臧靜愉，金艷濤，李鵬宇，楊 俊，裴金燕，郭會軍△

1 河南中醫(yī)藥大學(xué)，河南 鄭州 450003； 2 河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院艾研中心,河南 鄭州 450003

基因組學(xué)（genomics）的概念最早于1986 年由美國遺傳學(xué)家Thomas H. Roderick 提出，是對一個生物體所有基因進行集體表征和量化及不同基因組比較研究的一門學(xué)科。它主要研究整個基因組的結(jié)構(gòu)、功能、進化、定位和編輯等，并研究他們之間的相互關(guān)系及對生物體的影響，體現(xiàn)了現(xiàn)代分子生物學(xué)從局部觀走向整體觀研究［1-2］。不同的基因組其功能、基因表達形式的差異是疾病病理變化的本質(zhì)，而中醫(yī)的“證”反映的是疾病某一階段的病理變化，證候的形成與個人體質(zhì)密切相關(guān)，體質(zhì)的形成大多由先天稟賦及遺傳因素決定，因此基因組學(xué)與證候的病理形成過程必然存在某些關(guān)聯(lián)［3］。本文通過對國內(nèi)相關(guān)文獻進行定量分析，以充分了解國內(nèi)關(guān)于基因組學(xué)與中醫(yī)證候相關(guān)研究的現(xiàn)狀及發(fā)展前景，希望對該領(lǐng)域研究人員在研究方向、科研選題、方案設(shè)計等方面提供參考［4］。

1 資料來源和檢索方法

1.1 文獻來源及檢索方法主要以中國知網(wǎng)數(shù)據(jù)庫（China national knowledge infra-structure，CNKI）、萬方數(shù)據(jù)庫（Wanfang data-base，WF）、中國生物醫(yī)學(xué)文獻數(shù)據(jù)庫（China bio-logy medicine disc，CBM）、維普中文科技期刊數(shù)據(jù)庫等中文網(wǎng)數(shù)據(jù)庫為檢索對象，分別輸入檢索詞：（中醫(yī)OR 證候）AND（組學(xué)OR 系統(tǒng)生物OR 基因組學(xué)），檢索時限為建庫至2019 年12 月17 日的所有文獻。

1.2 納入標準納入：1）以人為研究對象的文獻；2）有明確的中醫(yī)證候/證型診斷的文獻；3）研究對象例數(shù)大于5 例的文獻；4）有確切檢測標本（血液、尿液、體液、組織、糞便等）的文獻；5）有明確的基因組學(xué)檢測技術(shù)的文獻；6）期刊論文。

1.3 排除標準排除：1）對于重復(fù)發(fā)表的文獻選取發(fā)表時間晚的，實驗數(shù)據(jù)較全的文獻；2）重復(fù)性研究（文章不同，但研究內(nèi)容相同）的文獻；3）綜述、個案報道、基因組學(xué)與證候相關(guān)資料無法提取或提取不全的文獻。

1.4 文獻篩選由2 位研究人員分別獨立完成，如遇分歧，與第3 人討論決定。將從數(shù)據(jù)庫中檢索到的文獻導(dǎo)入EndNoteX9 軟件，利用軟件的去重功能及人工手動方式篩選重復(fù)文獻，通過閱讀題目和摘要排除明顯不符合納排標準的文獻，再進一步閱讀全文，最終篩選出符合納入標準的文獻。

1.5 數(shù)據(jù)的提取和分析使用Excel 表格建立納入文獻信息提取表，提取論文的題目、發(fā)表年份、發(fā)表期刊、文獻類型、第一作者單位、研究機構(gòu)、疾病分類、證候分型、實驗標本、基因檢測技術(shù)、樣本量等信息并進行分析。

2 結(jié)果

2.1 檢索結(jié)果共檢索到文獻26 350篇，其中“中國知網(wǎng)”7001篇，“萬方數(shù)據(jù)庫”9790篇，“維普數(shù)據(jù)庫”4872篇，“生物醫(yī)學(xué)網(wǎng)”4687篇，刪除重復(fù)文獻后剩余12 817篇；閱讀文獻的題名和摘要后，排除11 834篇，納入文獻983篇；閱讀全文，最終納入文獻333篇。

2.2 納入文獻的基本特征

2.2.1 年份分布情況 文獻數(shù)量的多少表明了當時該領(lǐng)域的研究發(fā)展情況。從圖1 可知，2016年發(fā)表文獻最多，共29 篇（8.7%）；2000 年發(fā)表量最少，僅1 篇（0.3%）?？傮w來說，文獻發(fā)表量呈逐年上升趨勢。見圖1。

