雷健茨，黃貴華，譚 俊，林壯燕，覃 雁，梁仁久

1 廣西中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，廣西 南寧 530299； 2 廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣西 南寧 530023

雞矢藤又名雞屎藤、臭藤，壯醫(yī)認(rèn)為其性味甜、澀、平，具有通谷道，除濕毒，祛風(fēng)毒，活血止痛的功效，用于治療圖爹病（肝脾腫大）、東郎（食滯）、心頭痛（胃痛）、白凍（泄瀉）、阿意咪（痢疾）等［1］。中醫(yī)認(rèn)為雞矢藤性味甘、微苦、微寒，歸脾、胃、肝、肺經(jīng)，具有消食健脾、化痰止咳、清熱解毒及止痛的功效［2］。藥理研究顯示，雞矢藤具有抗炎鎮(zhèn)痛、抑菌、影響胃腸道功能、抗腫瘤、降低尿酸等作用［3］。

黃貴華教授是廣西名中醫(yī)，多年從事中（壯）醫(yī)教學(xué)、臨床及科研工作，對脾胃病治療有著豐富的經(jīng)驗(yàn)，臨床上善用經(jīng)方治病。筆者用數(shù)據(jù)挖掘的方法整理跟師醫(yī)案，總結(jié)黃貴華教授治療脾胃病的處方用藥規(guī)律，為雞矢藤運(yùn)用及組方配伍提供臨床實(shí)證，并用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探索其作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 處方來源本研究以黃教授的門診病歷資料作為數(shù)據(jù)來源，選取2018 年至2020 年近3 年在廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院就診的病歷資料。中藥處方中含有雞矢藤，且診斷屬于脾胃疾病范疇。

1.2 方法將信息錄入Excel 2019，建立數(shù)據(jù)庫，利用中醫(yī)傳承計(jì)算平臺(tái)（the traditional Chinese medicine inheritance computing platform system，TCMICS）進(jìn)行藥物及癥狀分析，得到核心組方，利用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺(tái)（traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform，TCMSP）查找雞矢藤組方的有效成分及靶點(diǎn)；人類基因數(shù)據(jù)庫（GeneCards）和在線孟德爾人類遺傳數(shù)據(jù)庫（online mendelian inheritance in man，OMIM）查找疾病相關(guān)基因；取得交集的靶點(diǎn)，提交Metascape 數(shù)據(jù)平臺(tái)進(jìn)行基因功能注釋及富集通路分析，CytoScape 3.7.2 繪制雞矢藤組方成分-疾病靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖。

2 結(jié)果

2.1 基本信息共收集門診病案217 例，處方251 張。其中男性122 例，女性95 例，就診患者年齡最小為15歲，最大為87歲，其中15～25歲10例，26～35 歲4 例，36～45 歲49 例，46～55 歲52 例，56～65歲33例，66～75歲25例，76～87歲4例。

2.2 用藥信息統(tǒng)計(jì)分析藥物信息以《中華人民共和國藥典》（2015 年版）為準(zhǔn)，功效歸類參照陳蔚文主編《中藥學(xué)》［2］。251 張?zhí)幏焦灿?jì)有98 味藥，用藥情況見表1。中藥功效歸類后，按用藥頻次排序，前3 位是化濕藥（621 次共5 味）、消食藥（529 次共5 味）、補(bǔ)虛藥（300 次共14 味），見圖1。高頻藥物有雞矢藤、姜半夏、陳皮、砂仁、豆蔻等。圖1 顯示，雞矢藤多與化濕藥、消食藥及補(bǔ)虛藥配伍，協(xié)同增強(qiáng)雞矢藤消食健脾、化濕祛滯的功效，可能與黃貴華教授從溫、從虛論治脾胃疾病的學(xué)術(shù)思想和臨床經(jīng)驗(yàn)有關(guān)［4］。

表1 治療脾胃疾病處方藥物頻次 次

圖1 治療脾胃疾病處方藥物功效分布圖

2.3 疾病、四診信息統(tǒng)計(jì)分析各類胃腸炎患者為171例，消化性潰瘍22例，消化系統(tǒng)腫瘤放化療術(shù)后16例，腸易激綜合征8例。高頻癥狀有胃脹、口干、口苦、大便稀爛、寐差等，見表2。雞矢藤經(jīng)過合理配伍，既可調(diào)治常見的脾胃疾病，同時(shí)對放化療術(shù)后的不適癥狀有顯著改善作用。

