劉 帥，吳 燕

（天津市藥品檢驗研究院，天津 300070）

羥丙纖維素和低取代羥丙纖維素作為藥用輔料，廣泛用于口服制劑和局部用制劑。在口服制劑中，羥丙纖維素和低取代羥丙纖維素主要用作包衣材料、黏合劑和崩解劑，并且由于具有良好的吸水性和膨脹性，通常用作口腔崩解片理想的崩解劑，也是速釋固體制劑最主要的輔料之一。在局部用制劑中，羥丙纖維素通常用于透皮貼劑和眼科制劑。此外，羥丙纖維素作為添加劑也廣泛應(yīng)用于食品和化妝品工業(yè)［1］。

羥丙氧基的含量是評價羥丙纖維素和低取代羥丙纖維素等藥用輔料質(zhì)量的重要指標(biāo)之一［2-3］。本文對羥丙纖維素和低取代羥丙纖維素供試品進(jìn)行了羥丙氧基含量測定的方法學(xué)驗證［4］，證明了該方法可用于羥丙纖維素和低取代羥丙纖維素中羥丙氧基含量測定的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 7890A 氣相色譜儀，配備自動進(jìn)樣器和氫火焰離子化（FID）檢測器（Agilent 公司）；Yamato DKN612C 型電熱干燥箱（Yamato 公司）；A10純化水系統(tǒng)（Millipore 公司）；METTLER TOLEDO XS 205 分析天平（METTLER 公司）。

1.2 試藥 2-碘丙烷對照品（Sigma-Aldrich，批號MKCL2500，標(biāo)示含量≥99%，經(jīng)氣相色譜面積歸一化法驗證純度為99.0%）；正辛烷（Alfa Aesar，批號10191342，98%）；氫 碘 酸（Acros organics，批 號A0384630，57%）；己二酸（TCI 東京化成工業(yè)株式會社，批號4WQ2MGM，＞99.0%）；鄰二甲苯（TCI 東京化成工業(yè)株式會社，批號XY860IEAD，＞98.0%）；高純氮氣（99.999%，天津六方氣體有限公司）；試驗中所用其他試劑均為分析純。羥丙纖維素和低取代羥丙纖維素樣品由天津漢瑞藥業(yè)有限公司提供，羥丙纖維素（批號NAB-2621）由日本曹達(dá)株式會社生產(chǎn)，低取代羥丙纖維素（批號210646）由安徽山河藥用輔料股份有限公司生產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 氣相色譜條件 Agilent J&W Scientific DB-624毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.53 mm，3.00 μm）；FID 檢測器；程序升溫，100 ℃保持8 min，以50 ℃/min 速率升溫至230 ℃，保持10 min；進(jìn)樣口溫度200 ℃；檢測器溫度250 ℃；載氣（氮氣）流速2.0 ml/min；尾吹氣（氮氣）流量25 ml/min；進(jìn)樣量1.0 μl，不分流進(jìn)樣。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗 理論板數(shù)按正辛烷峰計算應(yīng)不低于10 000，2-碘丙烷峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)（正辛烷）峰的分離度應(yīng)符合要求。取2-碘丙烷對照品溶液1 μl連續(xù)進(jìn)樣5 次，計算校正因子，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于3.0%。

2.3 溶液的制備

2.3.1 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取正辛烷0.5 g，精密稱定，置100 ml 量瓶中，加鄰二甲苯溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.2 供試品溶液的制備 取羥丙纖維素或低取代羥丙纖維素供試品約65 mg，精密稱定，置已稱重的反應(yīng)瓶中，加己二酸80 mg，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液與57%氫碘酸溶液各2.0 ml，密封，精密稱定，140 ℃加熱30 min 后，劇烈振搖5 min，繼續(xù)在140 ℃加熱30 min，冷卻，精密稱定，減失重量小于反應(yīng)瓶中內(nèi)容物的0.50%，且無滲漏，直接取混合液的上層液體作為供試品溶液。

