唐貴文，華益帆，唐耀敏，何國丹

（1.貴陽市第二人民醫(yī)院檢驗科，貴州 貴陽 550081 ；2.貴州醫(yī)科大學(xué)，貴州 貴陽 550004）

巨細胞病毒（cytomegalovirus，CMV）廣泛存在于不同的人群中。CMV 感染是一個被忽視的重大公共衛(wèi)生問題，全球近80% 人存在CMV 感染。CMV感染的發(fā)生與地理位置、種族和經(jīng)濟狀況有關(guān)。發(fā)達國家的CMV 感染率低于發(fā)展中國家，發(fā)展中國家的CMV 感染率較高。育齡期女性的CMV 血清特異性抗體陽性率高達80% ～100%，新生兒先天性CMV感染率為0.6% ～6.1%[1]。CMV 感染易導(dǎo)致孕產(chǎn)婦發(fā)生不良妊娠事件。目前，臨床上對CMV 疫苗的需求十分迫切，雖然疫苗研究取得了一定進展，但至今尚無CMV 疫苗上市[2]。同時，目前也沒有更有效的措施來避免CMV 感染，故早發(fā)現(xiàn)、早治療尤為重要。為保證CMV 免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG）抗體的檢測結(jié)果準確、有效，進行該項目的驗證工作顯得極為迫切。本文基于ISO15189《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力的專用要求》，通過安圖AutoLumo A2000Plus 化學(xué)發(fā)光儀，對CMV IgM 和IgG 抗體進行性能驗證，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 儀器與試劑

安圖AutoLumoA2000Plus 化學(xué)發(fā)光儀；試劑：安圖公司配套使用的CMV IgM 和IgG 抗體試劑（簡稱安圖試劑）、標準品和標源質(zhì)控品。

1.2 方法

1.2.1 精密度驗證 按照EP15-A3 及WS/T492-2016文件指導(dǎo)進行評價，IgM 和IgG 抗體分別檢測低值和高值2 個不同濃度的質(zhì)控品，每個濃度每天測定5 次，連續(xù)測定5 d，獲得25 個檢測結(jié)果。根據(jù)EP15-A3規(guī)定的方法，計算各樣本的重復(fù)精密度（分析內(nèi)精密度）和批間精密度，再進行統(tǒng)計學(xué)分析，計算變異系數(shù)（CV）。驗證要求：批內(nèi)CV ≤1/4 允許總誤差（TEa）% ；批間CV ≤1/3TEa%。

1.2.2 正確度驗證 按照《CNAS-GL037 臨床化學(xué)定量檢驗程序性能驗證指南》的規(guī)定，IgM 和IgG 抗體分別使用標準品及2 個濃度進行驗證。每個濃度每天重復(fù)測定2 次，連續(xù)測定5 d，計算實測均值，并計算偏差。偏差=（實測均值- 理論濃度值）/ 理論濃度值×100%，正確度（參考物質(zhì)）驗證要求：偏差不超過±15%。

1.2.3 線性驗證 根據(jù)國家衛(wèi)生行業(yè)標準《WS/T 420-2013 臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證》的規(guī)定，分別將IgM 和IgG 抗體接近線性范圍上限的高值樣本（H），用低值樣本（L）按照不同稀釋比例制備出至少5 個梯度樣本。每個濃度樣本重復(fù)測定3次，計算均值。將理論值與實測均值使用EXCEL 軟件進行一次方程y=ax+b 回歸分析，統(tǒng)計方程因子斜率a、截距b 和相關(guān)性R，要求R2≥0.99。

1.2.4 可報告范圍驗證 分別選取已知濃度接近線性范圍上限的高值樣本3 份，編號：H1、H2、H3。根據(jù)《CNAS-GL037 臨床化學(xué)定量檢驗程序性能驗證指南》所述方法并參考EP34 進行可報告范圍驗證。將H1、H2、H3 原倍樣本上機各重復(fù)測定3 次，每個高值樣本用廠家推薦的稀釋液，并在廠家推薦的稀釋比例附近進行3 個比例的手工稀釋，每份稀釋樣本重復(fù)測定3 次，計算原倍樣本及各稀釋后樣本均值，并分別與理論值計算偏差。驗證要求：3 份樣本相同稀釋比例的偏差均不大于廠家聲明的最大偏差時，對應(yīng)的允許稀釋倍數(shù)應(yīng)不小于廠家推薦的稀釋倍數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