表2 四診信息頻次統(tǒng)計(jì)表 次

2.4 癥狀數(shù)據(jù)挖掘分析TCMiCS 軟件中設(shè)置支持個(gè)數(shù)為9，置信度為0.8 的參數(shù)進(jìn)行癥狀分析，網(wǎng)絡(luò)拓?fù)湔故疽妶D2。“口干，口苦，噯氣→反酸”“口苦，噯氣，燒灼感→反酸”“口干，反酸，燒灼感→口苦”等是常見癥狀組合，其余癥狀組合見表3?？诟沙榻蛞汉膫驖駶醿?nèi)阻津液不能上承的表現(xiàn)；膽氣上逆則口苦，治療時(shí)往往配以疏肝利膽；燒灼感常與反酸、噯氣并見，就診者中發(fā)病部位多見于咽喉、心前區(qū)、胸骨后或胃脘部；腹脹、胃脹部位不同，但均屬腑氣不暢；胃中腐臊之氣熏發(fā)于上見口臭，雞矢藤同氣相求以濁化濁而效佳。脈滑、苔黃膩、苔白膩等舌脈信息反映雞矢藤治療的脾胃病多有濕濁為患特點(diǎn)，故臨床多與化濕藥、消食藥配伍。

表3 癥狀、四診關(guān)聯(lián)結(jié)果

2.5 方藥數(shù)據(jù)挖掘分析TCMiCS 軟件中設(shè)置支持個(gè)數(shù)為50，置信度為1，進(jìn)行方藥關(guān)聯(lián)規(guī)則分析，網(wǎng)絡(luò)拓?fù)湔故疽妶D2，與高頻藥物基本吻合。圖2 示，雞矢藤為中心，藿香、蒼術(shù)、陳皮、半夏、豆蔻、焦神曲、焦山楂關(guān)系緊密，可看成黃貴華教授藿香化濁方類方［5］，具有溫脾、燥濕、避穢的功效，黨參、白術(shù)、茯苓、炙甘草、砂仁距離較近，可以看做是四君子湯類方。TCMiCS軟件中K均值聚類將251個(gè)處方分成5類，多次計(jì)算后選擇分類清晰聚類圖展示，見圖3，核心組合見表4。分組2頻數(shù)高且靠近回歸曲線，更能反映基本類方，故取分組2進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析。

圖2 癥狀+藥物關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖

圖3 雞矢藤治療脾胃疾病藥物組方聚類圖

表4 雞矢藤治療脾胃疾病核心藥物組合 次

2.6 雞矢藤組方與脾胃常見疾病的相關(guān)靶點(diǎn)數(shù)據(jù)處理TCMSP 平臺(tái)中根據(jù)口服利用度（OB≥30%）和類藥性（DL≥0.18），共獲得雞矢藤11種、半夏13種、砂仁10 種、麥芽18 種、白術(shù)7 種活性成分，刪除重復(fù)值共50 種，其中包括槲皮素、芍藥苷、山柰酚等，利用UniProt 蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫查找基因簡寫，共得到113 個(gè)靶基因。GeneCards 數(shù)據(jù)庫和在線OMIM 數(shù)據(jù)庫收集疾病相關(guān)靶點(diǎn)后，將藥物活性成分靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)取交集，得到共同靶點(diǎn)99個(gè)。

2.7 基因本體論功能富集分析與京都基因與基因組百科全書通路的富集分析使用Metascape數(shù)據(jù)平臺(tái)對組方藥物調(diào)治脾胃疾病相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行基因本體論功能富集分析（gene ontology，GO）與京都基因與基因組百科全書（kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析，將數(shù)據(jù)結(jié)果導(dǎo)入Origin2018 進(jìn)行可視化，結(jié)果見圖4。分組2 方藥主要參與的生物過程（biological process，BP）分析有：對有毒物質(zhì)的反應(yīng)、對類固醇激素的反應(yīng)、細(xì)胞對有機(jī)環(huán)狀化合物的反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)、細(xì)胞對激素刺激的反應(yīng)、對無機(jī)物的反應(yīng)等；相關(guān)靶點(diǎn)功能（molecular function，MF）分析主要富集在轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、核受體活性、轉(zhuǎn)錄因子活性、近端啟動(dòng)子序列特異性DNA結(jié)合等；參與相關(guān)通路（KEGG）有Pathways in cancer、Hepatitis B、Prostate cancer、Apoptosis等。

