李勝，溫琦

1 山西中醫(yī)藥大學(xué)研究生院 山西太原 030024

2 山西省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 山西太原 030013

人體自身免疫系統(tǒng)疾病有很多種，其中類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)（Rheumatoid Arthritis，RA）是大家所常見(jiàn)的，這也是屬于多系統(tǒng)炎癥性的。主要是累及周?chē)P(guān)節(jié)的、慢性、對(duì)稱(chēng)性、進(jìn)行性多關(guān)節(jié)炎是RA的主要特征，通俗表現(xiàn)為受累關(guān)節(jié)疼痛、腫脹、功能障礙，同時(shí)這種病變會(huì)呈現(xiàn)出長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)和反復(fù)發(fā)作的過(guò)程[1]。若RA早期沒(méi)得得到及時(shí)恰當(dāng)?shù)闹委?，最終會(huì)出現(xiàn)關(guān)節(jié)畸形和功能喪失等嚴(yán)重后果。目前，全世界約有 1% ～2%的人深受RA的困擾，嚴(yán)重影響人們的健康和生活質(zhì)量，但其致病機(jī)制尚未完全明晰[2]。在治療RA的藥物上醫(yī)生有許多選擇，主要將其可劃分為四大類(lèi)，有抗風(fēng)濕藥（DMARDs），甾體類(lèi)抗炎藥（NSAIDs）、糖皮質(zhì)激素以及生物制劑。短時(shí)間內(nèi)控制病情，改善癥狀是這幾類(lèi)藥物的優(yōu)點(diǎn)。但它們也存在著副作用較多、費(fèi)用較高、單一作用受限等缺點(diǎn)[3]，因此，尋找具有低毒、效好、價(jià)廉以及能夠長(zhǎng)期服用等優(yōu)點(diǎn)的 RA 藥物，日漸成為研究需要。中醫(yī)藥很早之前就有關(guān)于類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）的相關(guān)記載，“痹”字這一出現(xiàn)最早來(lái)自于《黃帝內(nèi)經(jīng)》，當(dāng)時(shí)對(duì)于“痹”的理解是——“風(fēng)寒濕三氣雜至，合而為痹”，就是以后大家所稱(chēng)“歷節(jié)、歷節(jié)風(fēng)”等也可指類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，因此對(duì)于類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療，中醫(yī)可謂是經(jīng)驗(yàn)豐富。絡(luò)石藤（Caulis）是在我國(guó)中藥一直占有一席之地，在古代時(shí)就已經(jīng)被人們稱(chēng)之為上品，并且早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中留下自己寶貴的地位身影。絡(luò)石藤的有關(guān)知識(shí)可以從2015年版 《中國(guó)藥典》[4]系統(tǒng)得知，絡(luò)石藤是一種干燥帶葉藤莖，其分類(lèi)為夾竹桃科植物，它性平和，味道微苦且溫，是非常重要的抗風(fēng)濕清熱藥。功能表現(xiàn)主要分為兩個(gè)方面，一是涼血消腫，還有就是祛風(fēng)通絡(luò)，在醫(yī)治常見(jiàn)的各種熱痹風(fēng)濕或者腰膝酸痛、癰腫等病癥都可以發(fā)揮良好的功效。在現(xiàn)代臨床中也不乏看到絡(luò)石藤的影子，尤其是用于治療具有風(fēng)濕熱證的類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)炎等疾病。經(jīng)過(guò)一系列的藥理學(xué)研究，學(xué)者發(fā)現(xiàn)了絡(luò)石藤作為祛風(fēng)濕類(lèi)中藥的作用機(jī)理，除了最簡(jiǎn)單的可以抗菌消除炎癥減輕疼痛，最深層次的是可以有效控制身體內(nèi)細(xì)胞凋亡，以及調(diào)控全身的免疫-抑制異常[5]。本文旨在通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法和分析手段，預(yù)測(cè)絡(luò)石藤對(duì)疾病作用的可能機(jī)制；以及探索其物質(zhì)基礎(chǔ)，以求對(duì)進(jìn)一步研究絡(luò)石藤治療 RA提供理論依據(jù)。