圖1 納入文獻年份分布情況

2.2.2 期刊分布情況 納入的期刊文獻共分布在118種期刊上，按2020版《北京大學(xué)核心期刊目錄》篩查，北大中文核心期刊文獻115 篇，占總文獻量的34.5%。其中，發(fā)文量大于10 篇的期刊分布情況，見表1。

表1 納入文獻大于10篇的期刊分布情況

2.2.3 第一作者單位分布情況 第一作者共分布在165個單位，發(fā)文量以醫(yī)院（221篇，66.4%）為主，其中發(fā)文最多的是廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院及廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院；而高校中，發(fā)文量居首位的是安徽中醫(yī)藥大學(xué)，其次是福建中醫(yī)藥大學(xué)和廣州中醫(yī)藥大學(xué)。見表2，圖2。

表2 中醫(yī)證候基因組學(xué)研究相關(guān)文章單位分布情況

圖2 中醫(yī)證候基因組學(xué)研究相關(guān)文章的單位分布情況

2.3 納入文獻的內(nèi)容特征

2.3.1 納入文獻疾病分類情況 根據(jù)疾病特征，現(xiàn)對納入文獻的疾病進行分組統(tǒng)計，將胃炎/胃潰瘍、腸炎、肝炎等歸為消化類；將高血壓、冠心病、心絞痛等列入循環(huán)類；將呼吸道感染、慢性阻塞性肺疾病、哮喘等歸于呼吸類；將糖尿病、經(jīng)前綜合征等歸為內(nèi)分泌類；將皮膚病、不孕癥、斑禿、艾滋病、耳聾等歸于其他類。其中，以消化類及循環(huán)類發(fā)表的文章最多，約占總文獻量的一半。見表3。

表3 納入文獻疾病分類情況

2.3.2 納入文獻檢測樣本情況 本研究文獻中，實驗標本有血液制品（血清、血漿、全血）、尿液、糞便、組織（胃黏膜組織、腸黏膜組織、子宮內(nèi)膜組織、肺組織、乳腺組織、鼻炎組織、肌肉組織、卵泡細胞）及體液（精液）。統(tǒng)計顯示，在研究基因組學(xué)中醫(yī)證候領(lǐng)域，最常用的檢測樣本為血液制品及組織，血液制品284篇（85.3%）；組織44篇（13.2%），其中胃黏膜組織26篇（7.8%），腸黏膜組織7篇（2.1%）、肺組織4篇（1.2%）等。見表4。

表4 納入文獻檢測樣本分布

2.3.3 基因組學(xué)檢測技術(shù)分布 納入文獻中，共有44 種基因檢測技術(shù)，最常用的為熒光定量PCR技術(shù)及PCR-RFLP技術(shù)，運用熒光定量PCR技術(shù)的文獻有89篇，約占總文獻量的26.7%；運用PCR-RFLP技術(shù)的文獻有76篇，約占文獻總量的22.8%。應(yīng)用次數(shù)最多的5種基因檢測技術(shù)，見圖3。

圖3 基因組學(xué)主要檢測技術(shù)分布圖

2.3.4 中醫(yī)證候分型情況 在所納入的文獻中，排名前十的中醫(yī)證型依次為：肝腎陰虛證、氣虛證、氣陰兩虛證、痰濕證、陰陽兩虛證、肝郁脾虛證、脾腎陽虛證、肝火亢盛證、氣滯血瘀證及脾胃濕熱證。其中排名前五的五種證型多見于循環(huán)系統(tǒng)疾病。消化類疾病常辨證為肝郁脾虛證、肝腎陰虛證、脾腎陽虛證、脾胃濕熱證等證候。見表5。

表5 納入文獻前十的證候及其與疾病相關(guān)內(nèi)容的分析

3 討論

本研究文獻的基本特征表明，中國國內(nèi)在運用基因組學(xué)技術(shù)研究中醫(yī)證候本質(zhì)這一領(lǐng)域中發(fā)表了很多文章。從文獻發(fā)表數(shù)量來看，整體呈上升趨勢，20 世紀初該領(lǐng)域文獻量逐年增加，這可能與中國1999 年加入人類基因組計劃有關(guān)?？偽墨I中，76%的文章發(fā)表于2008年之后，發(fā)表高峰期集中在2012年、2016年，表明近十多年來，基因組學(xué)在中醫(yī)證候中的應(yīng)用方面，引起了越來越多研究人員的關(guān)注，基因組學(xué)技術(shù)在中醫(yī)藥研究領(lǐng)域發(fā)揮著不可忽視的作用［5］。