圖4 雞矢藤及其組方主要成分潛在靶點(diǎn)的富集分析

2.8 雞矢藤組方成分-疾病靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖采用CytoScape 3.7.2構(gòu)建雞矢藤組方成分-疾病靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖，見圖5。通過內(nèi)置Network-Analyzer 分析參數(shù)得到核心藥物成分、關(guān)鍵作用靶點(diǎn)以及重要通路，結(jié)果見表5。CytoScape 網(wǎng)絡(luò)分析表明，槲皮素（雞矢藤）、山柰酚（雞矢藤）、刺槐素（雞矢藤）、木犀草素（麥芽），黃芩素（半夏）、及β-谷甾醇（雞矢藤、半夏、砂仁、麥芽）的連接度較高，可能是脾胃疾病治療的重要成分，具有廣泛藥理活性并涉及多個(gè)靶點(diǎn)。TP53、BCL2、RELA 等預(yù)測是雞矢藤組方調(diào)治脾胃疾病重要的靶點(diǎn)。

表5 雞矢藤組方成分-疾病靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖節(jié)點(diǎn)特征參數(shù)

圖5 雞矢藤組方成分-疾病靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖

3 討論

病例統(tǒng)計(jì)中，使用雞矢藤患者的主要診斷大部分是各種類型胃腸炎，其具有不同臨床癥狀和表現(xiàn)。黃貴華教授認(rèn)為雞矢藤具有化濁、消食、止痛、除濕及解毒之功，臨床處方用量往往達(dá)30～60 g，待患者濕邪濁氣大部分祛除后，再用溫藥養(yǎng)護(hù)脾胃之氣。分析通過K 均值聚類得到雞矢藤基本組方各藥，白術(shù)為脾家之主藥，益氣健脾，助運(yùn)化濕，既止瀉，又引津液于胃，通利大便；姜半夏善和胃降逆，化痰開結(jié)，能調(diào)中焦氣機(jī)升降，臨床可用10～30 g，與瓜蔞同用可開胸散結(jié)，與厚樸、生姜同用則能解決中氣虛弱因虛致實(shí)的脹滿；砂仁能夠納氣歸腎，其性降，配伍豆蔻能通胃納氣，正陽合陰；炒麥芽能行土木之郁，與五靈脂同用能化胃中之痛。除此之外，雞矢藤在配伍上還有諸多變化，如大便秘結(jié)不通，加大黃、瓜蔞等通腑理氣；如寐差心煩，茯苓則易為茯神；胃痛明顯或燒灼感強(qiáng)，配五靈脂、海螵蛸加止痛功效；便血或大便黏液，則加大黃炭或地榆炭收斂涼血；納食不佳或飲食積滯則佐以焦神曲、焦山楂。利用TCMiCS 平臺(tái)對民族醫(yī)藥臨床應(yīng)用進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘，可以快速展示癥狀和藥物配伍之間的聯(lián)系，達(dá)到經(jīng)驗(yàn)傳承和學(xué)術(shù)交流的目的。

利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選雞矢藤組方治療常見脾胃疾病的活性成分為槲皮素、山柰酚、木犀草素、黃芩素、β-谷甾醇及刺槐素等。槲皮素具有抗癌、抗氧化、抗炎、抗血栓、抗病毒及心血管保護(hù)等作用［6］。研究顯示槲皮素能通過影響絲裂原活化蛋白激酶p38MAPK（P38 mitogen activated protein kinase）、B 細(xì)胞淋巴瘤（B-cell lymphoma 2）和細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白BAX 水平，抑制下游的白細(xì)胞介素6（Interleukin 6，IL-6）及Caspase3 表達(dá)水平，達(dá)到抗腸道病毒的目的［7-9］。山柰酚能改善胃炎、胰腺炎和腹痛的急性炎癥和傷害性癥狀，減輕乙醇（EtOH）/HCl-和阿司匹林誘導(dǎo)的胃炎［10］。木犀草素能通過線粒體通路對胃癌細(xì)胞MGC803 產(chǎn)生較強(qiáng)的增殖抑制作用［11］。實(shí)驗(yàn)證明，黃芩素能通過抑制核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）活性來阻止中性粒細(xì)胞募集，達(dá)到抑制5-氟尿嘧啶誘導(dǎo)的結(jié)腸C-X-C基序趨化因子配體1 上調(diào)的目的，從而減少腹瀉的發(fā)生［12］。β-谷甾醇是一種常見的植物甾醇［13］，對胃十二指腸潰瘍有保護(hù)作用，在預(yù)防非甾體抗炎藥引起的潰瘍方面也有重要作用［14］。研究表明，刺槐素能夠抑制幽門螺旋桿菌的生長［15］。