材料與方法

1 絡(luò)石藤活性成分的篩選

中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)（TCMSP，https：//old.tcmsp-e.com/index.php）是我們本次需要用到的數(shù)據(jù)庫(kù)，是我們做中草藥系統(tǒng)計(jì)算的獨(dú)特藥理平臺(tái)，亦是國(guó)內(nèi)相對(duì)完備的中藥成分靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)，運(yùn)用TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)檢索出絡(luò)石藤的藥物成分，對(duì)藥物成分以需要的篩選標(biāo)準(zhǔn)去進(jìn)行選擇，如化合物口服生物利用度要大于一定的數(shù)值（OB≥30%），類(lèi)藥性指數(shù)要大于標(biāo)準(zhǔn)（DL≥0.18），最終得到9個(gè)所需要的活性成分，下載并保存這些活性成分相應(yīng)的靶蛋白數(shù)據(jù)。

2 藥物靶點(diǎn)轉(zhuǎn)換

將通過(guò)篩選得到的活性成分的靶蛋白經(jīng)過(guò)Uniprot（https：//www.uniprot.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)的基因名稱(chēng)。

3 疾?。≧A）相關(guān)靶點(diǎn)基因的獲取

將“Rheumatoid Arthritis”作為關(guān)鍵詞，輸入DISGENT（https：//www.disgenet.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)中，獲取類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）的相關(guān)靶點(diǎn)以及其在Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)中對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)基因名。

4 藥物有效成分和疾?。≧A）共同靶點(diǎn)的篩選

將篩選標(biāo)化后的絡(luò)石藤活性成分靶基因以及類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）相關(guān)靶基因同時(shí)輸入Venny 2.1（https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/）在 線(xiàn)作 圖軟件，構(gòu)建韋恩圖，得到二者的交集基因。

5 藥物（絡(luò)石藤）-化合物-疾?。≧A）-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

為使絡(luò)石藤與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）潛在靶點(diǎn)間的相互作用進(jìn)一步明確，將通過(guò)韋恩圖得到的交集基因，運(yùn)用 Cytoscape3.9.1（https：//cytoscape.org/）構(gòu)建“絡(luò)石藤-化合物-靶點(diǎn)-類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎”的網(wǎng)絡(luò)圖，并進(jìn)行可視化分析。

6 靶蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

將絡(luò)石藤與RA的共同靶點(diǎn)基因上傳至String（https：//string-db.org/）軟件，獲取 PPI網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)。從所得到的數(shù)據(jù)中取前排名20的degree值的關(guān)鍵靶點(diǎn)基因，通過(guò)Cytoscape 3.9.1軟件繪制相互作用網(wǎng)路，并對(duì)其進(jìn)行分析。

7 基因本體論（GO）及京都基因與基因百科全書(shū)（KEGG）通路富集分析

將交集基因（絡(luò)石藤-RA）輸入DAVID（https：//david.ncifcrf.gov）數(shù)據(jù)庫(kù)，結(jié)合利用GO功能分析和KEGG通路富集進(jìn)行分析研究，把閾值設(shè)置為P＜0.05，并且按照涉及的靶點(diǎn)的數(shù)量多少?gòu)母叩降团判颍骱Y選出前10個(gè)條目，包括GO富集分析分子功能（MF）、細(xì)胞組成（CC）及生物過(guò)程（BP）的，KEGG取前20個(gè)信號(hào)通路，進(jìn)行圖表分析，以探求絡(luò)石藤-抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）的生物學(xué)過(guò)程及信號(hào)通路。

結(jié) 果

1 絡(luò)石藤有效活性成分的篩選

以O(shè)B≥30%，DL≥0.18作為篩選條件，通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)共獲得藥物（絡(luò)石藤）9個(gè)有效活性成分（表 1）。

2 藥物活性成分作用基因和RA基因的交集

將通過(guò)篩選后獲得的絡(luò)石藤（Caulis）的活性成分的靶蛋白，再經(jīng)過(guò)Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)自有的轉(zhuǎn)換操作，變成相對(duì)應(yīng)的基因名稱(chēng)。然后通過(guò)DISGENT數(shù)據(jù)庫(kù)，獲取類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）的相關(guān)靶點(diǎn)以及其在Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)中對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)基因名，共2722個(gè)。利用Venny 2.1在線(xiàn)作圖軟件將絡(luò)石藤對(duì)應(yīng)有效活性成分（Caulis Trachelos ）與之相對(duì)應(yīng)的109個(gè)靶點(diǎn)基因與RA對(duì)應(yīng)的2722個(gè)靶點(diǎn)基因進(jìn)行交集。獲得57個(gè)共有靶點(diǎn)基因。（見(jiàn)圖1）。

圖1 藥物靶點(diǎn)蛋白基因-疾病基因的韋恩圖

3 構(gòu)建藥物-有效成分-靶點(diǎn)基因-疾病的網(wǎng)絡(luò)

