矯禎浩,馬利娟,顧珣可,王永清,賈珂珂

(北京大學(xué)第三醫(yī)院a.檢驗(yàn)科,b.婦產(chǎn)科,北京 100191)

母體免疫系統(tǒng)對(duì)胚胎抗原的耐受,即母胎免疫耐受[1],是一個(gè)精細(xì)而復(fù)雜的調(diào)節(jié)過程,補(bǔ)體系統(tǒng)在其中發(fā)揮重要的作用。補(bǔ)體系統(tǒng)是固有免疫與適應(yīng)性免疫之間的重要樞紐,補(bǔ)體因子是其重要組成成分。正常妊娠時(shí),胎盤存在補(bǔ)體裂解產(chǎn)物沉積,但補(bǔ)體活化沒有對(duì)母體和胎兒造成有害影響。這是因?yàn)樵谡Ｈ焉飼r(shí),補(bǔ)體的活化劑與抑制劑是動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)補(bǔ)體平衡的。正常妊娠時(shí),胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞高表達(dá)補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白,血液循環(huán)中也存在多種補(bǔ)體調(diào)節(jié)因子,這些調(diào)節(jié)蛋白可阻止過度的補(bǔ)體激活,維持正常妊娠過程。鑒于妊娠期這些補(bǔ)體因子水平的變化,為了更好地指導(dǎo)臨床相關(guān)疾病如妊娠期高血壓等的診斷和治療,本研究參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI)文件EP28-A3c的要求[2],分析其隨孕期變化趨勢(shì),并建立不同孕期的血清C1q、B因子、H因子、C3、C4水平的參考區(qū)間。

1 材料與方法

1.1研究對(duì)象 選擇2021年10月至2022年1月在北京大學(xué)第三醫(yī)院體檢中心體檢的120例健康女性人群,作為對(duì)照組;選擇2021年2月至12月在北京大學(xué)第三醫(yī)院產(chǎn)科孕期檢查的398例健康妊娠婦女,產(chǎn)后回顧性篩選,按照孕周將其分為孕早期(≤13周)130例、孕中期(14～28周)124例和孕晚期(≥29周)144例,作為實(shí)驗(yàn)組。入選對(duì)象均為漢族人群,空腹采血,各組年齡均為18～45歲。血清標(biāo)本均無溶血、脂血、黃疸。以上受試者均無高血壓、貧血、彌散性血管內(nèi)凝血、橋本氏甲狀腺炎等免疫系統(tǒng)疾病,無肝膽胰脾腎等重要器官疾病,乙肝、丙肝血清學(xué)檢測(cè)指標(biāo)陰性。本研究經(jīng)北京大學(xué)第三醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)[批準(zhǔn)文號(hào):(2021)醫(yī)倫審第(041-01)號(hào)],且納入研究的對(duì)象均已簽署患者知情同意書。

1.2儀器與試劑 AU5800全自動(dòng)生化分析儀(美國(guó)Beckman公司);補(bǔ)體C1q、B因子、H因子檢測(cè)試劑盒(上海北加公司,批號(hào)20211235、20211228、20211220);補(bǔ)體C3、C4試劑盒(上海德賽公司,批號(hào)60418157、60148161)。

1.3方法 補(bǔ)體C1q、B因子、H因子及補(bǔ)體C3、C4檢測(cè)均采用免疫透射比濁法,分別按試劑盒說明書進(jìn)行操作,均采用配套校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。

2 結(jié)果

妊娠各期血清C1q等補(bǔ)體因子的參考區(qū)間由398例健康妊娠婦女的數(shù)據(jù)建立,非妊娠期及妊娠各期的年齡、孕周描述見表1。健康非妊娠婦女和妊娠婦女之間的年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,妊娠婦女各孕期之間的年齡差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。檢測(cè)非妊娠期及各妊娠期婦女血清中補(bǔ)體C1q、B因子、H因子、C3、C4的水平,并進(jìn)行比較,見表2。補(bǔ)體C1q、C4在妊娠早、中、晚期水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。B因子、H因子、C3在妊娠早、中、晚期水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,各組之間再進(jìn)行兩兩比較,H因子在孕中期與孕晚期比較無差異,其余各組兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各妊娠期血清C1q等補(bǔ)體因子的參考區(qū)間見表3。

表1 非妊娠婦女及妊娠期婦女各期的年齡、孕周描述

表2 非妊娠及各妊娠期婦女血清補(bǔ)體C1q等補(bǔ)體因子水平比較[M(P25,P75)]

表3 妊娠婦女不同孕期的血清C1q、B因子、H因子、C3、C4的參考區(qū)間(P2.5～P97.5)