篩選出的靶點(diǎn)與脾胃相關(guān)疾病的發(fā)生機(jī)制有關(guān)，如TP53 是細(xì)胞周期相關(guān)基因，在細(xì)胞增殖和凋亡過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。研究發(fā)現(xiàn)，TP53 72 號(hào)密碼子上的脯氨酸基因型，能提示胃癌的預(yù)后不良及卡培他濱+紫杉醇化療效果欠佳［16］。BCL2 是具有抑制細(xì)胞凋亡的作用蛋白，研究發(fā)現(xiàn)BCL2 基因表達(dá)的降低意味著萎縮性胃炎和腸型胃腺癌的存在［17］。RELA 的翻譯后修飾能使NF-κB的轉(zhuǎn)錄調(diào)控更精確，且有助于加強(qiáng)NF-κB對靶基因的特異性調(diào)控，在調(diào)節(jié)炎癥、腫瘤、代謝及免疫應(yīng)答等重要的生命活動(dòng)及相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用［18］。這反映了中藥具有整體協(xié)同、多靶點(diǎn)調(diào)治人體疾病的特點(diǎn)。

雞矢藤組方調(diào)治脾胃疾病的通路主要有Pathways in cancer、Prostate cancer、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）信號(hào)通路、HTLV-I infection 信號(hào)通路以及PI3K-Akt 信號(hào)通路等。所篩選的通路中具有多個(gè)下游通路，如Pathways in cancer 包括PI3K-Akt 信號(hào)通路、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）信號(hào)通路、Wnt 信號(hào)通路、HIF-1 信號(hào)通路、MAPK 信號(hào)通路等，Prostate cancer 包括PI3K-Akt信號(hào)通路、p53信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路等，TNF）信號(hào)通路包括MAPK信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路、磷脂酰肌醇3-蛋白激酶（phosphatidylinositol 3-protein kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinaseB，AKT）PI3K-Akt 信號(hào)通路等，HTLV-I infection 信號(hào)通路包括MAPK 信號(hào)通路、NF-κB 信號(hào)通路、PI3K-Akt 信號(hào)通路、TNF 信號(hào)通路等。幽門螺旋桿菌誘導(dǎo)的胃內(nèi)炎癥與胃惡性腫瘤，其途徑包括包括NF-κB、激活蛋白-1、PI3K、Wnt/β連環(huán)蛋白和環(huán)氧合酶2 等［19］。病理實(shí)驗(yàn)證明，幽門螺桿菌感染與胃癌及癌前病變黏膜組織中PI3K-Akt 通路激活密切相關(guān)［20］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，通過抑制脂多糖誘導(dǎo)的MAPK 和NF-κB 炎癥通路的激活可減輕脂多糖刺激引起的空腸炎癥因子和腫瘤壞死因子表達(dá)，改善空腸絨毛形態(tài)［21］。缺氧誘導(dǎo)因子1α（hypoxia inducible factor-1，HIF-1α）可調(diào)節(jié)機(jī)體缺氧時(shí)基因表達(dá)，能激活下游基因VEGF［22］，而VEGF 能誘導(dǎo)腫瘤血管生成，還參與上皮層外惡性細(xì)胞早期增殖，對胃癌、結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展有重要作用［23］。綜上所述，雞矢藤組方能通過槲皮素、山柰酚、木犀草素、黃芩素等有效成分，調(diào)控TP53、BCL2、RELA等靶點(diǎn)及MAPK信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路、Wnt信號(hào)通路等調(diào)治脾胃相關(guān)疾病。

本研究根據(jù)臨床實(shí)證歸納雞矢藤在治療脾胃相關(guān)疾病的用藥規(guī)律及藥物組合，為民族醫(yī)藥臨床應(yīng)用提供經(jīng)驗(yàn)參考，依托網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探究其效應(yīng)機(jī)制，收集和預(yù)測藥物的有效成分和作用靶點(diǎn)，揭示了雞矢藤核心組方通過多成分、多靶點(diǎn)參與多通路的調(diào)控，達(dá)到治療脾胃常見疾病的目的，但后期仍需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證主要調(diào)控靶點(diǎn)和通路。