結(jié)合應(yīng)用Cytoscape 3.9.1 軟件，將所得到的57個(gè)共同靶點(diǎn)基因數(shù)據(jù)處理后，繪制構(gòu)建絡(luò)石藤-有效成分-靶點(diǎn)基因-疾?。≧A）的網(wǎng)絡(luò)圖。其中紫色矩形代表靶點(diǎn)基因，綠色橢圓代表疾病，藍(lán)色菱形代表mol id（各mol id代表活性成分見(jiàn)表1），橙色三角形代表藥物。（見(jiàn)圖2）。篩選出度值較大的節(jié)點(diǎn)進(jìn)行研究分析，發(fā)現(xiàn)57個(gè)基因中排名前5位的化合物依次按數(shù)量分為木犀草素（36個(gè)靶點(diǎn)蛋白）、豆甾醇（12個(gè)靶點(diǎn)蛋白）、老刺木精（9個(gè)靶點(diǎn)蛋白）、依波加因（9個(gè)靶點(diǎn)蛋白）、去甲漢黃芩素（6個(gè)靶點(diǎn)蛋白）。該網(wǎng)絡(luò)表明絡(luò)石藤可能通過(guò)以上活性成分，進(jìn)行靶點(diǎn)基因蛋白反應(yīng)，從而發(fā)揮治療RA的作用。

表1 符合篩選標(biāo)準(zhǔn) OB 和 DL 的活性化合物表

圖2 絡(luò)石藤-有效成分-靶點(diǎn)基因-類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎網(wǎng)絡(luò)圖

4 靶點(diǎn)、關(guān)鍵基因PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

將韋恩圖獲得的絡(luò)石藤與RA的57個(gè)交集基因上傳至String軟件，獲取PPI網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)。將所得數(shù)據(jù)處理后，取前20個(gè)在degree值的關(guān)鍵靶點(diǎn)基因，利用Cytoscape 3.9.1軟件繪制成所需要的相互作用網(wǎng)絡(luò)圖（見(jiàn)圖3），在下方圖中可以清晰地看到，degree值越大，填充顏色越深（此圖包括20個(gè)節(jié)點(diǎn)和183條邊）?；蚺cdegree值的柱狀圖見(jiàn)圖4。其中degree值最高的為 AKT1，為 90；其次為 TP53，degree值為 84；TNF，degree值為80；IL6，degree值為76。表明絡(luò)石藤治療RA只要涉及這些蛋白基因，并且degree值越大的蛋白基因越有可能在治療過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。

圖3 基因與degree值柱狀圖

圖4 靶蛋白PPI網(wǎng)絡(luò)圖

5 GO生物功能分析

GO即是Gene Ontology的簡(jiǎn)稱(chēng)，其包括生物過(guò)程（BP）、細(xì)胞組成（CC）、分子功能（MF）。本研究討論是通過(guò)DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)為基礎(chǔ)，將閾值P設(shè)定為＜0.05，得到GO 功能富集分析顯示 394 個(gè)生物過(guò)程（BP）、41 個(gè)細(xì)胞組成（CC）、70 個(gè)分子功能（MF）；分別對(duì)BP、CC及MF的前10個(gè)條目進(jìn)行可視化分析，得到圖5。如圖可見(jiàn)，靶基因在CC中，主要富集條目涉及細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核、細(xì)胞間隙等；靶基因在BP中，主要富集條目涉及細(xì)胞增殖的正向調(diào)整控制、基因表達(dá)的正向調(diào)控，RNA、DNA的轉(zhuǎn)錄、凋亡過(guò)程的調(diào)控等；靶基因在MF中，主要富集條目涉及分子蛋白結(jié)合、DNA結(jié)合、細(xì)胞因子活性、酶及復(fù)合物結(jié)合等。

圖5 絡(luò)石藤對(duì)RA治療的GO分析（包括BP、CC、MF）柱狀圖

6 KEGG信號(hào)通路富集分析

通過(guò)DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)，并以P＜0.05為閾值，得出與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎密切相關(guān)的通路（取前20），利用微生信得到KEGG氣泡圖，并進(jìn)行可視化分析，見(jiàn)圖6。前20條通路顯示多為癌癥、感染、炎癥及免疫等相關(guān)通路。推測(cè)絡(luò)石藤主要通過(guò)調(diào)控上述關(guān)鍵基因，從而影響上述信號(hào)通路的作用，以達(dá)到治療醫(yī)治類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）的目的。

