張嘉懿 郭文偉 沈永明 娜 仁 崔小健 司 萍

（天津市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，天津 300134）

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）引起的傳染病，主要經(jīng)母嬰、血液和性接觸途徑傳播。兒童是HBV的易感人群，圍生期感染和兒童感染是我國慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）新增病例的主要來源[1]。乙型肝炎核心抗體（hepatitis B core antibody，HBcAb）是判定HBV既往感染的血清學(xué)指標(biāo)[2]。目前，化學(xué)發(fā)光微粒子免疫測定法（chemiluminescence microparticle immunoassay，CMIA）和電化學(xué)發(fā)光法（electrochemiluminescence immunoassay，ECLIA）作為乙型肝炎血清標(biāo)志物的常規(guī)檢測方法已廣泛應(yīng)用于臨床[3]，而光激化學(xué)發(fā)光法（light-initiated chemiluminescence assay，LiCA）是較新的檢測方法。在實(shí)際工作中，我們發(fā)現(xiàn)用LiCA篩查兒童HBcAb假陽性結(jié)果較多。初篩試劑通常敏感性較高，會有一定比例的假陽性結(jié)果，但傳染病項(xiàng)目出現(xiàn)假陽性結(jié)果可能會導(dǎo)致臨床誤判。在疾病流行率不同或免疫狀態(tài)不同的人群中，傳染病項(xiàng)目初篩結(jié)果陽性預(yù)測值>95%的臨界值往往不同[4]。本研究擬探討LiCA檢測兒童HBcAb的最佳臨界值，以針對不同S/CO值區(qū)間的檢測結(jié)果進(jìn)行確證試驗(yàn)。

1 材料和方法

1.1 研究對象

收集2019年1—3月天津市兒童醫(yī)院、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬國際和平婦幼保健院、常州市兒童醫(yī)院和上海市第一婦嬰保健院檢測后剩余的兒童靜脈血血清樣本448例，入組兒童中男313例、女135例，年齡9個(gè)月～15歲。

1.2 儀器與試劑

LiCA 500自動(dòng)光激化學(xué)發(fā)光檢測儀（嘉興凱實(shí)生物科技股份有限公司），試劑（LiCA）和校準(zhǔn)品購自博陽生物科技（上海）有限公司。ARCHITECT i2000全自動(dòng)免疫分析儀（美國雅培公司）及配套試劑（CMIA）、校準(zhǔn)品。cobas e602電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（瑞士羅氏公司）及配套試劑（ECLIA）、校準(zhǔn)品。3個(gè)檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果均按照試劑盒說明書進(jìn)行判定，陽性判定標(biāo)準(zhǔn)為：LiCA S/CO值≤1，CMIA S/CO值>1，ECLIA S/CO值≤1。

1.3 方法

同時(shí)采用LiCA和CMIA檢測所有樣本。LiCA和CMIA檢測結(jié)果均陽性判定為陽性，均陰性判定為陰性，陰性、陽性不一致則采用ECLIA復(fù)測。CMIA和ECLIA檢測結(jié)果均陽性判定為陽性，均陰性判定為陰性，陰性、陽性不一致則剔除。當(dāng)ECLIA與CMIA檢測結(jié)果一致時(shí)，以CMIA作為參考方法。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0軟件和GraphPad Prism 7軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和作圖。采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線評估LiCA檢測HBcAb的最佳臨界值、敏感性和特異性。采用Kappa一致性檢驗(yàn)評價(jià)LiCA采用最佳臨界值時(shí)HBcAb檢測結(jié)果與參考方法的一致性。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 LiCA檢測HBcAb結(jié)果及與參考方法的比較

448例樣本中，LiCA、CMIA均陽性的樣本有237例，均陰性的樣本有184例，陰性、陽性不一致的樣本有27例（LiCA單陽性23例、CMIA單陽性4例）。27例結(jié)果不一致樣本用ECLIA復(fù)測，其中24例檢測結(jié)果與CMIA結(jié)果一致，3例檢測結(jié)果不一致的樣本被剔除。

445例樣本中，LiCA陽性258例，其中假陽性21例，陽性預(yù)測值為91.86%；陰性187例，其中假陰性3例，陰性預(yù)測值98.40%。以S/CO值=1作為臨界值時(shí)，敏感性為98.75%，特異性為89.76%。LiCA和參考方法的陰、陽性例數(shù)以及LiCA的S/CO值分布見表1。

表1 不同S/CO值下LiCA和參考方法的陰性、陽性例數(shù) 例

2.2 LiCA不同臨界值的陽性預(yù)測值

計(jì)算LiCA檢測HBcAb不同臨界值（S/CO值）下的陽性預(yù)測值。當(dāng)S/CO值≤0.77時(shí)，LiCA檢測HBcAb的陽性預(yù)測值>95%。見表2。

表2 不同臨界值下LiCA 檢測HBcAb的陽性預(yù)測值

2.3 LiCA的分析性能

ROC曲線分析結(jié)果顯示，以參考方法為標(biāo)準(zhǔn)，LiCA檢測HBcAb的曲線下面積（95%可信區(qū)間）為0.994（0.990～0.998），最佳臨界值（S/CO值）為0.65，敏感性為95.42%，特異性為97.07%，Youden指數(shù)為0.924 9。見表3、圖1。

