蘇興海

（招遠市動物疫病預(yù)防控制中心 山東煙臺 265400）

禽白血?。╝vian leukosis，AL）是養(yǎng)雞業(yè)中主要的病毒性傳染病之一，該病主要由不同亞群（A～E、J、K）的禽白血病病毒（avian leukosis virus，ALV）引起以多種內(nèi)臟器官中多種細胞腫瘤為主要臨床特征的一類病毒傳染性疾病[1]。相關(guān)研究表明ALV 可以感染不同的雞群（祖種雞、父母代雞、商品代雞等），當不同的雞群感染該病毒后可以導(dǎo)致機體嚴重的機體免疫（細胞免疫與體液免疫）抑制，導(dǎo)致相關(guān)疫苗免疫失敗，同時導(dǎo)致雛雞的生長緩慢與抑制，使其母雞導(dǎo)致性成熟延遲與生殖系統(tǒng)器官生長不良，嚴重影響其種雞的產(chǎn)蛋率、種蛋受精率及孵化率，嚴重者可以導(dǎo)致其死亡[2,3]。臨床中ALV 沒有有效疫苗免疫接種和藥物預(yù)防，且在雞群中可以通過多種傳播方式進行傳播，尤其是可以通過垂直傳播（經(jīng)卵傳播）代代相傳，且成為水平傳播的主要來源，對養(yǎng)雞業(yè)危害較高[4]。ALV被列為《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020 年）》中重要的凈化和消除的疾病，因此，對種雞場中ALV 進行有效的控制、凈化具有重要的意義。臨床中對ALV 檢測方法具有很多種，如RT-PCR方法、PCR 方法、雞胚成纖維細胞接種法、免疫熒光試驗、病毒分離鑒定、酶聯(lián)免疫吸附試驗（EILSA）等多種方法用于其中用ALV 的臨床檢測，其在臨床中檢測最常用的、簡單的方法就是EILSA 檢測，EILSA 檢測主要用于檢測ALV p27 抗原最常見，該方法主要用于種雞場祖代雞、父母代及商品蛋雞的ALV 的檢測[5-7]。為了解招遠地區(qū)規(guī)模化種雞場中祖種雞、父母代雞及種蛋中禽白血?。ˋLV）攜帶情況及流行亞群，用EILSA 方法對采集的樣品進行ALV p27抗原及亞群的檢測。為地區(qū)規(guī)?；N雞場中ALV 凈化和防控提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病料來源

2020—2022 年采集招遠地區(qū)規(guī)模化種雞場中肛拭子、血清及蛋清樣品1 375 份品（表1），其中2020 年采集組織樣品（肛拭子、血清、蛋清）431 份、2021 年采集組織樣品（肛拭子、血清、蛋清）462份，2022 年采集組織樣品（肛拭子、血清、蛋清）482 份。

表1 樣品采集統(tǒng)計結(jié)果

1.2 病料組織的處理

將采集自招遠地區(qū)規(guī)模化種雞場中的肛拭子、血清及蛋清樣品1 375 份樣品進行處理，肛拭子樣品用中等量的無菌PBS 進行高速離心（12 000 r/min 10 min）后取上清分裝，血液用離心形式進行制備血清，蛋清樣品進行分裝，處理完的樣品在-80 ℃低溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 ALV p27 抗原

按照EILSA 檢測ALV p27 抗原試劑盒說明書對采集自招遠地區(qū)規(guī)?；N雞場中的肛拭子、血清及蛋清樣品1 375 份樣品進行處理，將處理過的樣品進行反復(fù)凍融3～5 次后進行ALV p27 抗原和亞群檢測，并分析其感染率。

1.3 ALV 亞群檢測

對采集自招遠地區(qū)規(guī)模化種雞場中的肛拭子、血清及蛋清樣品1,375 份樣品中ALV p27 抗原檢測陽性樣品，按照EILSA 檢測ALV 亞群（A、B、C、D、E、J）試劑盒說明書進行ALV 亞群檢測，并分析其ALV p27 抗原檢測陽性樣品的亞群攜帶情況。

