朱春陽，李河霖，任瑞冰，樸永革，李小娟，李 萌

（1. 吉林煙草工業(yè)有限責(zé)任公司，吉林長春 130000；2. 鄭州輕工業(yè)大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，河南鄭州 450001）

碰碰香（Plectranthus hadiensisvar. tomentosus(Benth.) Codd），又名一抹香、觸留香、絨毛香茶菜，為唇形科馬刺花屬灌木狀多年生草本植物，全株被有細密的白色絨毛，因觸碰后可散發(fā)出清新香甜的氣味而得名。碰碰香香味濃甜，接近蘋果味道，聞起來令人神清氣爽，碰碰香的莖葉可以用來泡茶或炮制酒；也可用于炒菜、烹飪、涼拌，具有提神醒腦、清熱解暑、驅(qū)避蚊蟲、消炎消腫和保養(yǎng)皮膚的功效[1]。近年來，國內(nèi)相關(guān)研究表明碰碰香具有抗菌[2-3]、吸收甲醛等生物活性。國外研究發(fā)現(xiàn)碰碰香地上部的甲醇提取物具有潛在的抗炎及抗病毒活性，通過DPPH 自由基法、一氧化氮自由基清除法等證實其甲醇提取物同樣具有抗氧化作用[4]。

不同樣品處理與提取方式不同，對分析鑒定出的碰碰香揮發(fā)性化合物種類影響很大。呂慧[3]采用氣體收集容器連接預(yù)濃縮儀再連接GC-MS，從碰碰香新鮮植株中檢測鑒定出26 種化合物；熊偉等人[5]對碰碰香鮮活植株采用頂空套袋與熱脫附系統(tǒng)-氣相色譜/質(zhì)譜（TDS-GC/MS） 聯(lián)用分析檢測到葉片揮發(fā)物有44 種；王丹[6]運用SPME-GC-MS 技術(shù)對碰碰香不同狀態(tài)下（靜置、碰觸、機械損傷） 最多鑒定出60 種揮發(fā)性成分；孔維維等人[7]運用SPME-GC-MS技術(shù)對碰碰香不同部位（根、莖、葉） 揮發(fā)性成分最多鑒定出了40 個主要組分。孟雪等人[2]用水蒸氣蒸餾法提取碰碰香揮發(fā)油共鑒定出20 種化合物；張旋等人[8]運用SPME-GC-MS 技術(shù)用不同處理對碰碰香不同部位最多鑒定出44 種揮發(fā)性成分。截至目前，碰碰香精油化合物分析鑒定出來的種類相對較少，相對含量差異大，對精油化合物分析鑒定不夠精細，這將影響到碰碰香資源的開發(fā)與利用。

同時蒸餾萃取法在國內(nèi)外食品、環(huán)境方面應(yīng)用非常廣泛，也常應(yīng)用于香精香料中揮發(fā)性、半揮發(fā)性組分分析，是一種提取、分離和富集試樣中揮發(fā)性、半揮發(fā)性成分較為有效的方法。該方法設(shè)備簡單，萃取溶劑量少，數(shù)據(jù)重復(fù)性好，結(jié)合前人研究成果，采取SDE 法提取新鮮碰碰香的精油，通過GC-MS 分析精油中化學(xué)成分，為碰碰香資源充分利用與深度開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

碰碰香，購自河南鄭州陳寨花卉市場，選取多盆健康植株作為供試樣品。

氯化鈉、二氯甲烷、乙醇、無水硫酸鈉，上?？曝S化學(xué)試劑有限公司提供。試驗所用試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 6890GC/5973MS 型氣質(zhì)聯(lián)用儀，美國Agilent 公司產(chǎn)品；同時蒸餾萃取裝置，鄭州科技玻璃儀器廠產(chǎn)品；KPGD5/20 型低溫冷卻液循環(huán)泵，鄭州凱鵬實驗儀器有限公司產(chǎn)品；PL203 型電子分析天平（感量：0.001 g），瑞士Mettler Toledo 公司產(chǎn)品。

1.3 碰碰香精油提取方法

1.3.1 樣品處理

取碰碰香鮮葉50 g，去梗除雜，放入干凈的研缽，加5 mL 無水乙醇，快速研磨后，快速移入同時蒸餾萃取裝置1 000 mL 圓底燒瓶中。

1.3.2 碰碰香精油的提取

在上述同時蒸餾萃取裝置的1 000 mL 圓底燒瓶中，再加入350 mL 蒸餾水，混合均勻；量取60 mL二氯甲烷，置于100 mL 濃縮瓶中，放入沸石，接在同時蒸餾萃取裝置的另一端，磁力攪拌，水浴加熱，溫度控制在60 ℃左右，進行同時蒸餾萃取，當(dāng)水蒸氣開始回流時計時。同時蒸餾萃取裝置的冷凝管用冷水機冷卻。濃縮萃取液至約2 mL，停止加熱。萃取時間約3 h。濃縮萃取液中加入無水硫酸鈉干燥，密閉過夜，過濾后將濾液移入色譜瓶供GC-MS 分析。濾液為淡綠色、澄清透明的油狀液體，為提取的碰碰香精油，具有濃郁的碰碰香特征香氣。

1.4 分析條件

1.4.1 色譜條件

色譜柱：HP-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；載氣為高純氮氣（99.999%）；色譜柱載氣流量1.0 mL/min；進樣口溫度250 ℃；進樣量1 μL；進樣方式為分流進樣，分流比為10∶1；升溫程序：40 ℃保持4 min，以3 ℃/min 升至200 ℃后保持3 min，以2 ℃/min 升至250 ℃后保持3 min，以5 ℃/min升至270 ℃后保持2 min。