2.3.3 對照品溶液的制備

2.3.3.1 對照品系列溶液的制備（羥丙纖維素測定，5點法） 取己二酸80 mg，分別置5 個已稱重的反應(yīng)瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液與57%氫碘酸溶液各2 ml，密封，精密稱定，分別加入2-碘丙烷對照品5、10、15、25 和30 mg，精密稱定，兩次稱重結(jié)果相減即為2-碘丙烷對照品的加入量。振搖約30 s，靜置，取上層液體作為對照品溶液，即得對照品系列溶液（n=5），濃度覆蓋范圍為《中國藥典》2020 年版中羥丙纖維素各論所規(guī)定的羥丙氧基含量（53.4%～80.5%）下限的80%至上限的120%。

2.3.3.2 對照品系列溶液的制備（低取代羥丙纖維素測定，5 點法） 取己二酸80 mg，分別置5 個已稱重的反應(yīng)瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液與57%氫碘酸溶液各2 ml，密封，精密稱定，分別加入2-碘丙烷對照品60、80、100、120 和150 mg，精密稱定，兩次稱重結(jié)果相減即為2-碘丙烷對照品的加入量。振搖約30 s，靜置，取上層液體作為對照品溶液，即得對照品系列溶液（n=5），濃度覆蓋范圍為《中國藥典》2020 年版中低取代羥丙纖維素各論所規(guī)定的羥丙氧基含量（5.0%～16.0%）下限的80%至上限的120%。

2.4 專屬性試驗 取供試品溶液和對照品溶液各1 μl，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液和對照品溶液的代表性色譜圖如下圖1 所示。系統(tǒng)適用性結(jié)果顯示，理論板數(shù)按正辛烷峰計算，均＞15 000，2-碘丙烷峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰之間的分離度均＞7.0。2-碘丙烷對照品溶液（對于羥丙纖維素，含量約為100 mg；對于低取代羥丙纖維素，含量約為25 mg）1 μl 連續(xù)進(jìn)樣5 次，所得2-碘丙烷峰面積與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積比值的RSD 均＜0.2%。上述結(jié)果表明該方法的系統(tǒng)適用性良好。

圖1 對照品（A）羥丙纖維素供試品（B）低取代羥丙纖維素供試品（C）典型色譜圖

2.5 線性和范圍 取“2.3.3”項下所述的對照品系列溶液各1 μl，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，以2-碘丙烷峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值作為縱坐標(biāo)（Y），以2-碘丙烷的含量（mg）作為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將2-碘丙烷的含量結(jié)果乘以系數(shù)［2-碘丙烷（分子量169.99）轉(zhuǎn)換為羥丙氧基（分子量75.09）系數(shù)為0.441 7］，即得羥丙氧基的含量。結(jié)果顯示：①羥丙纖維素，在60～150 mg（以2-碘丙烷計算）范圍內(nèi)，2-碘丙烷的含量與2-碘丙烷峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積的比值呈良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=0.023 3X+0.124 2（r=0.999 9）。按羥丙氧基計算，當(dāng)供試品取樣量為65 mg 時（以100%干燥品計），線性范圍為40.77%～101.93%（以羥丙氧基計算）；②低取代羥丙纖維素在5～30 mg（以2-碘丙烷計算）范圍內(nèi)，2-碘丙烷的含量與2-碘丙烷峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積的比值呈良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=0.023 8X+0.100 7（r=0.999 8）。按羥丙氧基計算，當(dāng)供試品取樣量為65 mg 時（以100%干燥品計），線性范圍為3.50%～21.05%（以羥丙氧基計算）。

2.6 重復(fù)性試驗 取供試品約65 mg，共6 份，按照“2.3.2”項下方法處理，依法測定。所得結(jié)果：①羥丙纖維素含量測定結(jié)果分別為61.10%、61.51%、61.66%、61.71%、60.22%和61.00%，其RSD 為0.92%；②低取代羥丙纖維素含量測定結(jié)果分別為10.33%、10.25%、10.38%、10.38%、10.43%和10.24%，其RSD為0.75%。上述結(jié)果表明該方法的重復(fù)性良好。

2.7 中間精密度試驗 在不同日期，由不同分析人員對同一批次供試品進(jìn)行分析。取供試品約65 mg，共6 份，按照“2.3.2”項下方法處理，依法測定，計算含量測定結(jié)果的RSD（n=6），并與重復(fù)性試驗結(jié)果一起計算累計RSD（n=12）。所得結(jié)果：①羥丙纖維素含量測定結(jié)果分別為61.69%、61.64%、60.44%、61.59%、60.58%和61.31%，其RSD 為0.78%，累計RSD 為0.83%；②低取代羥丙纖維素含量測定結(jié)果分別為10.27%、10.09%、10.26%、10.20%、10.31%和10.10%，其RSD 為0.89%，累計RSD 為1.02%。上述結(jié)果表明該方法的中間精密度良好。