圖1 LiCA檢測HBcAb的ROC曲線

2.4 采用最佳臨界值時(shí)LiCA檢測HBcAb的結(jié)果及其與參考方法的一致性

當(dāng)采用最佳臨界值（S/CO值=0.65）判定結(jié)果時(shí)，LiCA與參考方法的一致性極好[Kappa值（95%可信區(qū)間）為0.923（0.887～0.959），P<0.01]。用S/CO值=0.65重新評估LiCA的檢測結(jié)果，共檢出陽性235例，其中假陽性6例，陽性預(yù)測值為97.45%；檢出陰性210例，其中假陰性11例，陰性預(yù)測值為94.76%。采用最佳臨界值判斷陰、陽性例數(shù)及S/CO值分布見表4。

表4 采用最佳臨界值重新判定后LiCA和參考方法的陰性、陽性例數(shù) 例

3 討論

乙型肝炎是全球性的公共衛(wèi)生問題，我國HBV感染者約有7 000萬例，兒童時(shí)期HBV感染更易發(fā)展為CHB，約有90%～95%的圍生期感染和20%～30%的兒童期感染會發(fā)展成CHB[1]。HBcAb是判斷HBV現(xiàn)癥感染或既往感染的血清學(xué)指標(biāo)，近年來在隱匿性HBV感染中被廣泛應(yīng)用[2]。

化學(xué)發(fā)光法具有靈敏度高、重復(fù)性好、自動(dòng)化程度高、通量大等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛用于臨床檢測。涂少華等[5]采用LiCA檢測了453例疑似HBV感染者乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物，結(jié)果顯示LiCA與CMIA有較高的符合率。然而，本研究結(jié)果顯示，LiCA檢測HBcAb的陽性檢出率較高，且大多陽性樣本經(jīng)補(bǔ)充試驗(yàn)證實(shí)為假陽性。本研究采用試劑盒聲明的S/CO值=1.00作為陰、陽性判斷的臨界值時(shí)，LiCA檢測HBcAb的假陽性率為8.14%，陽性預(yù)測值僅為91.86%。因此，有必要對LiCA檢測兒童血清HBcAb的性能進(jìn)行評估，以建立適用于兒童人群的該項(xiàng)目最佳臨界值。本研究ROC曲線分析結(jié)果顯示，LiCA 檢測兒童血清HBcAb的曲線下面積為0.994，說明LiCA在兒童人群中的檢測性能較為理想。通過計(jì)算最大Youden指數(shù)，得出LiCA檢測兒童血清HBcAb的最佳臨界值（S/CO值）為0.65，此時(shí)陽性預(yù)測值可達(dá)97.45%，即假陽性率僅為2.55%。對檢測結(jié)果落在最佳臨界值兩側(cè)的樣本，實(shí)驗(yàn)室可分別設(shè)立相應(yīng)的復(fù)檢規(guī)則[6]。篩查試驗(yàn)的首要目的是避免漏檢，因此對于S/CO值為0.65～1.00的樣本，即使存在一部分假陽性結(jié)果，也應(yīng)進(jìn)行確認(rèn)，避免漏掉真陽性樣本。結(jié)果確認(rèn)可以選擇做確證試驗(yàn)、對患者進(jìn)行隨訪檢測、采用其他試劑檢測等方法；必要時(shí)，幾種方法可以互相補(bǔ)充應(yīng)用[7]。

造成篩查試劑在特定人群中出現(xiàn)假陽性的原因很多，如在流行率較低的地區(qū)篩查丙型肝炎病毒抗體，即使試劑性能很好，也難以達(dá)到較高的陽性預(yù)測值；在篩查老年人群和孕產(chǎn)婦人群的梅毒抗體時(shí)，會出現(xiàn)假陽性率高于其他人群的情況[4]。LiCA篩查兒童HBcAb假陽性率偏高，原因可能為：1）與兒童HBcAb低流行率相關(guān)，隨著乙型肝炎疫苗接種率的提高和母嬰阻斷的推廣，近年來HBcAb陽性率在各年齡人群中均明顯下降，1～18歲人群的HBcAb陽性率已降至5.99%，LiCA檢測HBcAb陽性預(yù)測值偏低可能與兒童人群中的低流行率有關(guān)[2，8-9]；2）兒科患者感染性疾病較多，血清中的抗體，尤其是IgG類抗體的水平較高，可能會干擾LiCA的檢測，出現(xiàn)一部分弱陽性結(jié)果；3）由于LiCA檢測時(shí)無清洗步驟，可能較參考方法更易受樣本中干擾物質(zhì)的影響，本研究部分假陽性樣本加入抗生物素試劑中和后復(fù)測為陰性，提示生物素干擾可能是LiCA檢測產(chǎn)生假陽性的原因之一。

綜上所述，廠商建立檢測系統(tǒng)的臨界值時(shí)選取人群通常覆蓋范圍較廣，故試劑說明書聲明的臨界值不一定適用于特定人群。本研究建立的LiCA檢測兒童血清HBcAb的最佳臨界值可能更適用于兒童人群，可更準(zhǔn)確地反映兒童人群中HBcAb的真實(shí)狀態(tài)，也可為實(shí)驗(yàn)室設(shè)立更合理的復(fù)檢規(guī)則提供依據(jù)。