2 結(jié)果

2.1 ALV p27 抗原的檢測結(jié)果

對2020 年采集的組織樣品（肛拭子、血清、蛋清）431 份、2021年采集的組織樣品（肛拭子、血清、蛋清）462 份，2022 年采集的組織樣品（肛拭子、血清、蛋清）482 份等樣品進行ALV p27 抗原陽性率在不同種類樣品感染情況統(tǒng)計，結(jié)果由表2 可知，2020—2022 年共計采集1 375 份樣品，檢測的陽性樣品243 份，陽性率為17.8%，2020—2022 年中肛拭子、蛋清的ALV p27 抗原陽性率均高于血清的ALV p27 抗原陽性率，且呈現(xiàn)逐年上升的趨勢。

表2 ALV p27抗原的檢測結(jié)果

2.2 ALV 亞群的檢測結(jié)果

對2020 年采集的組織樣品（肛拭子、血清、蛋清）431 份、2021年采集的組織樣品（肛拭子、血清、蛋清）462 份，2022 年采集的組織樣品（肛拭子、血清、蛋清）482 份等樣品進行ALV 亞群的測定，并統(tǒng)計在（肛拭子、血清、蛋清）樣品中的分布情況。結(jié)果由表3 可知，2020—2022 年中規(guī)?；N雞場中ALV 亞群流行情況有A/B 亞群、J 亞群2 種亞群，檢測率分別為14.%、85.6%，以ALV J 亞群流行為主，2020—2022 年中肛拭子、蛋清的ALVA/B 亞群的檢測率也出現(xiàn)升高的趨勢。

表3 ALV亞群的檢測結(jié)果

3 討論

禽白血病是養(yǎng)雞業(yè)中常見免疫抑制的疾病之一，該病的檢測方法很多如酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、RT-PCR、間接免疫熒光（IFA）等[7,8]。許多研究表明，采用ELISA 檢測ALV p27 抗原是最有效的檢測方法，該ELISA 法具有快捷、便于操作、敏感性高并且適用于大面積檢測，因此，在種雞群中ALV 檢測與凈化中廣泛應(yīng)用[9]。相關(guān)研究表明在我國不同的種雞場中禽白血病病毒主要有6 種亞群（A、B、C、D、E、J）流行，其中最常見的亞群為A/B 亞群和J 亞群，但是禽白血病病毒其他的亞群也逐漸出現(xiàn)[10]。目前ALV 沒有有效的預(yù)防與治療的方法，主要通過檢測，淘汰陽性的種雞群，建立健康的種雞群。相關(guān)研究表明ALV 在我國雞場中廣泛流行。李珂等[11]研究表明云南省滇東、滇西、滇中、滇南和滇北5 個區(qū)域8 個地方品種雞群的2 295 份血清樣品進行了禽白血病病毒（ALV）檢測，結(jié)果表明，ALV 檢出率為27.02%。邢林林等[10]報道了從山東地區(qū)采集7 個種雞場的1 000 份蛋清，用ELISA 方法檢測蛋清的ALV p27 抗原，1 298 份血清樣品進行ALV-A/B 和ALV-J 亞群的攜帶情況的檢測，結(jié)果顯示，山東地區(qū)采集7 個種雞場中的1 000 份蛋清ALV p27 抗原檢測的陽性率為0.1%～1.0%之間，1 298 份血清樣品中A/B 亞群陽性率為6.39%、ALV-J 亞群陽性率為19.80%。張浩等[9]報道了伊犁河谷地區(qū)不同來源黃羽父母代肉種雞禽白血病病毒以A/B 亞群和J 亞群感染為主。本試驗研究表明，2020—2021 年采集1 375 份樣品中ALV 陽性率為17.8%，且肛拭子、蛋清的ALV p27 抗原陽性率均高于血清，且呈現(xiàn)逐年上升的趨勢，說明該地區(qū)規(guī)?；N雞場中ALV 流行嚴重，應(yīng)該引起注意，定期進行檢測，淘汰陽性雞群，進行有效的綜合防控。國內(nèi)外相關(guān)研究表明，ALV 以J 亞群流行為主，本研究通過ALV 亞群的檢測，該地種雞場中ALV 的A/B 亞群、J 亞群檢測率分別為14.%、85.6%，以ALV J 亞群流行為主，且ALV 的A/B 亞群的檢測率呈逐年上升的趨勢。因此，在以后防控注意A/B 亞群的凈化。