廖燦，阮翔，代桂全，邢高山，王美美，殷佑斗，李俊凱

（1.長江大學農學院，湖北 荊州 434025；2.江西威敵生物科技有限公司，南昌 330077）

韭菜（Allium tuberosumRottlerexSprengle.）是一種多年生宿根性辛香類蔬菜，具有較高的藥用價值和食用價值［1］。韭菜生長過程中病蟲害種類多、發(fā)生頻繁，其中以韭菜遲眼蕈蚊（韭蛆）（Bradysia odoriphagaYang et Zhang）的危害比較嚴重，而且防治較困難［2］。為防治韭菜遲眼蕈蚊危害，菜農通過根區(qū)施藥的方法進行防治，如果不能科學合理地使用農藥，可能會導致農藥殘留超標，從而影響韭菜產業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展［3］。

降解農藥殘留的主要方法包括物理降解、化學降解、生物降解等，其中化學降解包括臭氧降解法、強氧化劑氧化分解法、高級氧化降解法等，但此法主要是針對植物體外的農藥殘留降解，對進入植物體內的農藥殘留作用效果有限［4］。為了解決農藥殘留超標問題，尋找一種安全有效的方式來降低植物體內的農藥殘留成為目前種植業(yè)面臨的嚴峻挑戰(zhàn)。

蕓苔素內酯作為一種高效植物生長調節(jié)劑，生物活性高，極低的濃度就能起到促根壯苗、?；ū９淖饔?，同時也能使各種作物大幅度增產以及改善作物的品質［5］，尤其能顯著增強植物的抗逆能力［6］。蕓苔素內酯活性由高到低依次為28-高蕓苔素內酯、28-表高蕓苔素內酯、24-表蕓苔素內酯和24-混表蕓苔素內酯［5］。殷燕玲等［7，8］研究發(fā)現(xiàn)對大蒜、韭菜噴施24-表蕓苔素內酯，能明顯改善農藥對該類植物的各種毒害作用，降低植物體內的農藥殘留。為了探討28-高蕓苔素內酯的功能及對植株體內農藥殘留降解的影響，本研究以設施韭菜為材料，研究0.01% 28-高蕓苔素內酯可溶液劑對韭菜中溴氰菊酯殘留降解的影響，并探究28-高蕓苔素內酯對韭菜的最佳施用方式。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

試驗于長江大學農業(yè)科技產業(yè)園進行。

供試材料為韭菜，品種為富韭6 號。

供試農藥：溴氰菊酯，25 g/L 乳油（重慶樹榮作物科學有限公司），按照每株韭菜20 mg/L 的濃度灌根200 mL；0.01% 28-高蕓苔素內酯可溶液劑和0.04% 24-表蕓苔素內酯可溶液劑（江西威敵生物科技有限公司）。甲醇、二氯甲烷、無水硫酸鈉和氯化鈉均為市售分析純試劑，正己烷為色譜純試劑。

試驗儀器：Agilent Technologies 5975C 型氣相色譜-質譜聯(lián)用儀（配EI源，安捷倫科技有限公司）；F-080SD 型福洋牌超聲波清洗機（深圳福洋科技集團有限公司）；XD-52AA 型旋轉儀蒸發(fā)儀（上海賢德實驗儀器有限公司）；PL602E/02 型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；Centrifuge 5430 型離心機（艾本德實驗儀器有限公司）。

1.2 試驗設計

試驗設置6 個處理，均用溴氰菊酯灌根，每處理面積為2 m2。處理1，灌根前1 d 噴施清水對照（CK）；處理2，灌根前1 d 噴施稀釋500 倍的0.01%28-高蕓苔素內酯可溶液劑；處理3，灌根前1 d 噴施稀釋1 000 倍的0.01% 28-高蕓苔素內酯可溶液劑；處理4，灌根前1 d 噴施稀釋2 000 倍的0.01% 28-高蕓苔素內酯可溶液劑；處理5，灌根前1 d 噴施稀釋1 000 倍的0.04% 24-表蕓苔素內酯可溶液劑；處理6，灌根前1 d 和灌根后1 d 均噴施稀釋1 000 倍的0.01% 28-高蕓苔素內酯可溶液劑。分別于溴氰菊酯灌根后0、1、2、3、5、8、12、16 d 采樣，檢測韭菜莖葉中溴氰菊酯的殘留。

