提升癲癇治療效果[11]。

GABA是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中較為重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì),在丘腦、基底神經(jīng)、海馬以及小腦等部位廣泛分布[12]。維生素B6水平較低可導(dǎo)致GABA水平低下,從而增加癲癇發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[13]。本文研究結(jié)果說明,維生素B6聯(lián)合卡馬西平對癲癇患兒進(jìn)行治療,能夠顯著改善患兒癥狀,降低神經(jīng)元抑制所導(dǎo)致的影響。

兒童時期為腦部發(fā)育關(guān)鍵時期,癲癇反復(fù)發(fā)作能夠影響患兒言語及認(rèn)知發(fā)展。相關(guān)研究顯示,未經(jīng)藥物干預(yù)的癲癇患兒,在青年時期就會表現(xiàn)出智力及語言表達(dá)能力減退[14]。本文研究結(jié)果說明,維生素B6聯(lián)合卡馬西平對癲癇患兒進(jìn)行治療,能夠提升患兒認(rèn)知能力,改善患兒行為意識。

TNF-α、IL-2及IFN-γ水平能反映癲癇患兒的炎癥反應(yīng)情況。相比正常人群,癲癇患者炎癥因子水平異常,癲癇的發(fā)展與體內(nèi)炎癥因子水平呈正相關(guān)[15]。在神經(jīng)元受損后TNF-α、IL-2及IFN-γ釋放,進(jìn)一步導(dǎo)致癲癇病情加重。TNF-α為代表性炎癥因子,其水平增加能夠促進(jìn)其他炎癥因子如IL-2及IFN-γ的釋放。本文研究結(jié)果顯示,維生素B6聯(lián)合卡馬西平對癲癇患兒進(jìn)行治療,患兒TNF-α、IL-2及IFN-γ水平均較低,說明二者聯(lián)合能夠改善癲癇患兒炎癥反應(yīng)。

研究顯示,AQP4在腦梗塞、腦腫瘤及視神經(jīng)脊髓炎等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用[16]。HMGB1能夠調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞分化及細(xì)胞遷移,當(dāng)腦細(xì)胞出現(xiàn)損傷時HMGB1釋放,進(jìn)一步加重神經(jīng)組織的損傷[17]。GFAP為星形膠質(zhì)細(xì)胞特有的中間纖維蛋白,能夠?qū)︹涬x子空間產(chǎn)生緩沖作用,并參與軸信號跨突傳遞,對血腦屏障的形成進(jìn)行誘導(dǎo),同時對神經(jīng)損傷起到修復(fù)作用,當(dāng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生損傷時,星形膠質(zhì)細(xì)胞大量增殖,GFAP含量也隨之增加[18]。本文研究結(jié)果說明,維生素B6聯(lián)合卡馬西平對癲癇患兒進(jìn)行治療,能夠改善患兒病情,降低神經(jīng)系統(tǒng)損傷。

綜上所述,應(yīng)用維生素B6聯(lián)合卡馬西平對癲癇患兒進(jìn)行治療,能夠顯著改善患兒癥狀,降低神經(jīng)元抑制功能出現(xiàn)的影響,提升患兒認(rèn)知能力,改善患兒行為意識與病情,降低炎癥反應(yīng)與神經(jīng)系統(tǒng)損傷。