圖6 KEGG通路氣泡圖

討 論

作為一種常見(jiàn)性的疾病，RA也有自己的特殊性，它是具有一種全身性自身免疫性的疾病。 RA的外在病狀表現(xiàn)為手腕或者腳腕等對(duì)稱(chēng)性受累小關(guān)節(jié)，以一種長(zhǎng)期疼痛、腫脹伴隨著功能下降顯示出來(lái)，是一種侵蝕性關(guān)節(jié)炎[6]。多屬“痹證”辨治范疇。中醫(yī)學(xué)并無(wú)“類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎”病名，但有類(lèi)似“痹證”“尪痹”“歷節(jié)風(fēng)”等論述，由此可見(jiàn)中醫(yī)藥對(duì)于治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等類(lèi)似癥狀具有豐富的經(jīng)驗(yàn)。而網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)作為一個(gè)新興工具，近年來(lái)發(fā)展的十分迅速，其對(duì)于中藥有效活性成分的分析以及對(duì)疾病作用的預(yù)測(cè)具有十分重要的意義。

本次網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究從絡(luò)石藤-有效成分-靶點(diǎn)基因-疾病網(wǎng)絡(luò)圖中可以看出，對(duì)于類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）起治療作用的活性成分，絡(luò)石藤中主要以木犀草素、豆甾醇、依波加因以及老刺木精為主。這里面木犀草素（luteolin）的作用非常大，其化學(xué)全稱(chēng)為 3'，4'，5，7-四羥基黃酮。顧名思義它屬于黃酮類(lèi)化合物的一種，可以從木犀草的莖、葉、枝中經(jīng)過(guò)一系列物理化學(xué)操作中提取分離出來(lái)，名木犀草素[7]。木犀草素大都存在于多種藥材和常見(jiàn)的蔬果中，比如菊花和金銀花等其他，并且多以糖苷的形式存在[8-9]。在探索木犀草素的藥理活性研究中，不少研究學(xué)者也有不同的發(fā)現(xiàn)，除了已經(jīng)被熟知的抗炎和抗菌作用，木犀草素在不僅可以有抗氧化的功能，在抵抗腫瘤和病毒等方面也做出了巨大貢獻(xiàn)[10-13]。

