王卉怡 肖冬梅

感染性陰道炎是適齡女性比較多見的感染性疾病,而念珠菌是最常見的陰道黏膜真菌,其臨床癥狀主要為分泌物增加,呈現(xiàn)豆腐渣樣或凝乳狀,伴有外陰瘙癢,并且發(fā)病頻繁,甚至誘發(fā)宮頸炎、不孕和流產(chǎn)。大量流行病學(xué)觀察數(shù)據(jù)證實(shí)［1］,近幾年由于抗生素的大量使用,導(dǎo)致耐藥性菌株出現(xiàn),尤其是感染念珠菌導(dǎo)致的陰道炎,其發(fā)病率每年都明顯上升,絕大部分適齡女性在一生當(dāng)中至少有一次感染過念珠菌的經(jīng)歷,這會(huì)顯著干擾患者的健康。臨床證明,性傳播是誘發(fā)適齡婦女罹患念珠菌感染性陰道炎的重要途徑［2］。另外患者陰道的防御功能低下也會(huì)導(dǎo)致念珠菌在陰道大量繁殖。此次研究的目的是通過分析念珠菌感染性陰道炎的菌種分布特點(diǎn)、敏感性及Th1/Th2細(xì)胞因子變化特點(diǎn),幫助臨床更加合理選擇抗生素和治療方法?，F(xiàn)將詳細(xì)過程報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2021 年1～12 月在沈陽市鐵西區(qū)中心醫(yī)院就診的456 例疑似念珠菌感染性陰道炎患者的陰道分泌物,培養(yǎng)其真菌標(biāo)本。患者年齡19～52 歲,平均年齡(41.2±9.1)歲；病程6 d～2 年,平均病程(6.2±6.0)個(gè)月。在明確診斷為念珠菌陽性的標(biāo)本中隨機(jī)抽取100 例作為觀察組,另抽取相同時(shí)段本院100 例體檢健康女性作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合感染性陰道炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)；既往未使用抗生素。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他陰道疾?。唤谑褂眠^抗真菌類藥物的患者；處于妊娠或哺乳期的患者。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)鑒定 陰道清潔后,用無菌棉簽從陰道后穹窿提取少量分泌物,隨后送入實(shí)驗(yàn)室,通過顯微鏡發(fā)現(xiàn)假菌絲后,將標(biāo)本放置在沙保弱培養(yǎng)基中,恒溫保存2 d,把對(duì)比的酵母樣真菌放置在科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基中,恒溫保存2 d。通過菌落的著色進(jìn)行判定,若菌落呈現(xiàn)為翠綠色,則判讀為白色念珠菌。無法明確判讀菌種的標(biāo)本通過API-20CAUX 鑒定試劑盒進(jìn)行比較。

1.2.2 藥敏試驗(yàn) 通過酵母真菌藥敏試片對(duì)所有標(biāo)本進(jìn)行藥敏比較。把每個(gè)比較完畢的標(biāo)本,放置在5×105CFU/ml 的混懸液中,平鋪在瓊脂培養(yǎng)皿上,恒溫干燥20 min 后放置在各藥敏試紙片,藥敏試紙片選擇兩性霉素B、5-氟胞嘧啶、伏立康唑、伊曲康唑、氟康唑進(jìn)行藥敏比較。恒溫放置1 d 后,通過藥敏試片的比較標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判讀。

1.2.3 Th1/Th2 型細(xì)胞因子檢測(cè) 對(duì)兩組研究對(duì)象通過陰道后穹窿提取分泌物,放置在含蛋白酶抑制劑的PBS 液中,經(jīng)離心機(jī)離心后抽取上清液500 μl,再通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)所有標(biāo)本的IFN-γ、IL-12、IL-4、IFN-γ/IL-4 水平。

1.3 觀察指標(biāo) 分析念珠菌菌種分布情況及藥敏試驗(yàn)結(jié)果；比較兩組陰道分泌物中Th1/Th2型細(xì)胞因子水平,包括IFN-γ、IL-12、IL-4、IFN-γ/IL-4。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 念珠菌菌種分布情況分析 456 例疑似念珠菌感染性陰道炎患者的陰道分泌物培養(yǎng)出278 株念珠菌,占比為60.96%(278/456)。其中白色念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、熱帶念珠菌及其他念珠菌占比分別為77.70%、8.99%、1.80%、4.32%、7.19%。見表1。

表1 278 株念珠菌菌種分布情況分析(株,%)

2.2 念珠菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析 念珠菌對(duì)兩性霉素B、5-氟胞嘧啶、伏立康唑、伊曲康唑、氟康唑均具有較高的敏感性,其中對(duì)兩性霉素B 的敏感性最高,均為100.0%；白色念珠菌對(duì)各抗真菌藥物的敏感性均最高。見表2。

表2 278 株念珠菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析(%)

2.3 兩組陰道分泌物中Th1/Th2 型細(xì)胞因子水平比較觀察組陰道分泌物中IFN-γ、IL-12、IL-4 水平明顯高于對(duì)照組,IFN-γ/IL-4 明顯低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表3。

表3 兩組陰道分泌物中Th1/Th2 型細(xì)胞因子水平比較()