2.8 準(zhǔn)確度試驗（回收率試驗） 取供試品約32.5 mg（即供試品65 mg 半量取樣），共6 份，精密稱定，分別置已稱重的反應(yīng)瓶中，加入適量2-碘丙烷對照品（對于羥丙纖維素，2-碘丙烷加入量為45 mg；對于低取代羥丙纖維素，2-碘丙烷加入量為10 mg），精密稱定，按照“2.3.2”項下方法處理，依法測定，計算加標(biāo)回收率，結(jié)果羥丙纖維素平均回收率為98.69%，RSD 為0.66%；低取代羥丙纖維素平均回收率為103.38%，RSD 為0.74%。見表1。結(jié)果表明該方法的準(zhǔn)確度良好。

2.9 耐用性試驗

2.9.1 供試品反應(yīng)溫度 采用不同的供試品反應(yīng)溫度進(jìn)行耐用性考查。條件1：130 ℃；條件2：140 ℃；條件3：150 ℃，其余操作條件同“2.3.2”。所得結(jié)果：①羥丙纖維素3 種條件下羥丙氧基的含量測定結(jié)果分別為61.36%、61.20%和61.13%，其RSD 為0.19%；②低取代羥丙纖維素3 種條件下羥丙氧基的含量測定結(jié)果分別為10.13%、10.33%和10.17%，其RSD 為1.04%。

表1 回收率試驗結(jié)果

2.9.2 載氣流速 采用不同的載氣流速進(jìn)行耐用性考查。條件1：1.8 ml/min；條件2：2.0 ml/min；條件3：2.2 ml/min，依法測定。所得結(jié)果：①羥丙纖維素3 種條件下羥丙氧基的含量測定結(jié)果分別為61.38%、61.20%和61.12%，其RSD 為0.22%；②低取代羥丙纖維素3 種條件下羥丙氧基的含量測定結(jié)果分別為10.14%、10.33%和10.15%，其RSD 為1.05%。

2.9.3 色譜柱升溫程序 采用不同的色譜柱升溫程序進(jìn)行耐用性考查。條件1：初始溫度90 ℃，最終溫度220 ℃；條件2：初始溫度100 ℃，最終溫度230 ℃；條件3：初始溫度110 ℃，最終溫度240 ℃，依法測定。所得結(jié)果：①羥丙纖維素3 種條件下羥丙氧基的含量測定結(jié)果分別為61.50%、61.20%和61.42%，其RSD 為0.25%；②低取代羥丙纖維素3 種條件下羥丙氧基的含量測定結(jié)果分別為10.15%、10.33%和10.12%，其RSD 為1.10%。

2.9.4 檢測器溫度 采用不同的檢測器溫度進(jìn)行耐用性考查。條件1：230 ℃；條件2：250 ℃；條件3：270 ℃，依法測定。所得結(jié)果：①羥丙纖維素3 種條件下羥丙氧基的含量測定結(jié)果分別為61.51%、61.20%和61.41%，其RSD 為0.26%；②低取代羥丙纖維素3 種條件下羥丙氧基的含量測定結(jié)果分別為10.16%、10.33%和10.17%，其RSD 為0.93%。

上述耐用性試驗結(jié)果表明，所考查試驗參數(shù)的微小變動對該方法的影響很小，選定的色譜系統(tǒng)耐用性良好。

3 討論

該方法中所使用反應(yīng)瓶的密封性必須良好，加熱和振搖反應(yīng)前后的減失重量不得超過內(nèi)容物重量的0.5%，如果超過0.5%，說明反應(yīng)生成的2-碘丙烷已揮發(fā)，需要按照方法所述重新制備供試品溶液。

綜上所述，經(jīng)驗證，該方法的線性、重復(fù)性、準(zhǔn)確度和耐用性良好，適用于羥丙纖維素和低取代羥丙纖維素中羥丙氧基的含量測定。