孫瑞卿 王霞 李晉棟 秦曙

摘 要： 【目的】研究聯(lián)苯肼酯及其代謝物在蘋果殘留試驗(yàn)樣品中冷凍條件下的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性、模擬運(yùn)輸過程中的穩(wěn)定性及樣品提取液的穩(wěn)定性，探討儲(chǔ)藏時(shí)間和儲(chǔ)藏溫度對(duì)樣品殘留量的影響，以期為蘋果中聯(lián)苯肼酯及其代謝物的準(zhǔn)確定量分析提供理論依據(jù)?！痉椒ā客ㄟ^分析儲(chǔ)藏時(shí)間、儲(chǔ)藏溫度和經(jīng)溶劑提取后儲(chǔ)藏過程中聯(lián)苯肼脂殘留量的變化，選擇適宜的儲(chǔ)藏時(shí)間、儲(chǔ)藏溫度和提取液儲(chǔ)存時(shí)間，防止因儲(chǔ)藏方式不當(dāng)導(dǎo)致農(nóng)藥降解而影響檢測(cè)結(jié)果的正確性?！窘Y(jié)果】?jī)?chǔ)藏時(shí)間、儲(chǔ)藏溫度均會(huì)對(duì)聯(lián)苯肼酯及其代謝物在蘋果中的殘留量產(chǎn)生影響。根據(jù)JMPR 2006年報(bào)告，-24～-20 ℃冷凍條件下聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯在蘋果中的殘留量在224 d內(nèi)是穩(wěn)定的，在模擬運(yùn)輸過程中1～5℃的儲(chǔ)藏條件下 24 h 之內(nèi)是穩(wěn)定的，樣品提取液在-24～-20 ℃的儲(chǔ)藏條件下儲(chǔ)藏48 h是穩(wěn)定的?！窘Y(jié)論】蘋果聯(lián)苯肼酯農(nóng)藥殘留試驗(yàn)樣品從采集到檢測(cè)的儲(chǔ)藏時(shí)間最長(zhǎng)不能超過224 d，所有樣品運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室時(shí)溫度需控制在5℃以下，樣品提取液須在48 h之內(nèi)完成檢測(cè)，可確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

關(guān)鍵詞： 聯(lián)苯肼酯；代謝物；殘留；儲(chǔ)藏穩(wěn)定性

文章編號(hào)：2096-8108（2023）03-0052-04 ?中圖分類號(hào)：TQ450.26；X56 ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Study on Storage Stability of Bifenazate and Its Metabolites in Apple

SUN ?Ruiqing，WANG ?Xia，LI ?Jindong，QIN ?Shu *

（Shanxi Center for Testing of Functional Agro-Products， Shanxi Agricultural University， Laboratory for Risk Assessment of ?Quality and Safety of Agro-Products （Taiyuan）， Taiyuan 030031， China）

Abstract： 【Objective】By studying the storage stability of bifenazate and its metabolites in apple residue test samples under freezing conditions， the stability during simulated transportation and the stability of sample extract， the effects of storage time and storage temperature on sample residue were discussed， in order to provide theoretical basis for the accurate and quantitative analysis of bifenazate and its metabolites in apples.【Methods】By analyzing the change of storage time， storage temperature and residual amount during storage after solvent extraction， the appropriate storage time， storage temperature and storage time of extraction solution are selected to prevent the pesticide degradation caused by improper storage method from affecting the correctness of detection results.【Results】Storage time and storage temperature will affect the residue of bifenazate and its metabolites in apples. According to JMPRs 2006 report， the residues of bifenazate and bifenazate-diazene in apples under the freezing conditions of - 24 ℃～- 20 ℃ are stable within 224 days， stable within 24 hours under the storage conditions of 1～5 ℃ during the simulated transportation process， and the sample extract is stable under the storage conditions of - 24～- 20 ℃ for 48 hours.【Conclusion】The storage time of the test sample of apple diphenylhydrazide pesticide residue from collection to detection should not exceed 224 days. The temperature of all samples should be controlled below 5 ℃ when they are transported to the laboratory， and the sample extraction solution should be tested within 48 hours to ensure the accuracy and reliability of the test results.

