高 陽,吉彤珍,楊冬梅

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院/北京婦幼保健院 檢驗科,北京100026)

真菌在自然界中廣泛分布,并且種類繁多、數(shù)量極大,其中絕大多數(shù)對人類有益,而引起人類和動物疾病的真菌僅150余種[1]。念珠菌是一種常見的條件致病菌,存在于人體體表及和外界相通的腔道中,當宿主免疫力低下時可引起多種原發(fā)或繼發(fā)感染,輕者僅累及表皮和黏膜,重者可造成深部器官的侵襲性感染或菌血癥[2]。近年來,由于抗生素的廣泛使用、內(nèi)分泌失調(diào)以及盲目使用陰道沖洗劑等因素,念珠菌的感染率呈現(xiàn)遞增趨勢[3]。首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院以婦產(chǎn)科病人為主,91%以上分離株來自生殖道。本研究通過對北京婦產(chǎn)醫(yī)院2019年1月至2021年12月分離出的616株真菌的分布和藥物敏感性進行分析,為臨床診療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 菌株來源

1.1.1試驗菌株 收集北京婦產(chǎn)醫(yī)院2019年1月至2021年12月臨床送檢標本(包括生殖道分泌物、咽拭子、血液等)培養(yǎng)分離出的病原菌616株,已剔除同一患者相同部位的重復(fù)菌株。接種標本時嚴格按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》要求進行操作。

1.1.2質(zhì)控菌株 大腸埃希菌 ATCC8739、光滑念珠菌ATCC MYA-2950 質(zhì)控菌株均購自國家菌毒種中心。

1.2 培養(yǎng)、鑒定及藥敏試驗

1.2.1培養(yǎng)基使用OXIOD產(chǎn)品,有哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)皿、3號麥康凱培養(yǎng)皿、萬古霉素巧克力培養(yǎng)皿。

1.2.2真菌鑒定首先通過識別菌落形態(tài)、革蘭氏染色進行初篩,將分離的菌株用梅里埃VITEK MS質(zhì)譜儀及ATB-Fungus3真菌藥敏試劑盒進行菌株鑒定和藥敏試驗。結(jié)果判讀嚴格遵照說明書,結(jié)果報告MIC值及敏感、中介和耐藥。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

實驗數(shù)據(jù)采用WHONET5.6及SPSS25軟件進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

2.1 病原菌分布

616例菌株中白色念珠菌檢出率最高75.16%(463/616),光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌的檢出率分別為15.26%(94/616)、3.41%(21/616)、2.11%(13/616),其他念珠菌占4.06%(25/616),包括熱帶念珠菌1.14%(7/616)、釀酒念珠菌0.97%(6/616)、高里念珠菌0.49%(3/616)、涎沫念珠菌0.16%(1/616)、葡萄牙念珠菌0.16%(1/616)等(表1)。

表1 念珠菌菌種分布構(gòu)成比(%)

2.2 念珠菌對抗菌藥物的總體敏感性

616株念珠菌對伊曲康唑敏感率最低(45.78%),其次為氟康唑(69.32%)、伏立康唑(73.05%)、5-氟胞嘧啶(95.29%)、對兩性霉素全部敏感(表2)。

表2 念珠菌對抗真菌藥物的敏感率(%)

2.3 主要念珠菌對抗真菌藥物的敏感性

白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌對兩性霉素敏感率都為100%,克柔念珠菌對氟康唑天然耐藥、白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌對氟康唑的敏感率分別為69.33%、74.47%、90.48%。白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌分別對5-氟胞嘧啶、伊曲康唑敏感率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.0001)(表3)。

表3 主要念珠菌對抗真菌藥物的敏感率(%)

3 討論

首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院分離出的真菌菌株標本91%以上來源于產(chǎn)科和婦科就診患者的生殖道分泌物標本,還有不足9%的分離菌株來源于全院送檢的咽分泌物和全血標本。外陰陰道念珠菌病是一種常見的婦科感染性疾病,其主要致病菌為白色念珠菌(85%～95%)[4-6],高于本研究中白色念珠菌的分離率,這與本院送檢標本還含有少量的非生殖道分泌物標本有關(guān)。真菌分離菌株中白色念珠菌最多(75.16%),其次是光滑念珠菌,與田洹、梁齊合、等[7-8]的報道一致,分離率第3、4位病原菌近平滑念珠菌和克柔念珠菌的分布與二者的報道有所不同,提示不同地區(qū)不同醫(yī)院分離的念珠菌分布存在差異,還與送檢標本的種類有關(guān)。由于正常人口腔中也可能存在念珠菌定植,一般不會引發(fā)臨床癥狀[9],在沒有相關(guān)臨床癥狀時應(yīng)考慮定植菌的污染。北京婦產(chǎn)醫(yī)院NICU新生兒通常免疫力低下,是念珠菌定植或感染的危險因素。

藥敏結(jié)果顯示北京婦產(chǎn)醫(yī)院分離出的念珠菌對兩性霉素B的藥物敏感率為100%,與秦曉林等[10]的研究一致,但此類藥物副作用較大,長期使用能導(dǎo)致肝腎損害,臨床上應(yīng)用較少。近平滑念珠菌對5種藥物敏感率最高(90.48%～100%)。白色念珠菌、光滑念珠菌和近平滑念珠菌對5-氟胞嘧啶的敏感率為96.54%～100%,但由于其毒副作用大,臨床應(yīng)用也受到限制。白色念珠菌和光滑念珠菌對伊曲康唑的敏感性不高,可能是由于它的不良反應(yīng)小,臨床使用廣泛,出現(xiàn)了耐藥菌株。唑類化合物通過抑制目標酶羊毛甾醇14-甾醇去甲基化酶,參與真菌細胞膜的一種重要成分即羊毛甾醇向麥角甾醇的轉(zhuǎn)化,并導(dǎo)致有毒產(chǎn)物14-甲基-3,6-二醇, 因此,麥角甾醇在真菌細胞膜中的含量減少,導(dǎo)致細胞膜結(jié)構(gòu)和功能的改變,最終抑制真菌的生長,唑類藥物在臨床上被廣泛地用于經(jīng)驗性治療和預(yù)防,可能是念珠菌感染菌種變遷的主要原因之一[11]。有研究發(fā)現(xiàn),白色念珠菌對氟康唑的耐藥問題日漸明顯[12-13],在本研究中氟康唑尚未出現(xiàn)嚴重耐藥,仍是臨床常用藥物之一。克柔念珠菌對氟康唑天然耐藥,臨床用藥應(yīng)避免使用此藥。臨床治療真菌感染時應(yīng)結(jié)合鑒定及藥敏試驗結(jié)果合理使用抗真菌藥物[14-15]。

綜上所述,不同地區(qū)不同醫(yī)院分離出的念珠菌的菌種分布不同,不同念珠菌對不同藥物的敏感性也有差異,做好真菌鑒定和藥敏試驗才能為合理選擇抗真菌藥物提供依據(jù),防止盲目治療和耐藥的產(chǎn)生。