3 討論

補(bǔ)體系統(tǒng)對(duì)正常妊娠的胎盤形成非常重要,母—胎界面低水平炎癥反應(yīng)及適度的補(bǔ)體激活有利于妊娠的順利進(jìn)行。同時(shí)妊娠過程中為了防止補(bǔ)體活化導(dǎo)致的自身組織損傷,也會(huì)釋放抑制補(bǔ)體活化的因子[3-6]。所以孕期血清C1q等補(bǔ)體因子水平部分會(huì)有明顯變化,有必要分析建立健康正常妊娠女性在不同孕期血清C1q等補(bǔ)體因子水平的參考區(qū)間。CLSI和國(guó)際臨床化學(xué)聯(lián)合會(huì)(IFCC)在2010年共同修訂的推薦指南《臨床實(shí)驗(yàn)室如何確定和建立生物參考區(qū)間;批準(zhǔn)指南-第3版》(EP28-A3c)中指出,通過建立排除標(biāo)準(zhǔn),選取合適參考個(gè)體以獲得參考值的方法(直接法)是建立生物參考區(qū)間的標(biāo)準(zhǔn)方法。但實(shí)際過程中直接法操作過程復(fù)雜,耗時(shí)長(zhǎng),成本高,影響因素多,實(shí)際應(yīng)用難度大。后有學(xué)者提出利用實(shí)驗(yàn)室儲(chǔ)存的大量數(shù)據(jù),建立以數(shù)學(xué)統(tǒng)計(jì)為基礎(chǔ)的生物參考區(qū)間(間接法)[2,7-8],EP28-A3c指南也允許實(shí)驗(yàn)室通過間接法建立參考區(qū)間。

C1q 對(duì)于正常妊娠至關(guān)重要, 如果人體缺乏該補(bǔ)體將使胎盤發(fā)育不良進(jìn)而導(dǎo)致早產(chǎn)。C1q基因敲除的小鼠出現(xiàn)胎盤發(fā)育異常,同時(shí)表現(xiàn)出子癇前期的表型[9-10]。本研究顯示C1q水平在未孕及整個(gè)孕期比較結(jié)果顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但健康未孕組與孕早期比較無顯著變化,隨著孕期發(fā)展,孕中期、孕晚期與未孕時(shí)相比較有下降趨勢(shì),但在孕期過程中相對(duì)穩(wěn)定,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？赡茉谠衅谶^程中C1q的生成與消耗是動(dòng)態(tài)平衡的,同時(shí)經(jīng)典途徑激活,相比未孕時(shí),C1q有部分消耗。

補(bǔ)體有三條激活途徑,都是通過特異性C3轉(zhuǎn)化酶將補(bǔ)體C3切割成C3a和C3b片段。人體輸卵管上皮細(xì)胞合成和分泌C3[11],在著床前胚胎存在時(shí),C3表達(dá)上調(diào),以支持早期胚胎的發(fā)育[12]。有研究提示,在正常妊娠中機(jī)體主要通過經(jīng)典或凝集素途徑使補(bǔ)體系統(tǒng)激活[13]。本研究顯示,血清補(bǔ)體C3水平呈遞進(jìn)升高趨勢(shì),認(rèn)為在正常妊娠過程中補(bǔ)體系統(tǒng)只是適度激活,消耗有限,而補(bǔ)體產(chǎn)量增加。有體外研究顯示,孕早期細(xì)胞外滋養(yǎng)細(xì)胞會(huì)分泌C4,有助于滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲蛻膜和子宮內(nèi)膜血管重鑄[14],與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致,即孕早期時(shí)血清補(bǔ)體C4水平較未孕時(shí)升高。

B因子為C3激活劑前體,是補(bǔ)體旁路激化途徑中的一個(gè)重要因子。本研究中,正常妊娠過程中B因子在孕中后期升高,也與補(bǔ)體系統(tǒng)激活有關(guān),但旁路激活途徑可能不是妊娠中機(jī)體的主要激活途徑,故孕早期與未孕時(shí)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但有研究顯示,B因子在孕早期即開始上升,可能與早期胎盤形成有關(guān)[15]。與本研究數(shù)據(jù)顯示不太一致,可能由于本研究收集的樣本中孕早期集中在6～10周,而B因子通常在10周之后升高。

H因子又名C3b滅活劑加速因子,會(huì)抑制裂解C3的擴(kuò)大途徑,起到穩(wěn)定機(jī)體內(nèi)環(huán)境的作用。在孕早期及孕中期時(shí),H因子水平變化趨勢(shì)與C3相近,孕晚期H因子較穩(wěn)定,補(bǔ)體C3較孕中期升高,相對(duì)豐富的調(diào)節(jié)蛋白會(huì)阻止過度的補(bǔ)體激活[16]。

補(bǔ)體激活的異?？蓪?dǎo)致子癇前期、流產(chǎn)和早產(chǎn)、宮內(nèi)發(fā)育遲緩等多種不良妊娠結(jié)局。研究發(fā)現(xiàn), 子癇前期、抗磷脂抗體綜合征和早產(chǎn)患者循環(huán)血中補(bǔ)體激活片段(如 C3a/Bb)明顯升高[17]。與足月對(duì)照組相比,早產(chǎn)孕婦的補(bǔ)體因子 B 和 H 在外周血中升高[18]。子癇前期患者血清C1q水平明顯降低,可作為輔助診斷子癇前期的潛在指標(biāo)[19]。本研究建立的正常妊娠女性在不同孕期血清C1q等補(bǔ)體因子的參考區(qū)間為臨床合理評(píng)估及監(jiān)測(cè)妊娠期疾病的發(fā)生發(fā)展提供了參考和依據(jù)。