唐貴文，華益帆，唐耀敏，何國丹

（1.貴陽市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，貴州 貴陽 550081 ；2.貴州醫(yī)科大學(xué)，貴州 貴陽 550004）

巨細(xì)胞病毒（cytomegalovirus，CMV）廣泛存在于不同的人群中。CMV 感染是一個(gè)被忽視的重大公共衛(wèi)生問題，全球近80% 人存在CMV 感染。CMV感染的發(fā)生與地理位置、種族和經(jīng)濟(jì)狀況有關(guān)。發(fā)達(dá)國家的CMV 感染率低于發(fā)展中國家，發(fā)展中國家的CMV 感染率較高。育齡期女性的CMV 血清特異性抗體陽性率高達(dá)80% ～100%，新生兒先天性CMV感染率為0.6% ～6.1%[1]。CMV 感染易導(dǎo)致孕產(chǎn)婦發(fā)生不良妊娠事件。目前，臨床上對CMV 疫苗的需求十分迫切，雖然疫苗研究取得了一定進(jìn)展，但至今尚無CMV 疫苗上市[2]。同時(shí)，目前也沒有更有效的措施來避免CMV 感染，故早發(fā)現(xiàn)、早治療尤為重要。為保證CMV 免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG）抗體的檢測結(jié)果準(zhǔn)確、有效，進(jìn)行該項(xiàng)目的驗(yàn)證工作顯得極為迫切。本文基于ISO15189《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的專用要求》，通過安圖AutoLumo A2000Plus 化學(xué)發(fā)光儀，對CMV IgM 和IgG 抗體進(jìn)行性能驗(yàn)證，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 儀器與試劑

安圖AutoLumoA2000Plus 化學(xué)發(fā)光儀；試劑：安圖公司配套使用的CMV IgM 和IgG 抗體試劑（簡稱安圖試劑）、標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)源質(zhì)控品。

1.2 方法

1.2.1 精密度驗(yàn)證 按照EP15-A3 及WS/T492-2016文件指導(dǎo)進(jìn)行評價(jià)，IgM 和IgG 抗體分別檢測低值和高值2 個(gè)不同濃度的質(zhì)控品，每個(gè)濃度每天測定5 次，連續(xù)測定5 d，獲得25 個(gè)檢測結(jié)果。根據(jù)EP15-A3規(guī)定的方法，計(jì)算各樣本的重復(fù)精密度（分析內(nèi)精密度）和批間精密度，再進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)算變異系數(shù)（CV）。驗(yàn)證要求：批內(nèi)CV ≤1/4 允許總誤差（TEa）% ；批間CV ≤1/3TEa%。

1.2.2 正確度驗(yàn)證 按照《CNAS-GL037 臨床化學(xué)定量檢驗(yàn)程序性能驗(yàn)證指南》的規(guī)定，IgM 和IgG 抗體分別使用標(biāo)準(zhǔn)品及2 個(gè)濃度進(jìn)行驗(yàn)證。每個(gè)濃度每天重復(fù)測定2 次，連續(xù)測定5 d，計(jì)算實(shí)測均值，并計(jì)算偏差。偏差=（實(shí)測均值- 理論濃度值）/ 理論濃度值×100%，正確度（參考物質(zhì)）驗(yàn)證要求：偏差不超過±15%。

1.2.3 線性驗(yàn)證 根據(jù)國家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《WS/T 420-2013 臨床實(shí)驗(yàn)室對商品定量試劑盒分析性能的驗(yàn)證》的規(guī)定，分別將IgM 和IgG 抗體接近線性范圍上限的高值樣本（H），用低值樣本（L）按照不同稀釋比例制備出至少5 個(gè)梯度樣本。每個(gè)濃度樣本重復(fù)測定3次，計(jì)算均值。將理論值與實(shí)測均值使用EXCEL 軟件進(jìn)行一次方程y=ax+b 回歸分析，統(tǒng)計(jì)方程因子斜率a、截距b 和相關(guān)性R，要求R2≥0.99。

1.2.4 可報(bào)告范圍驗(yàn)證 分別選取已知濃度接近線性范圍上限的高值樣本3 份，編號：H1、H2、H3。根據(jù)《CNAS-GL037 臨床化學(xué)定量檢驗(yàn)程序性能驗(yàn)證指南》所述方法并參考EP34 進(jìn)行可報(bào)告范圍驗(yàn)證。將H1、H2、H3 原倍樣本上機(jī)各重復(fù)測定3 次，每個(gè)高值樣本用廠家推薦的稀釋液，并在廠家推薦的稀釋比例附近進(jìn)行3 個(gè)比例的手工稀釋，每份稀釋樣本重復(fù)測定3 次，計(jì)算原倍樣本及各稀釋后樣本均值，并分別與理論值計(jì)算偏差。驗(yàn)證要求：3 份樣本相同稀釋比例的偏差均不大于廠家聲明的最大偏差時(shí)，對應(yīng)的允許稀釋倍數(shù)應(yīng)不小于廠家推薦的稀釋倍數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 20.0 軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用x±s表示，以t檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 精密度驗(yàn)證

