孟 磊，湯智德，謝安強(qiáng)*，林 晗，沈 雯，簡(jiǎn)靈靜

（1. 福建農(nóng)林大學(xué)林學(xué)院，福州 350002；2. 福建省高校森林生態(tài)系統(tǒng)經(jīng)營(yíng)與過程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福州 350002；3. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，武漢 430070）

植物和內(nèi)生菌的互作關(guān)系是近年來的熱點(diǎn)研究之一，內(nèi)生真菌及其次生代謝物和植物的作用關(guān)系和生態(tài)效應(yīng)機(jī)制也在研究中，這些研究對(duì)植物的有效生長(zhǎng)、保護(hù)和抗逆性有積極作用。植物中的微生物種類很多，其中大部分微生物都是對(duì)植物有利的。植物在所有營(yíng)養(yǎng)水平上與微生物相互作用，在復(fù)雜的群落成員網(wǎng)絡(luò)中適應(yīng)生長(zhǎng)，發(fā)育和防御反應(yīng)[1]。

微生物在正常的生活條件中，往往是混合存在的，不同種微生物的混合，菌株與菌株之間通過相互作用，協(xié)同或拮抗作用，能夠達(dá)到“1+1＞2”的效果，因此有必要對(duì)混合菌進(jìn)行研究，發(fā)揮出混合菌的最大效益[2]?；旌蟽?nèi)生真菌之間可以分泌更多的次生代謝產(chǎn)物，相比較于單株菌，對(duì)植物的生理活動(dòng)、化學(xué)反應(yīng)具有更大的影響[3]。造成這種現(xiàn)象的原因，可能是單株菌的生長(zhǎng)過程單一，缺少與其他微生物競(jìng)爭(zhēng)、共存等生物過程，然而混合菌卻不一樣，多種微生物共同生存在同一生存空間中，菌與菌之間會(huì)有大量的物質(zhì)交換、競(jìng)爭(zhēng)或協(xié)同等作用，從而混合菌的生存更具有活力[4]。蘇經(jīng)遷等[5]混合了茶樹內(nèi)生真菌，研究發(fā)現(xiàn)混合培養(yǎng)黃綠木霉、黑曲霉和綠色木霉，一段時(shí)間后，混合菌具有較高的纖維素酶含量，該酶在畜牧業(yè)和飼料工業(yè)中得到廣泛應(yīng)用。陳應(yīng)龍等[6]對(duì)尾葉桉接種了混合了內(nèi)生真菌，研究發(fā)現(xiàn)混合菌能夠影響根系活力、根系IPA、ABA的含量，對(duì)根系生理活性具有較大的影響。但并不是混合菌株的促生效果一定高于單個(gè)菌株，菌株相互之間不僅有促進(jìn)作用還有拮抗作用[7]。林晗等[8]研究發(fā)現(xiàn)，千年桐接種毛霉菌屬和木霉菌屬的混合菌，其對(duì)于養(yǎng)分吸收作用效果沒有單株菌明顯。光合作用的效率和強(qiáng)度對(duì)植物的生長(zhǎng)和許多生理過程都會(huì)有很大的影響，所以使光合作用作為促進(jìn)植物生長(zhǎng)的重要指標(biāo)。植物內(nèi)生菌長(zhǎng)期寄生在植物體中，與植物共存了較長(zhǎng)的時(shí)間，會(huì)直接或間接影響植物光合作用[9]。Ban Y. H.等[10]研究發(fā)現(xiàn)，鉛脅迫下接種深色有隔內(nèi)生真菌 (DSE) 能促進(jìn)玉米生長(zhǎng),增強(qiáng)其光合作用,提高礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)含量,同時(shí)增強(qiáng)了玉米對(duì)鉛的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)能力。王凱等[11]研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)生真菌可顯著改善布頓大麥植株在堿脅迫條件下的光合作用和生理耐受能力。

杉木作為亞熱帶森林中最具優(yōu)勢(shì)的經(jīng)濟(jì)樹種，栽植面積廣[12]。對(duì)該樹種的良種選育到培育管理的優(yōu)化一直都在進(jìn)行。而微生物-杉木互作的研究引起越來越多的關(guān)注。為了進(jìn)一步探索單株內(nèi)生真菌和混合內(nèi)生真菌對(duì)杉木幼苗生長(zhǎng)發(fā)育的影響，本試驗(yàn)選取1 a 生杉木幼苗作為試驗(yàn)材料，施加單株內(nèi)生真菌和混合內(nèi)生細(xì)菌，研究混合內(nèi)生真菌和單株內(nèi)生真菌對(duì)杉木幼苗的促生效果。為提高杉木的生長(zhǎng)速度和緩解杉木生產(chǎn)力下降提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 研究區(qū)域與樣地概況

