敦 康，郭永輝，付 莉，柴倩雯，隋思強(qiáng)，張俊朋，王若琳

（1.河北省藥品審評(píng)中心，河北 石家莊 050091 ；2.河北省藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院，河北 石家莊 050071；3.河北省藥品職業(yè)化檢查員總隊(duì)，河北 石家莊 050091；4.河南省食品藥品檢驗(yàn)所，河南 鄭州 4500083；5.河北科技大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院，河北省柔性功能材料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 石家莊 050018）

桂利嗪是一種鈣通道拮抗劑，能通過(guò)阻止血管平滑肌鈣內(nèi)流使血管擴(kuò)張，從而改善腦部供血。目前，桂利嗪多用于治療缺血性腦血管病，包括腦血栓形成、腦動(dòng)脈硬化等[1-7]。桂利嗪現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)《中華人民共和國(guó)藥典》（以下簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》）2020 年版二部桂利嗪品種項(xiàng)下，未對(duì)桂利嗪原料藥中的有機(jī)溶劑進(jìn)行質(zhì)量控制，無(wú)法保證其安全性和有效性[8]。目前，關(guān)于桂利嗪質(zhì)量控制的研究文獻(xiàn)及報(bào)道較少。我們采用氣-質(zhì)聯(lián)用的方法檢測(cè)到桂利嗪原料藥中含有有機(jī)溶劑異丙醇，同時(shí)結(jié)合桂利嗪的合成工藝中使用到甲醇、乙醇、丙酮作為溶劑[9-15]，這些有機(jī)溶劑殘留會(huì)對(duì)人體健康造成一定危害，因此有必要建立桂利嗪中有機(jī)溶劑甲醇、乙醇、丙酮和異丙醇的檢測(cè)方法，以用于其質(zhì)量控制，更好地保障患者的用藥安全。國(guó)外藥典未對(duì)桂利嗪原料中的有機(jī)溶劑進(jìn)行質(zhì)量控制，同時(shí)未見相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)桂利嗪原料中的殘留溶劑進(jìn)行研究。結(jié)合目前有機(jī)殘留溶劑的主要測(cè)定方法為頂空-氣相色譜法[16-22]，我們根據(jù)國(guó)際人用藥品注冊(cè)技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）的指導(dǎo)原則和《中國(guó)藥典》2020 年版四部氣相色譜法及殘留溶劑的相關(guān)規(guī)定，采用頂空-氣相色譜法對(duì)上述4 種有機(jī)溶劑的檢測(cè)條件進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試劑

氣相色譜儀：Agilent 7896，美國(guó)安捷倫科技公司；XS105 電子天平，瑞士METTLER TOLEDO 公司。甲醇對(duì)照品：LiChrosolv，l1057307943；乙醇對(duì)照品：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，20190618；丙酮對(duì)照品：天津福晨化學(xué)試劑有限公司；異丙醇對(duì)照品：山東禹王和天下新材料有限公司，2020030601；4 種對(duì)照品的純度均為100%；N,N-二甲基甲酰胺：色譜純，美國(guó)默克公司；試驗(yàn)用水為超純水；桂利嗪原料藥：批號(hào)分別為180119061、GL21901001、CIN/11171111-01。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

CP9210-wax（30 m×320 μm×1.8 μm）色譜柱，載氣：N2；流速：2 mL/min；分流比：20:1；檢測(cè)器：FID 檢測(cè)器；檢測(cè)器溫度：250 ℃；進(jìn)樣口溫度：200 ℃；進(jìn)樣方式：頂空；頂空平衡時(shí)間：30 min ；頂空加熱溫度：100 ℃；定量環(huán)溫度：105 ℃；傳輸線溫度：110 ℃；程序升溫：起始溫度為35 ℃，維持5 min，以每分鐘3 ℃的速率升溫至50 ℃，維持2 min，再以每分鐘20 ℃的速率升溫至200 ℃，維持7 min。

2.2 溶液的配置

2.2.1 供試品溶液 取桂利嗪原料藥約0.2 g，精密稱定，置于頂空瓶中，精密加N,N- 二甲基甲酰胺5 mL，振搖使溶解，壓蓋密封，作為供試品溶液。

2.2.2 對(duì)照品溶液 取甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇各適量，精密稱定，用N,N- 二甲基甲酰胺定量稀釋制成每1 mL 約含甲醇1.5 μg、乙醇66 μg、丙酮4 μg、異丙醇24 μg 的混合溶液，精密量取5 mL，置于頂空瓶中，壓蓋密封，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3 空白溶液 精密量取N,N- 二甲基甲酰胺5 mL置于頂空瓶中，壓蓋密封，作為空白溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品溶液5 mL，置于頂空瓶中，密封。進(jìn)樣，記錄氣相色譜圖，色譜圖見圖1。

精密量取N,N- 二甲基甲酰胺5 mL，置于頂空瓶中，密封。進(jìn)樣，記錄氣相色譜圖，色譜圖見圖2。與對(duì)照品溶液相比，在甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇出峰位置無(wú)FID 響應(yīng)。說(shuō)明本色譜條件下各峰之間能夠?qū)崿F(xiàn)良好分離，該方法專屬性好，能夠用于有機(jī)溶劑的檢測(cè)。

圖2 N,N- 二甲基甲酰胺溶劑氣相色譜圖

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取批號(hào)180119061 和CIN/11171111-01 樣品各約0.2 g，精密稱定，置于頂空瓶中，精密加N,N- 二甲基甲酰胺5 mL，振搖使溶解，密封。每個(gè)樣品平行制備6 份，記錄氣相色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。結(jié)果見表1。結(jié)果表明該試驗(yàn)的重復(fù)性良好。