CMV IgM 和IgG 抗體兩種濃度的質(zhì)控品測得的批內(nèi)精密度均小于1/4 允許總誤差，批間精密度均小于1/3 允許總誤差，驗(yàn)證通過。詳見表1。

表1 CMV IgM 抗體精密度驗(yàn)證結(jié)果

2.2 正確度驗(yàn)證

CMV IgM 和IgG 抗體高低值的偏差均在標(biāo)準(zhǔn)品范圍內(nèi)，均不超過±15%，驗(yàn)證通過。詳見表2。

表2 CMV IgM 抗體正確度驗(yàn)證

2.3 線性驗(yàn)證

計(jì) 算 得 到y(tǒng)=1.0127x+0.4962，相 關(guān) 系 數(shù)R2＞0.99，驗(yàn)證通過。詳見表3 和表4。

表3 CMV IgM 抗體線性驗(yàn)證數(shù)據(jù)

表4 CMV IgG 抗體線性驗(yàn)證數(shù)據(jù)

2.4 可報(bào)告范圍驗(yàn)證

CMV IgM 抗體可報(bào)告范圍在-8.52% ～12.16%之間，CMV IgG 抗體可報(bào)告范圍在-7.57% ～2.73%之間，符合要求。詳見表5 和表6。

表5 CMV IgM 抗體項(xiàng)目可報(bào)告范圍驗(yàn)證結(jié)果

表6 CMV IgG 抗體項(xiàng)目可報(bào)告范圍驗(yàn)證結(jié)果

3 討論

我國是CMV 感染的高發(fā)國家。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國孕婦的CMV 血清特異性抗體陽性率為94% ～98%，新生兒先天性CMV 感染率約為0.7%[3-4]。CMV 抗體檢測結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，可以給臨床診斷提供數(shù)據(jù)支持及后續(xù)治療的方向。實(shí)驗(yàn)室檢測CMV 抗體的依據(jù)為美國《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》和ISO15189 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的相關(guān)要求，以及《臨床檢驗(yàn)定量測定項(xiàng)目精密度與正確度性能驗(yàn)證》《臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求》[5-7]等。在進(jìn)行臨床檢測之前，需要對實(shí)驗(yàn)室的儀器設(shè)備、檢驗(yàn)系統(tǒng)和方法等的主要分析性能進(jìn)行驗(yàn)證，并明確要求驗(yàn)證結(jié)果能達(dá)到臨床要求[8-12]。本研究結(jié)果顯示，CMV IgM 抗體低水平和高水平質(zhì)控品測得的批內(nèi)精密度分別為3.20% 和0.42%，CMV IgG 抗體低水平和高水平質(zhì)控品測得的批內(nèi)精密度分別為1.38% 和1.90%，均小于1/4 允許總誤差6.25% ；而測得的批間精密度，CMV IgM 抗體分別為1.42% 和0.78%，CMV IgG 抗體分別為1.51%和2.73%，均小于1/3 允許總誤差8.33%，符合定量項(xiàng)目的要求。正確度方面，CMV IgM 抗體偏差P 分別為：0.66% 及-0.15%，CMV IgG 抗體偏差P 分別為：1.53% 及-0.57%，偏差P 均不大于±15%，符合要求。線性方面，R2≥0.99，b 值均在0.9 ～1.1范圍內(nèi)?？蓤?bào)告范圍方面，CMV IgM 抗體允許偏差在-8.52% ～12.16% 之間，CMV IgG 抗體允許偏差在-7.57% ～2.73% 之間，均位于±15% 以內(nèi)，符合要求。

綜上所述，通過對CMV IgM 和IgG 抗體項(xiàng)目檢測系統(tǒng)的精密度、正確度、線性、可報(bào)告范圍各項(xiàng)性能參數(shù)的驗(yàn)證與分析，說明CMV IgM 和IgG 抗體項(xiàng)目的檢測系統(tǒng)性能良好，項(xiàng)目的相關(guān)性能也符合相應(yīng)要求，能夠保證CMV IgM 和IgG 抗體檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。目前，國內(nèi)報(bào)道的性能驗(yàn)證研究大部分是基于美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會的相關(guān)文件（EP15-A2、EP6-A2、EP7-A2、C28-A2 等）或美國臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正法規(guī)進(jìn)行的方案設(shè)計(jì)[13]，國家對優(yōu)生定量項(xiàng)目的性能沒有明確規(guī)定，但是實(shí)驗(yàn)室在實(shí)際工作中應(yīng)進(jìn)行相關(guān)方面的驗(yàn)證工作，以確保實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，給臨床以更多數(shù)據(jù)支持，更好地為患者服務(wù)。