表3 兩組陰道分泌物中Th1/Th2 型細(xì)胞因子水平比較()

注：與對(duì)照組比較,aP＜0.05

3 討論

一般情況下,念珠菌廣泛分布在人體的皮膚、呼吸、消化道、尿道及生殖黏膜中,是人體正常菌種。研究發(fā)現(xiàn),大約10%的健康婦女也能在陰道分泌物中培養(yǎng)出念珠菌,但是未出現(xiàn)感染性陰道炎的癥狀［3］。如果人體的抵抗力下降、長(zhǎng)期使用抗生素、陰道內(nèi)環(huán)境出現(xiàn)異常變化時(shí)就會(huì)出現(xiàn)念珠菌感染性陰道炎,所以念珠菌是一種條件致病菌。此次研究中,有278 株念珠菌的檢測(cè)結(jié)果為陽性,而其中白色念珠菌的檢出率最高,為77.70%。所以臨床中念珠菌感染性陰道炎病例以白色念珠菌為主要感染病原菌。臨床上各種菌株針對(duì)各種抗生素的敏感性差距明顯,所以念珠菌針對(duì)各種抗真菌藥的敏感性也不同,而且抗真菌藥多為劑量依賴性的藥物,在臨床使用當(dāng)中通?？赡芤倭吭黾觿┝浚?］。所以在治療念珠菌感染性陰道炎的過程中必須選取恰當(dāng)?shù)目拐婢?這就要求臨床熟悉念珠菌菌種的種類和相應(yīng)的耐藥性情況。此次試驗(yàn)的藥敏性檢測(cè)結(jié)果說明,臨床中使用的抗真菌藥物對(duì)念珠菌都有明顯的敏感性,尤其是兩性霉素B,其作用于所有類型的念珠菌敏感性均為100.0%。除了兩性霉素B,5-氟胞嘧啶、伏立康唑?qū)τ诎咨钪榫拿舾行砸玻?0%,而伊曲康唑、氟康唑的敏感性均＞85%。證實(shí)上述的常用抗真菌藥抑制白色念珠菌的效果都十分明顯。而克柔念珠菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌等菌株對(duì)臨床中使用的這些抗真菌藥物敏感性相對(duì)降低,而且敏感性也有顯著差異。研究發(fā)現(xiàn),念珠菌是陰道內(nèi)一種正常存在的菌群,其作用是保持陰道內(nèi)環(huán)境的自潔功能,并保持各種菌群的平衡［5］。但是臨床還無法明確解釋人體感染念珠菌后的自身抵抗機(jī)理,但當(dāng)人體的免疫功能下降時(shí)或者陰道內(nèi)環(huán)境發(fā)生異常變化時(shí)就會(huì)誘發(fā)念珠菌感染性陰道炎。研究發(fā)現(xiàn),Th1/Th2 的異常是免疫回應(yīng)機(jī)制的重要標(biāo)志,可以體現(xiàn)許多疾病的病理生理反應(yīng)。IFN-γ、IL-12 等細(xì)胞因子可以加速Th 細(xì)胞經(jīng)Th0 向Th1 的轉(zhuǎn)變,增加介導(dǎo)吞噬細(xì)胞的作用,起到免疫保護(hù)的功能,尤其是針對(duì)外來病原菌的侵入；IL-4、IL-10 等細(xì)胞因子可以加速Th 細(xì)胞經(jīng)Th0 向Th2 的轉(zhuǎn)變,提高人體對(duì)外來病原菌的敏感性［6］。IFN-γ 代表了Th1 細(xì)胞的主要功能,可以提高人體免疫力；IL-12 是加速Th1 細(xì)胞轉(zhuǎn)變的主要細(xì)胞因子,可以經(jīng)B 細(xì)胞加速生成免疫球蛋白G(IgG),從而起到連續(xù)抑菌保護(hù)功能［7］。此次試驗(yàn)結(jié)果證實(shí),念珠菌感染性陰道炎患者陰道分泌物含有大量IFN-γ、IL-12,并且比健康女性顯著升高,證明在疾病早期,細(xì)胞自我免疫的過程需要Th1 進(jìn)行催化。IL-4 屬于細(xì)胞因子Th2 型,由T 細(xì)胞合成,可阻止巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞對(duì)病原微生物的吞噬能力,降低消滅病原菌的能力［8］。此次研究發(fā)現(xiàn),念珠菌感染性陰道炎患者的陰道分泌物IL-4 含量顯著高于健康女性,證明Th2 發(fā)生激發(fā)反應(yīng)。通過研究Th1/Th2 的改變規(guī)律,發(fā)現(xiàn)念珠菌感染性陰道炎患者IFN-γ/IL-4 水平較健康女性顯著降低,說明如果Th2 型細(xì)胞的抑制作用超過Th1型細(xì)胞促進(jìn)作用,就會(huì)導(dǎo)致人體的免疫功能下降。

綜上所述,念珠菌感染性陰道炎以白色念珠菌感染為主,菌種不同對(duì)抗菌藥物敏感性也不同,所以臨床上要通過對(duì)菌種的判斷合理選擇抗生素,防止念珠菌感染性陰道炎患者出現(xiàn)局部免疫功能紊亂現(xiàn)象。