表1 重復(fù)性結(jié)果

2.5 線性關(guān)系試驗(yàn)

取甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇各適量，精密稱定，用N,N-二甲基甲酰胺定量逐級(jí)稀釋制成標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液，分別精密量取5 mL，置于頂空瓶中，進(jìn)樣，記錄氣相色譜圖。以濃度為Y 軸，峰面積為X 軸，擬合線性方程。結(jié)果見表2。結(jié)果表明甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇的濃度在0.2 ～96 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

表2 線性及范圍測(cè)定結(jié)果

2.6 檢出限與定量限

取甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇各適量，精密稱定，用N,N- 二甲基甲酰胺定量稀釋，測(cè)定檢出限與定量限，結(jié)果見表3。

表3 檢出限與定量限測(cè)定結(jié)果

2.7 精密度試驗(yàn)

取甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇各適量，精密稱定，用N,N- 二甲基甲酰胺定量稀釋制成每1 mL 約含甲醇1.5 μg、乙醇66 μg、丙酮4 μg、異丙醇24 μg的混合溶液，精密量取5 mL，置于頂空瓶中，密封。平行制備6 份，記錄氣相色譜圖。結(jié)果見表4。結(jié)果表明該方法的精密度良好。

表4 精密度測(cè)定結(jié)果

2.8 加標(biāo)回收試驗(yàn)

取甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇各適量，精密稱定，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋成低、中、高三個(gè)濃度的混合溶液。取桂利嗪樣品（批號(hào)180119061）約0.1 g，精密稱定，精密加混合溶液5 mL，密封。每個(gè)濃度平行制備3 份。同時(shí)配制混合對(duì)照溶液，記錄氣相色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果見表5。結(jié)果表明甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇四種物質(zhì)的回收率良好，表明該方法測(cè)定桂利嗪中有機(jī)溶劑的準(zhǔn)確度高。

表5 回收率測(cè)定結(jié)果

續(xù)表

2.9 供試品測(cè)定

取桂利嗪原料藥約0.2 g，精密稱定，置于頂空瓶中，精密加N,N- 二甲基甲酰胺5 mL，密封，振搖使溶解，按上述色譜條件測(cè)定溶劑殘留，測(cè)定結(jié)果見表6。參照《中國(guó)藥典》2020 年版四部通則0861 殘留溶劑測(cè)定法中的藥品限度，甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇限度分別為0.3%、0.5%、0.5%、0.5%。3 批原料藥中殘留溶劑遠(yuǎn)低于限度要求。

表6 殘留溶劑測(cè)定結(jié)果（%）

3 討論

3.1 供試品測(cè)定結(jié)果

在供試品測(cè)定中，我們使用了3 個(gè)廠家的產(chǎn)品作為供試品，3 個(gè)廠家分別使用了3 種不同的生產(chǎn)工藝。工藝一使用了甲醇、乙醇和丙酮作為溶劑，工藝二和工藝三分別使用了乙醇和異丙醇作為溶劑。因此我們最終將甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇作為殘留溶劑進(jìn)行檢測(cè)，建立了桂利嗪中殘留溶劑甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇的檢測(cè)方法。

3.2 色譜柱的選擇

我們選擇了非極性、弱極性、中等極性和強(qiáng)極性四種不同極性的色譜柱進(jìn)行了考察，根據(jù)考察結(jié)果選擇聚乙二醇（PEG-20M）（或極性相近）為固定液的毛細(xì)管柱，使各組分按照極性由小到大的順序出峰，這樣極性相差較大的甲醇和丙酮就能夠?qū)崿F(xiàn)良好的分離，因此本試驗(yàn)選擇CP9210-wax 作為色譜柱。

3.3 升溫程序的選擇

根據(jù)文獻(xiàn)和我們的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)判斷，如果使用恒柱溫氣相色譜分析法，結(jié)果會(huì)使低沸點(diǎn)組分很快流出，峰形窄且易重疊，高沸點(diǎn)組分流出很慢，峰形扁平且拖尾，結(jié)果不利于定量測(cè)定，拖延分析時(shí)間。因此本研究采用程序升溫氣相色譜法，為了使甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇達(dá)到良好的分離，利用其沸點(diǎn)不同的特性，設(shè)定升溫程序，改變初始溫度和升溫速率來(lái)實(shí)現(xiàn)良好的分離。

3.4 頂空條件的選擇

為了使待測(cè)物能夠氣化充分，本研究選擇了頂空進(jìn)樣法，通過(guò)改變頂空瓶的平衡時(shí)間和溫度使待測(cè)物充分氣化。平衡溫度分別設(shè)定為80、100、120 ℃，平衡時(shí)間分別設(shè)定為20、30、40 min，根據(jù)交叉試驗(yàn)結(jié)果選擇100 ℃為平衡溫度，30 min 為平衡時(shí)間，待測(cè)物能夠在頂空瓶中達(dá)到平衡，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確穩(wěn)定。

綜上所述，本試驗(yàn)建立的頂空- 氣相色譜法測(cè)定桂利嗪原料藥中4 種有機(jī)溶劑的準(zhǔn)確度高，操作簡(jiǎn)單，可以有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，為相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供了參考，為企業(yè)提高藥品質(zhì)量提供了方法和參考。