1.3 溴氰菊酯殘留測定方法

樣品前處理方法：稱取韭菜樣品10 g（精確到0.01 g）于粉碎機中，加入40 mL甲醇，高速勻漿2 min，將勻漿液完全轉入錐形瓶中，超聲10 min，抽濾，濾渣加入40 mL 甲醇繼續(xù)超聲10 min，重復3次，合并濾液于圓底燒瓶中，旋轉蒸發(fā)至近干，用二氯甲烷10 mL 和飽和氯化鈉10 mL 清洗圓底燒瓶，重復清洗3次，將清洗液轉入至250 mL 分液漏斗分液，收集二氯甲烷相。水相用二氯甲烷50 mL 分3 次萃取，合并二氯甲烷層，經無水NaSO4干燥，收集于250 mL圓底燒瓶中，減壓濃縮至近干。用二氯甲烷分3 次清洗圓底燒瓶并轉入至10 mL 刻度試管中，定容至10 mL。向10 mL 具塞塑料離心管中加入0.2 g PSA（N-丙基乙二胺）吸附劑、0.2 g C18、ODS（十八烷基）吸附劑和0.1 g Carb-GCB（石墨化碳）吸附劑混合凈化填料［9］，用移液管從定容后的10 mL 刻度試管中準確移取5 mL至離心管中，超聲振蕩5 min，7 000 r/min離心6 min后，用5 mL 移液管移取2 mL 上清液至10 mL 刻度試管中，50 ℃水浴氮吹至近干，用正己烷定容至1 mL，過0.22 μm 濾膜后上GC-MS 檢測。

檢測條件：色譜柱為DB-5MS 毛細管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；柱溫采用程序升溫：70 ℃保持2 min，25 ℃/min 升溫至150 ℃，3 ℃/min 升溫至200 ℃，再8 ℃/min 升溫至280 ℃保持10 min；高純氦氣作為載氣，恒流1.0 mL/min；進樣口溫度250 ℃，進樣方式為脈沖不分流，進樣量為2.00 μL。離子化方式為EI，接口溫度為285 ℃，離子源溫度為230 ℃，四級桿溫度為150 ℃，溶劑延遲為3.5 min，調諧方式為自動調諧，采集方式為選擇性離子檢測（SIM）。

2 結果與分析

2.1 標準曲線和回收率

分別配 制0.050 0、0.100 0、0.200 0、0.400 0、1.000 0 mg/L 的溴氰菊酯標準溶液，得到溴氰菊酯標準曲線為y=43 628x-2 618.5，相關系數(shù)r2=0.986 9。

在韭菜樣品中進行添加回收試驗，添加水平分別為0.1、0.2、0.4 mg/kg，每個水平分別設置3 個平行樣品和1 個空白對照，可得平均回收率和相對標準偏差（RSD）（表1）。由表1 可以看出，溴氰菊酯的平均回收率為94.18%～113.35%，RSD＜5%，符合農藥殘留檢測的回收率和RSD要求。

表1 溴氰菊酯的添加回收試驗結果（n＝3）

2.2 0.01% 28-高蕓苔素內酯和0.04% 24-表蕓苔素內酯對韭菜中溴氰菊酯降解效果的影響

0.01% 28-高蕓苔素內酯和0.04% 24-表蕓苔素內酯處理后，韭菜中溴氰菊酯的殘留檢測結果見圖1。由圖1 可以看出，在溴氰菊酯灌根前1 d，噴施稀釋1 000 倍的0.01% 28-高蕓苔素內酯處理后的韭菜中溴氰菊酯殘留量除灌根后3、5 d 外均低于清水對照；噴施稀釋1 000 倍的0.04% 24-表蕓苔素內酯處理后的韭菜中溴氰菊酯殘留量只在噴施溴氰菊酯后1、5、16 d 低于清水對照；稀釋1 000 倍的0.01%28-高蕓苔素內酯處理、稀釋1 000 倍的0.04%24-表蕓苔素內酯處理和清水對照中的溴氰菊酯殘留量均在溴氰菊酯灌根后1 d 達到最大值，分別為0.046 0、0.050 4 和0.057 3 mg/kg，均低于最大殘留限量0.2 mg/kg［10］。灌根溴 氰菊酯 后1 d，噴施稀 釋1 000 倍的0.01% 28-高蕓苔素內酯處理的韭菜中溴氰菊酯殘留量較對照降低了19.72%。因此，藥前噴施0.01% 28-高蕓苔素內酯在溴氰菊酯灌根1 d 后能有效降低韭菜中溴氰菊酯殘留量，0.01% 28-高蕓苔素內酯對溴氰菊酯的降解效果整體優(yōu)于24-表蕓苔素內酯。

圖1 0.01%28-高蕓苔素內酯和0.04%24-表蕓苔素內酯對韭菜中溴氰菊酯殘留量的影響

2.3 0.01% 28-高蕓苔素內酯使用次數(shù)對韭菜中溴氰菊酯降解效果的影響

噴施不同次數(shù)的0.01% 28-高蕓苔素內酯，韭菜中溴氰菊酯的殘留檢測結果見圖2。由圖2 可以看出，噴施1 次0.01% 28-高蕓苔素內酯的韭菜在溴氰菊酯灌根后0～2 d、12～16 d 的溴氰菊酯殘留量均低于清水對照，噴施2 次0.01% 28-高蕓苔素內酯的韭菜溴氰菊酯殘留量只在溴氰菊酯灌根后5 d 低于清水對照，噴施1 次0.01% 28-高蕓苔素內酯處理、噴施2 次0.01% 28-高蕓苔素內酯處理和清水對照的溴氰菊酯殘留量均在灌根后1 d 達到最大值，分別為0.046 0、0.058 3、0.057 3 mg/kg，均低于最大殘留限量0.2 mg/kg。因此，藥前噴施0.01% 28-高蕓苔素內酯1 次在溴氰菊酯灌根后1 d 能有效降低韭菜中溴氰菊酯殘留量，灌根前噴施0.01% 28-高蕓苔素內酯1 次對溴氰菊酯的降解效果優(yōu)于灌根前、灌根后噴施0.01%28-高蕓苔素內酯2 次。