研究文獻的期刊分布情況有助于了解相關(guān)文獻的主要情報來源［6］。本文相關(guān)文獻共分布在118種期刊上，而載文量不低于10篇的期刊僅有7種，表明目前該領(lǐng)域文獻分布范圍廣、收錄較分散、不集中。北大中文核心期刊的文章有115 篇，僅占總文獻量的34.5%，說明發(fā)表在高質(zhì)量期刊上的文獻較少，文獻質(zhì)量有待提高。文獻數(shù)量前五的期刊依次為中國中西醫(yī)結(jié)合雜志、中醫(yī)雜志、中華中醫(yī)藥雜志、遼寧中醫(yī)藥雜志、廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，說明上述這些期刊能緊跟時代潮流，掌握最新的科研成果，是基因組學(xué)技術(shù)研究中醫(yī)證候的核心期刊和主要來源，該領(lǐng)域研究人員可多關(guān)注上述雜志。

研究機構(gòu)科研水平的高低往往以發(fā)表論文的數(shù)量及質(zhì)量為標準［7］。本研究通過文獻計量分析了基因組學(xué)中醫(yī)證候研究的論文發(fā)表情況，從中可以看出，醫(yī)院為發(fā)表文獻的主要機構(gòu)，文獻量達221 篇，占總文獻量的66.4%，遠高于高校、研究院等其他研究機構(gòu)。其中發(fā)文量最多的機構(gòu)為廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院及廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，均為醫(yī)院，亦表明醫(yī)院是該領(lǐng)域研究的主要機構(gòu)。

本研究文獻的內(nèi)容特征表明，基因組學(xué)技術(shù)在中醫(yī)證候研究中已經(jīng)應(yīng)用到各個學(xué)科中，其中以消化類及循環(huán)類疾病發(fā)表的文章最多，共164篇，約占總文獻量的49.2%，可能是由于線粒體DNA 的基因突變多引起消化系統(tǒng)損傷［8］及不同基因組DNA/RNA 通過血管最先作用于心肌細胞［9］所致，或者與心血管疾病相關(guān)的基因治療方法多［10-11］有一定關(guān)系。在中醫(yī)證候研究領(lǐng)域，基因組學(xué)技術(shù)的檢測樣本有血液、組織、尿液、糞便、體液等，其中以血液制品為主，共284 篇，占總發(fā)文量的85.3%，可能與不同證候組織功能障礙和病理狀態(tài)通過血液反應(yīng)，血液中的主要成分包含遺傳物質(zhì)（染色體和基因）有關(guān)［12］，也可能與血液樣本采集較為便利有關(guān)。

在納入文獻中，基因組學(xué)在中醫(yī)證候研究領(lǐng)域分析表明，血液制品在肝腎陰虛證中使用最多，其次為氣虛證；組織樣本則在氣陰兩虛證中使用較多。而肝腎陰虛證、氣虛證多見于消化類疾病，氣陰兩虛證在內(nèi)分泌類疾病中應(yīng)用最多，說明在消化類和內(nèi)分泌類疾病中辨證分型的客觀化較其他更有優(yōu)勢。

目前的基因檢測技術(shù)種類繁多［13-14］，本研究文獻中，共有44 種檢測技術(shù)，其中使用頻率最高的為熒光定量PCR 技術(shù)及PCR-RFLP 技術(shù)，兩者皆有敏感性高、操作簡單、高效快速的特點，相較于RFLP 方法分辨率低，序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)成本高等其他檢測技術(shù)具有其特有的優(yōu)勢。熒光定量PCR 技術(shù)全程在試管內(nèi)操作，還具有污染率低的特點，且它克服了常規(guī)PCR 只能半定量的缺陷，既可以對結(jié)果定量又可進行定性［15-16］，因此深受科研、臨床工作者的青睞。

通過本次研究，了解了基因組學(xué)在中醫(yī)證候研究中的現(xiàn)狀，分析該領(lǐng)域研究的問題及發(fā)展趨勢，為今后的研究提供參考［17-18］。本次統(tǒng)計的文獻僅限于中文數(shù)據(jù)庫，且為期刊文獻，所以統(tǒng)計結(jié)果并非基因組學(xué)技術(shù)在中醫(yī)證候研究中全面的反映，還應(yīng)擴大文獻范圍，對文獻內(nèi)容進行細化分析，使其更加完善。