木犀草素作為一種黃酮類(lèi)化合物，免疫細(xì)胞（其中主要是巨噬細(xì)胞）是其發(fā)揮抗炎活性的主要場(chǎng)所。對(duì)于黃酮類(lèi)化合物來(lái)說(shuō)，實(shí)現(xiàn)巨噬細(xì)胞炎性反應(yīng)的抑制活性可通過(guò)抑制核轉(zhuǎn)錄因子κB（nuclear factor κB，NF-κB）信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)[14]。同時(shí)一系列的研究表明抗炎、抗氧化及抗腫瘤等是豆甾醇的主要功能。Gabay等的研究發(fā)現(xiàn)，豆甾醇減少RA引起的軟骨退化，是通過(guò)控制減少多種炎癥介質(zhì)的出現(xiàn)，和基本的基質(zhì)降解[15]。其中一部分是通過(guò)阻礙IL-1B引導(dǎo)NF-kB通路來(lái)使其起到控制減少的作用。除此之外Chen等還通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)揭秘了在兔關(guān)節(jié)炎模型中豆甾醇可以有軟骨降解的用途，然后對(duì)進(jìn)行了詳細(xì)分析，包括膝關(guān)節(jié)的形態(tài)組織、基因形態(tài)和組織學(xué)等[16]。得出了最終結(jié)論：豆甾醇在一定程度上可以明顯抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的基因表達(dá)（MMPs），比如在軟骨關(guān)節(jié)炎（OA）中可以檢測(cè)得出，編碼基質(zhì)金屬蛋白酶的基因表達(dá)（MMPs）高于正常的基準(zhǔn)相，而且基質(zhì)金屬蛋白酶的組織抑制劑-1（TIMP-1）也是顯著減少的。這些結(jié)論向我們說(shuō)明：在治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）的研究中，豆甾醇可能會(huì)發(fā)揮一定的用處。根據(jù)本研究結(jié)果以及相關(guān)文獻(xiàn)[17]可知，絡(luò)石藤主要通過(guò)木脂素類(lèi)、甾體醇和黃酮類(lèi)這些相應(yīng)的化合物對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）產(chǎn)生作用。本探究中絡(luò)石藤與疾病RA共有57個(gè)交集靶點(diǎn)基因，主要參與對(duì)細(xì)胞分子的活性的影響，酶、分子蛋白及復(fù)合物的結(jié)合，調(diào)節(jié)DNA、RNA的轉(zhuǎn)錄，調(diào)控細(xì)胞的產(chǎn)生與增殖，調(diào)控細(xì)胞的凋亡以及基因的表達(dá)等。根據(jù)PPI網(wǎng)絡(luò)圖及基因與degree柱狀圖中可以看出，絡(luò)石藤中對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）起治療作用的自由度最高的前四靶點(diǎn)基因?yàn)锳KT1、TP53、TNF以及IL6。一系列研究表明T、B淋巴細(xì)胞，細(xì)胞因子，細(xì)胞凋亡及蛋白酶等在類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）的發(fā)病過(guò)程中起著重非常重大的作用，其中越來(lái)越收到重視的是是炎性細(xì)胞因子在RA發(fā)病過(guò)程中的所產(chǎn)生的作用[18]。AKT1基因發(fā)揮著調(diào)控細(xì)胞增殖與生長(zhǎng)的作用。其主要通過(guò)參與包括調(diào)控細(xì)胞凋亡以及控制葡萄糖代謝在內(nèi)的細(xì)胞過(guò)程從而影響RA的病變進(jìn)程；而同樣TP53也是因?yàn)橛绊憴C(jī)體的免疫和炎性反應(yīng)來(lái)作用于RA，擁有基因翻譯功能的P53蛋白是在人體內(nèi)重要的調(diào)節(jié)因子，不僅可以調(diào)整控制細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)和增殖凋亡狀態(tài)，還能對(duì)細(xì)胞損傷進(jìn)行修復(fù)。還有一種關(guān)鍵的細(xì)胞因子——腫瘤壞死因子（TNF），不僅可以誘導(dǎo)包括細(xì)胞凋亡、炎癥，還可以影響免疫在內(nèi)的廣泛的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路。不少研究都發(fā)現(xiàn)表明，在 RA 患者的患病組織滑膜以及關(guān)節(jié)滑液中檢測(cè)到TNF表達(dá)有明顯數(shù)字上升，這些都可以引誘并滑膜中的各種細(xì)胞發(fā)生變化，如軟骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞，滑膜細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等，哪怕這些變化很細(xì)微，但也都會(huì)影響關(guān)節(jié)內(nèi)部微環(huán)境的狀態(tài)，最終呈現(xiàn)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）關(guān)節(jié)不同的破壞程度[19]。作為一種抑炎和抗炎因子的IL-6，在 RA 的發(fā)病過(guò)程中是不可忽視的一部分，細(xì)胞內(nèi)的蛋白激酶在這種因子不斷刺激T 細(xì)胞、破骨細(xì)胞和滑膜細(xì)胞的作用下，導(dǎo)致不同于日常的激活狀態(tài)，加上過(guò)度的信號(hào)傳導(dǎo)，相關(guān)基因因此被過(guò)量表達(dá)，達(dá)到影響疾?。≧A）結(jié)果[20]。

綜上，本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法與軟件技術(shù)，搜集到絡(luò)石藤的活性成分及相關(guān)的靶點(diǎn)基因，以及與獲得的RA的靶點(diǎn)基因相交集。通過(guò)對(duì)這些交集靶點(diǎn)基因進(jìn)行藥物-化合物-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)分析、GO富集以及KEGG富集分析，找出絡(luò)石藤治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）的關(guān)鍵靶點(diǎn)與通路。絡(luò)石藤可能調(diào)控癌癥相關(guān)通路、細(xì)胞凋亡通路、P53信號(hào)通路等通路，控制減少炎性反應(yīng)、調(diào)節(jié)身體的免疫功能以及調(diào)控細(xì)胞凋亡等相關(guān)作用來(lái)實(shí)現(xiàn)人們治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎這一病癥的目標(biāo)。最后，本方向研究尚且存在一定的局限性；因各平臺(tái)數(shù)據(jù)庫(kù)數(shù)據(jù)的完善更新程度不盡相同，相應(yīng)分析計(jì)算方法和軟件功能有所區(qū)別等，都會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)得出的結(jié)論造成不同的影響。所以這次分析研究得出的結(jié)果都是以理論和網(wǎng)絡(luò)收集數(shù)據(jù)所支撐，僅可作為相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究線(xiàn)索來(lái)源，還需要對(duì)其進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證來(lái)探究最根本的作用機(jī)理，以待對(duì)臨床應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。