Keywords： bifenazate; metabolites; residues; storage stability

農(nóng)藥殘留試驗(yàn)開展過程中，因外地試驗(yàn)樣品寄送過程耗時(shí)長(zhǎng)，樣品無法保證在完全冷凍狀態(tài)下運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室，因?qū)嶒?yàn)室人力、資源限制無法及時(shí)處理或檢測(cè)試驗(yàn)樣品 ?［1-2］ 的情況也偶有發(fā)生，有研究證實(shí)農(nóng)藥本身性質(zhì) ?［3］ 、環(huán)境溫度 ?［4］ 、儲(chǔ)存時(shí)間、基質(zhì)差異 ?［5］ 等因素均可能對(duì)樣品基質(zhì)中待測(cè)農(nóng)藥的穩(wěn)定性產(chǎn)生影響，從而不能真實(shí)、客觀、準(zhǔn)確的反映待測(cè)農(nóng)藥的含量 ?［6-7］ 。因此，研究農(nóng)藥在儲(chǔ)藏、運(yùn)輸、檢測(cè)過程中的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性 ?［8］ 顯得尤為重要。

聯(lián)苯肼酯是美國(guó)科聚亞公司研制的產(chǎn)品，于2008年在我國(guó)獲得登記，主要用于防治蘋果和葡萄上的紅蜘蛛和二斑葉螨，也用于防治觀賞植物上的二斑葉螨。聯(lián)苯肼酯是一種新型選擇性葉面噴霧用殺螨劑 ?［9］ ，其作用機(jī)理為對(duì)螨類的線粒體電子傳遞鏈復(fù)合體III抑制劑的獨(dú)特作用，其對(duì)螨的各個(gè)生活階段有效， 具有殺卵活性和對(duì)成螨的擊倒活性（48～72 h），且持效期長(zhǎng)，持效期14 d左右，推薦使用劑量范圍內(nèi)對(duì)作物安全，對(duì)寄生蜂、捕食螨、草蛉低風(fēng)險(xiǎn) ?［10］ 。農(nóng)藥殘留聯(lián)席會(huì)議 （JMPR） 2006年的殘留試驗(yàn)報(bào)告顯示，聯(lián)苯肼酯風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估定義為聯(lián)苯肼酯及聯(lián)苯肼酯-二氮烯之和，以聯(lián)苯肼酯表示 ?［11］ 。

為了明確聯(lián)苯肼酯及其代謝物在蘋果基質(zhì)中的穩(wěn)定性，本研究通過建立高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（UPLC-MS/MS）分析測(cè)定蘋果中聯(lián)苯肼酯及其代謝物，探討了聯(lián)苯肼酯及其代謝物在蘋果殘留試驗(yàn)樣品中冷凍條件下的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性、模擬運(yùn)輸過程中的穩(wěn)定性及樣品提取液的穩(wěn)定性，以期為蘋果中聯(lián)苯肼酯及其代謝物的殘留檢測(cè)分析及準(zhǔn)確定量分析提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

試驗(yàn)樣品均采自試驗(yàn)基地。標(biāo)準(zhǔn)品聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯二氮烯生產(chǎn)廠家為Dr. Ehrenstorfer GmbH，甲酸（LC-MS，>99.0%）、乙酸（HPLC，>99.7%）和乙腈（LC-MS，>99.9%）均購自賽默飛世爾有限公司，乙腈（HPLC，<99.5%）購自天地有限公司，甲醇（LC-MS，>99.9%）購自默克股份有限公司，凈化管購自島津技邇有限公司，乙酸銨（色譜純，>99.0%）和抗壞血酸（A.R.，≥99.7%）購自天津光復(fù)有限公司，氯化鈉（A.R.，≥99.5%）購自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器設(shè)備

UPLC-MS/MS（美國(guó)沃特世有限公司），超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），電子天平（美國(guó)奧豪斯上海有限公司），離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf有限公司），刀式研磨儀（德國(guó)Retsch有限公司），渦旋混合儀（萊普特儀器有限公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品制備