用SPSS 20.0 軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料用x±s表示，以t檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 精密度驗證

CMV IgM 和IgG 抗體兩種濃度的質(zhì)控品測得的批內(nèi)精密度均小于1/4 允許總誤差，批間精密度均小于1/3 允許總誤差，驗證通過。詳見表1。

表1 CMV IgM 抗體精密度驗證結(jié)果

2.2 正確度驗證

CMV IgM 和IgG 抗體高低值的偏差均在標準品范圍內(nèi)，均不超過±15%，驗證通過。詳見表2。

表2 CMV IgM 抗體正確度驗證

2.3 線性驗證

計 算 得 到y(tǒng)=1.0127x+0.4962，相 關(guān) 系 數(shù)R2＞0.99，驗證通過。詳見表3 和表4。

表3 CMV IgM 抗體線性驗證數(shù)據(jù)

表4 CMV IgG 抗體線性驗證數(shù)據(jù)

2.4 可報告范圍驗證

CMV IgM 抗體可報告范圍在-8.52% ～12.16%之間，CMV IgG 抗體可報告范圍在-7.57% ～2.73%之間，符合要求。詳見表5 和表6。

表5 CMV IgM 抗體項目可報告范圍驗證結(jié)果

表6 CMV IgG 抗體項目可報告范圍驗證結(jié)果

3 討論

我國是CMV 感染的高發(fā)國家。據(jù)統(tǒng)計，我國孕婦的CMV 血清特異性抗體陽性率為94% ～98%，新生兒先天性CMV 感染率約為0.7%[3-4]。CMV 抗體檢測結(jié)果的準確可靠，可以給臨床診斷提供數(shù)據(jù)支持及后續(xù)治療的方向。實驗室檢測CMV 抗體的依據(jù)為美國《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》和ISO15189 醫(yī)學(xué)實驗室認可的相關(guān)要求，以及《臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》《臨床生物化學(xué)檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求》[5-7]等。在進行臨床檢測之前，需要對實驗室的儀器設(shè)備、檢驗系統(tǒng)和方法等的主要分析性能進行驗證，并明確要求驗證結(jié)果能達到臨床要求[8-12]。本研究結(jié)果顯示，CMV IgM 抗體低水平和高水平質(zhì)控品測得的批內(nèi)精密度分別為3.20% 和0.42%，CMV IgG 抗體低水平和高水平質(zhì)控品測得的批內(nèi)精密度分別為1.38% 和1.90%，均小于1/4 允許總誤差6.25% ；而測得的批間精密度，CMV IgM 抗體分別為1.42% 和0.78%，CMV IgG 抗體分別為1.51%和2.73%，均小于1/3 允許總誤差8.33%，符合定量項目的要求。正確度方面，CMV IgM 抗體偏差P 分別為：0.66% 及-0.15%，CMV IgG 抗體偏差P 分別為：1.53% 及-0.57%，偏差P 均不大于±15%，符合要求。線性方面，R2≥0.99，b 值均在0.9 ～1.1范圍內(nèi)?？蓤蟾娣秶矫?，CMV IgM 抗體允許偏差在-8.52% ～12.16% 之間，CMV IgG 抗體允許偏差在-7.57% ～2.73% 之間，均位于±15% 以內(nèi)，符合要求。

綜上所述，通過對CMV IgM 和IgG 抗體項目檢測系統(tǒng)的精密度、正確度、線性、可報告范圍各項性能參數(shù)的驗證與分析，說明CMV IgM 和IgG 抗體項目的檢測系統(tǒng)性能良好，項目的相關(guān)性能也符合相應(yīng)要求，能夠保證CMV IgM 和IgG 抗體檢驗結(jié)果的準確性和穩(wěn)定性。目前，國內(nèi)報道的性能驗證研究大部分是基于美國臨床實驗室標準化協(xié)會的相關(guān)文件（EP15-A2、EP6-A2、EP7-A2、C28-A2 等）或美國臨床實驗室改進修正法規(guī)進行的方案設(shè)計[13]，國家對優(yōu)生定量項目的性能沒有明確規(guī)定，但是實驗室在實際工作中應(yīng)進行相關(guān)方面的驗證工作，以確保實驗室檢驗結(jié)果的準確可靠，給臨床以更多數(shù)據(jù)支持，更好地為患者服務(wù)。