圖2 0.01%28-高蕓苔素內酯使用次數(shù)對韭菜中溴氰菊酯殘留量的影響

2.4 0.01% 28-高蕓苔素內酯稀釋倍數(shù)對韭菜中溴氰菊酯降解效果的影響

噴施不同稀釋倍數(shù)的0.01% 28-高蕓苔素內酯后，韭菜中溴氰菊酯的殘留檢測結果見圖3。由圖3可以看出，用稀釋500 倍的0.01% 28-高蕓苔素內酯處理的韭菜中溴氰菊酯殘留量在溴氰菊酯灌根后1、2、16 d 均低于對照，用稀釋1 000倍的0.01%28-高蕓苔素內酯處理的韭菜中溴氰菊酯殘留量在溴氰菊酯灌根后0～2 d、12～16 d 均低于對照，用稀釋2 000 倍的0.01% 28-高蕓苔素內酯處理的韭菜中溴氰菊酯殘留量只在溴氰菊酯灌根后1 d 低于對照，稀釋500、1 000、2 000 倍的0.01% 28-高蕓苔素內酯處理和清水對照的溴氰菊酯殘留量均在溴氰菊酯灌根1 d后達到最大值，但均低于最大殘留限量0.2 mg/kg，分別為0.047 6、0.046 0、0.052 2、0.057 3 mg/kg，溴氰菊酯灌根后1 d，稀釋1 000 倍的0.01% 28-高蕓苔素內酯處理韭菜中溴氰菊酯殘留量顯著低于清水對照和稀釋2 000 倍的0.01% 28-高蕓苔素內酯處理，與稀釋500 倍的0.01% 28-高蕓苔素內酯處理之間差異不顯著。因此，溴氰菊酯灌根前1 d 用稀釋1 000倍的0.01% 28-高蕓苔素內酯處理韭菜能更有效地降低韭菜中溴氰菊酯殘留量。

圖3 0.01%28-高蕓苔素內酯稀釋倍數(shù)對韭菜溴氰菊酯殘留量的影響

3 小結與討論

通過比較0.01% 28-高蕓苔素內酯可溶液劑和0.04% 24-表蕓苔素內酯可溶液劑、0.01% 28-高蕓苔素內酯可溶液劑使用次數(shù)、0.01% 28-高蕓苔素內酯可溶液劑稀釋倍數(shù)對韭菜中溴氰菊酯殘留降解的影響，表明0.01% 28-高蕓苔素內酯可溶液劑在稀釋1 000 倍、溴氰菊酯灌根前1 d 處理韭菜的條件下，對韭菜中溴氰菊酯的降解效果最佳，且效果優(yōu)于同等條件下的0.04% 24-表蕓苔素內酯可溶液劑。適量濃度的0.01% 28-高蕓苔素內酯在溴氰菊酯灌根后1 d 能有效加快韭菜葉片中溴氰菊酯的降解速率，減少韭菜葉片中的農藥殘留量。清水對照韭菜中溴氰菊酯殘留量在灌根后5 d 增加的原因可能是因為在整個采樣期間5 d 時相對濕度最低，植株蒸騰拉力較大［11］，導致植株根部更強的吸收。0.01%28-高蕓苔素內酯可加速溴氰菊酯殘留的降解，其機制可能與其激發(fā)植物體內的解毒機制有關［12］。本研究結果表明，外源噴施0.01% 28-高蕓苔素內酯在降低韭菜莖葉中溴氰菊酯的殘留方面有較好的效果，且在施用0.01% 28-高蕓苔素內酯2 d 后韭菜中溴氰菊酯的降解速率有明顯的加快，因此，在韭菜采收前噴施適當劑量的0.01% 28-高蕓苔素內酯能夠加快溴氰菊酯殘留的降解，縮短韭菜的安全間隔期。

0.01% 28-高蕓苔素內酯不同施用次數(shù)和稀釋倍數(shù)會導致其對溴氰菊酯的降解效果有一定的差異，0.01% 28-高蕓苔素內酯在促進韭菜中溴氰菊酯降解效果上總體作用較明顯，表明0.01% 28-高蕓苔素內酯在溴氰菊酯降解應用上的靈活性。為了提升農產品的安全質量，可以噴施合適劑量的0.01%28-高蕓苔素內酯，既能夠促進農作物的生長，又能夠提高產量，還能夠降低韭菜中的溴氰菊酯殘留量，在韭菜生產中可以推廣應用，實現(xiàn)無公害韭菜生產。