稱取13份10 g蘋果空白樣品于離心管中，取 4份 添加聯(lián)苯肼酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，另取4份添加聯(lián)苯肼酯-二氮烯標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加濃度均為0.1 mg/kg，混勻后作為模擬運(yùn)輸過程穩(wěn)定性試驗(yàn)和樣品提取液穩(wěn)定性試驗(yàn)樣品，其余樣品作空白樣品，于≤-18 ℃冰箱中冷凍保存。

1.3.2 取樣分析

模擬運(yùn)輸過程穩(wěn)定性試驗(yàn)：在檢測(cè)的前一天，各取2份聯(lián)苯肼酯、2份聯(lián)苯肼酯-二氮烯的樣品，放置于冷藏冰箱（1～5 ℃）儲(chǔ)藏24 h后，與冷凍的各2份樣品一起進(jìn)行提取檢測(cè)。冷藏樣品作為模擬運(yùn)輸過程中的樣品，通過對(duì)比冷藏樣品相對(duì)于冷凍樣品的降解率模擬分析樣品在運(yùn)輸過程中的穩(wěn)定性。

樣品提取液穩(wěn)定性試驗(yàn)：取1份聯(lián)苯肼酯、1份聯(lián)苯肼酯-二氮烯的添加樣品進(jìn)行提取，提取液分為4份于進(jìn)樣小瓶中，2份當(dāng)天檢測(cè)，另外2份置于≤-18 ℃冷凍冰箱中保存，48 h后取出檢測(cè)，分析測(cè)定提取液儲(chǔ)藏期間的穩(wěn)定性。

1.3.3 樣品處理方法

稱取粉碎的蘋果樣品10 g于離心管中，加入 10 mL 乙腈，渦旋提取10 min后加入5.0 g氯化鈉，繼續(xù)渦旋5 min，5 000 r/min離心3 min，取上清液加入盛有150 mg無水硫酸鎂和25 mg C18的凈化管中，2 500 r/min渦旋3 min，5 000 r/min離心2 min， 上清液過膜后進(jìn)UPLC-MS/MS分析聯(lián)苯肼酯。另取1 mL上清液加入1 mL0.5%抗壞血酸水溶液，超聲15 min，過膜后進(jìn)UPLC-MS/MS分析聯(lián)苯肼酯及聯(lián)苯肼酯-二氮烯之和（以聯(lián)苯肼酯計(jì)）。

2 結(jié)果與分析

2.1 儲(chǔ)藏穩(wěn)定性結(jié)果

經(jīng)查詢，JMPR于2006年對(duì)聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性進(jìn)行了評(píng)估，評(píng)估結(jié)果見表1。評(píng)估結(jié)果顯示，于蘋果空白樣品中分別添加0.1 mg ·kg ?-1 聯(lián)苯肼脂和聯(lián)苯肼脂-二氮烯標(biāo)準(zhǔn)溶液，0 d時(shí)剩余殘留量分別為0.090 mg ·kg ?-1 和0.076 mg ·kg ?-1 ，第224天時(shí)聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼 酯- 二氮烯在蘋果中的殘留量在冷凍條件（-24～ -20 ℃ ）下仍是穩(wěn)定的。因此，聯(lián)苯肼酯在蘋果上的殘留試驗(yàn)樣品從采集到檢測(cè)的最長(zhǎng)儲(chǔ)藏時(shí)間為 224 d ，若沒有超過有效儲(chǔ)藏期，儲(chǔ)藏期間不會(huì)對(duì)樣品的殘留量產(chǎn)生影響。

2.2 模擬運(yùn)輸過程中儲(chǔ)藏穩(wěn)定性結(jié)果

聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯在蘋果中模擬運(yùn)輸過程儲(chǔ)藏穩(wěn)定性數(shù)據(jù)結(jié)果見表2。結(jié)果表明，在 1～ 5 ℃下儲(chǔ)藏24 h，蘋果中聯(lián)苯肼酯的降解率為0，聯(lián)苯肼酯-二氮烯的降解率為12.0%，均小于30%，說明此條件下殘留量是穩(wěn)定的。