1.4.2 質(zhì)譜條件

電子轟擊離子源為EI 源，電子能量70 eV；電子倍增器（EM） 電壓1 635 V；傳輸線溫度280 ℃；四極桿溫度150 ℃。離子源溫度230 ℃，掃描方式為全掃描，質(zhì)量掃描范圍30~550 amu，溶劑延遲8 min。

1.4.3 香味物質(zhì)含量的計算方法

由于碰碰香香味成分種類繁多，很難得到各種香味物質(zhì)的標準品。因此，主要通過NIST17 質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)合化合物匹配度對各種化合物定性分析，定量分析結(jié)果是依據(jù)總離子流色譜峰的峰面積歸一化法計算各組分相對百分含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 總精油成分分析

依照上述處理對碰碰香提取精油揮發(fā)性成分分析。

碰碰香精油的GC-MS 總離子流圖見圖1。

圖1 碰碰香精油的GC-MS 總離子流圖

根據(jù)MSD ChemStation 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，選擇NIST17 質(zhì)譜圖數(shù)據(jù)庫對各色譜峰對應(yīng)質(zhì)譜圖進行檢索，采用峰面積歸一化計算分析，共檢索出216 種化合物。除去雜質(zhì)峰、譜庫匹配度較低，含量較低的化合物后，共分析鑒定出86 種化合物，占總精油相對百分比91.34%。

碰碰香精油主要化合物成分明細見表1。

表1 碰碰香精油主要化合物成分明細

（續(xù)表1）

由表1 可知，碰碰香精油鑒定總化合物為86 種物質(zhì)，鑒定出的化合物主要有萜烯類、醇類、酮類、酯類、烯烴類、烷烴類等10 余類化合物。

碰碰香精油主要化合物種類數(shù)及相對百分含量見圖2。

圖2 碰碰香精油主要化合物種類數(shù)及相對百分含量

由圖2 可知，萜烯類化合物種類數(shù)最多，有43種，占總精油相對百分比為34.62%；酮類11 種，占總精油相對百分比為45.82%，酯類有9 種，占總精油相對百分比為4.98%；醇類有6 種，占總精油相對百分比為3.24%，烯烴類、烷烴類、醛類、酸類、酚類、醚類及其他類化合物種類較少，相對含量也較低，均不超過1%。

2.2 萜烯類化合物組成和香型特征

萜烯類化合物是碰碰香精油中分析鑒定出種類最多的化合物。

碰碰香精油中萜烯類化合物香型特征匯總見表2。

表2 碰碰香精油中萜烯類化合物香型特征匯總

結(jié)合已有文獻、化合物百科等網(wǎng)上查詢，已查詢到24 種萜烯類化合物有特征香氣，其中D -檸檬烯相對百分含量18.58%，這與2013 年孔維維等人[7]的研究結(jié)果較為接近，D -檸檬烯的香氣在碰碰香特征香型中表現(xiàn)直觀，確實是碰碰香植株中含量較高的致香成分。另外，由表2 可知，碰碰香中的(+)-4-蒈烯、順式-p- 薄荷-1(7),8- 二烯-2- 醇、反式-p-薄荷-2,8-二烯醇、α -蒎烯等相對百分含量也較高，單組分均超過1%，其余萜烯類化合物雖然相對百分比較低，但是各自獨有的香氣特征也豐富了碰碰香甜濃的蘋果香型特征。

2.3 酮類化合物分析

酮類化合物雖然種類沒有萜烯類和醇類的多，含量卻非常高，主要是因為酮類化合物包含了精油中含量相對最高的組分5α -雄甾烷-3,17-二酮，相對百分含量31.49%，現(xiàn)有碰碰香研究并未見到鑒定出高含量甾體酮，研究第一次發(fā)現(xiàn)，可能跟樣品前處理與SDE 的精油提取方法有關(guān)。此外，稠環(huán)酮的含量也比較高，順-2,4b,8,8-四甲基-反式-2,10a-全氫稠環(huán)-12- 酮和3,3,4,5,5,8- 六甲基-2,3,5,6- 四氫稠環(huán)-1,7- 二酮相對百分比分別為5.51%和4.29%。

3 結(jié)論

采用SDE 法提取碰碰香精油后，經(jīng)GC-MS 分析鑒定后化合物種類86 種，其中萜烯類化合物種類43種，占精油總成分34.62%，其中D -檸檬烯等特征成分含量高。應(yīng)用SDE 法首次在碰碰香中鑒定出大量天然甾體酮，相較于SPME-GC-MS 或者水蒸餾法，SDE 法是提取碰碰香精油更為有效、易操作、重復(fù)性好的一種方法。

碰碰香的常見用途目前還比較有限，人們對其的了解還只限于作為一種園藝盆栽植物，只限于觀賞、除甲醛、簡單烹飪食用及外敷，經(jīng)過研究的分析鑒定，碰碰香精油中的天然甾體酮和D -檸檬烯含量較高，且萜烯類化合物種類豐富，總相對百分含量高，有利于碰碰香在醫(yī)藥保健、香精香料、食品添加劑、食品風(fēng)味劑等方向的拓展開發(fā)。

碰碰香精油提取技術(shù)主要采用的是碰碰香鮮葉，下一步研究可探索不同樣品前處理（新鮮樣品、冷凍干燥樣品、烘干磨碎樣品） 后精油的成分變化，也可進一步探索各品質(zhì)成分的分離與提純工藝，為碰碰香資源充分利用與深度開發(fā)提供參考依據(jù)。