2.3 樣品提取液穩(wěn)定性結(jié)果

聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯在蘋果中樣品提取液穩(wěn)定性數(shù)據(jù)結(jié)果見表3。結(jié)果顯示，蘋果樣品的提取液置于-24～-20 ℃冰箱中冷凍保存48 h，聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯的降解率分別為8.3%和8.0%，說明此條件下殘留量是穩(wěn) 定的。

3 結(jié)論

本研究表明，儲(chǔ)藏時(shí)間、儲(chǔ)藏溫度均會(huì)對(duì)聯(lián)苯肼酯及其代謝物在蘋果中的殘留量產(chǎn)生影響。根據(jù)JMPR 2006年報(bào)告，-24～-20 ℃冷凍條件下聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯在蘋果中的殘留量在 224 d 內(nèi)是穩(wěn)定的，在模擬運(yùn)輸過程中1～5 ℃的儲(chǔ)藏條件下24 h之內(nèi)是穩(wěn)定的，樣品提取液在-24～-20 ℃的儲(chǔ)藏條件下儲(chǔ)藏48 h是穩(wěn)定的。因此，蘋果聯(lián)苯肼酯農(nóng)藥殘留試驗(yàn)樣品從采集到檢測(cè)的儲(chǔ)藏時(shí)間最長(zhǎng)不能超過224 d，所有樣品運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室時(shí)溫度需控制在5 ℃以下，樣品提取液須在48 h之內(nèi)完成檢測(cè)，可確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

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參考文獻(xiàn)

［1］ ?黃 寶勇， 肖志勇， 歐陽喜輝. 貯存溫度條件對(duì)蔬菜基質(zhì)中農(nóng)藥殘留穩(wěn)定性的影響［J］. 農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全， 2013（2）： 48-51.

［2］ ?陳 增龍， 劉子琪， 廖先駿. 乙螨唑在9種水果蔬菜樣品基質(zhì)中的殘留儲(chǔ)藏穩(wěn)定性［J］. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)， 2021， 23（3）： 561-568.

［3］ ?魏 梅， 孫大利， 張耀海， 等. 3種高檢出農(nóng)藥在柑桔檢測(cè)樣品中的穩(wěn)定性研究［J］. 中國(guó)南方果樹， 2016（3）： 21-26.

［4］ ?ATHANASOPOULOS ?P E， PAPPAS C， KYRIAKIDIS N V， et al. Degradation of methamidophos on soultanina grapes on the vines and during refrigerated storage ［J］. Food Chemistry， 2005， 91（2）： 235-240.

［5］ ?MASTOVSK ?K， LEHOTAY S J. Evaluation of common organic solvents for gas chromatographic analysis and stability of multiclass pesticide residues［J］. J Chromatogr A， 2004， 1040（2）： 259-272.

［6］ ?卞 艷麗， 劉豐茂. 農(nóng)藥殘留儲(chǔ)存穩(wěn)定性的研究進(jìn)展［J］. 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)， 2016， 7（8）： 3013-3019.

［7］ ?郭 靖立， 劉子琪， 張明浩， 等. 玉米中莠滅凈的殘留特征、儲(chǔ)藏穩(wěn)定性及膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估［J/OL］. 中國(guó)食品學(xué)報(bào)， https：//kns.cnki.net/kcms/detail//11.4528.TS.20230203.1027.003.html.

［8］ ?中 華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部. 農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 植物源性農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)準(zhǔn)則：NY/T 3094-2017［S］. 北京： 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2017.

［9］ ?何 建紅， 胡選祥， 趙帥鋒. 聯(lián)苯肼酯在草莓上的殘留降解及其安全使用［J］. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2014， 26（5）： 1268-1272.

［10］ ?付 巖， 王全勝， 張亮. 聯(lián)苯肼酯及其代謝物在草莓中的殘留消解及儲(chǔ)藏穩(wěn)定性［J］. 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)， 2021，12（11）： 4552-4558.

［11］ ?FAO. ?List of Pesticides evaluated by JMPR and JMPS-P ［DB/OL］. ［2023-02-27］. https：//www.fao.org/agriculture/crops/thematic-sitemap/theme/pests/lpe/lpe-p/en/.