本試驗(yàn)主要完成于福建農(nóng)林大學(xué)的森林生態(tài)系統(tǒng)過程與經(jīng)營(yíng)重點(diǎn)試驗(yàn)室，杉木幼苗栽植于福建農(nóng)林大學(xué)田間試驗(yàn)地。該地位于東經(jīng)118°08＇～120°31＇，北緯25°15＇～26°39＇，此地氣候?yàn)閬啛釒Ъ撅L(fēng)氣候，受到海陸氣溫差異和西伯利亞的寒風(fēng)交替影響，形成了冬夏干濕差別不大，夏季高溫多雨，冬季溫和少雨的氣候特點(diǎn)。年平均日照數(shù)為1 700～1 980 h；年平均降水量為900～2 100 mm；年平均氣溫為20～25 ℃。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

菌液制備：所有菌株都由實(shí)驗(yàn)室前期從杉木中提取而來。使用馬鈴薯葡萄糖水培養(yǎng)基（PDB），將篩選得到的促生菌接入三角瓶中，放于恒溫振蕩培養(yǎng)箱，于28 ℃、180 r/min 的條件下，搖培3～4 d。使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)算菌液濃度，配制成濃度為5.5×106cfu/mL的菌液。菌株S22（CCTCC NO.2020009）、S24（CCTCC NO.2020008）已在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心進(jìn)行保藏，并已申請(qǐng)專利。

本試驗(yàn)采用土培盆栽試驗(yàn)，由福建省連城邱家山國(guó)有林場(chǎng)提供的020號(hào)無性系1 a生杉木幼苗,共200 株，株高均約為30 cm。選擇長(zhǎng)勢(shì)一致的55 株苗木定植于規(guī)格為直徑20 cm、高40 cm 的花盆中，所用土壤是經(jīng)過甲醛熏蒸滅菌后的黃心土，栽植時(shí)，嚴(yán)格控制每盆土的質(zhì)量為4 kg。對(duì)幼苗進(jìn)行定植，保證2個(gè)月的恢復(fù)性生長(zhǎng)。將4株強(qiáng)勢(shì)菌和6種混合菌配置成100 mL 菌液，混合菌菌液配置比為1∶1，從植物頂端施澆，確保植物葉片、莖干、根部以及土壤中均有菌液，在第30天進(jìn)行一次內(nèi)生真菌侵染液補(bǔ)增。接種后，按時(shí)按計(jì)劃測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)的變化情況。一共設(shè)置11 個(gè)處理，每個(gè)處理5 個(gè)重復(fù)，依次為（表1）：空白對(duì)照（CK）、菌株S10、S22、S24、S38、S10×S22、S10×S22、S10×S38、S22×S24、S22×S38和S24×S38，共55 株杉木幼苗。盆栽試驗(yàn)整個(gè)周期處于室外自然環(huán)境下，試驗(yàn)中不進(jìn)行任何營(yíng)養(yǎng)施肥，試驗(yàn)期間進(jìn)行正常的苗木培養(yǎng)。

表1 促生菌以及混合菌組合結(jié)果Table 1 Results of combination of probiotics and mixed bacteria

1.3 測(cè)定方法

1.3.1 內(nèi)生真菌定殖檢測(cè)

取試驗(yàn)杉木幼苗的根系，用純水洗凈根系周圍的土壤，用脫脂棉搽干水分后，將根系剪為長(zhǎng)度約0.5～1.0 cm的若干小段，放進(jìn)裝有儲(chǔ)存緩沖液（99%乙醇∶60%乙酸=3∶1）的燒杯中，4 ℃冰箱保存。用純水沖洗根系，將儲(chǔ)存緩沖液沖洗掉；將洗凈的根系放于5 mL 的離心管中，加入2%KOH，液面覆蓋全部根系，在96 ℃的水浴鍋中加熱20 min。用純水沖洗根系，將2%KOH沖洗掉，然后加入2%HCl，液面覆蓋全部根系，在96 ℃的水浴鍋中加熱20 min。用純水沖洗根系，將2%HCl 沖洗掉，加入臺(tái)盼藍(lán)染色溶液（乳酸∶甘油∶純水：0.05%臺(tái)盼藍(lán)=1∶1∶1），并在96 ℃的水浴鍋中加熱20 min，用于染色。用純水沖洗根系，將染色液沖洗掉，加入脫色溶液（乳酸∶甘油∶純水=1∶1∶1），放置1～2 h。將脫色好的根系整齊排列在載玻片上，并放上蓋玻片，輕微按壓蓋玻片，除去其中的氣泡，用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察。

1.3.2 苗高地徑測(cè)定

施澆菌液后，測(cè)量初始和第60 天苗高和地徑（距離地面5 cm處）。

1.3.3 生物量測(cè)定

起苗并用純水沖洗幼苗，除去幼苗葉片表面的污漬和根系上附著的土壤。將地上和地下部分分開，稱取鮮重W1；準(zhǔn)備若干信封袋，將杉木幼苗裝入信封袋放進(jìn)105 ℃烘箱，30 min；調(diào)整烘箱溫度為80 ℃，取出杉木幼苗按時(shí)稱取重量并記錄，重復(fù)這項(xiàng)工作直到與上次記錄保持不變，稱取干重W2。

1.3.4 葉綠素含量測(cè)定

葉綠素含量測(cè)定采用丙酮乙醇提取法，具體參考張憲政等[13]試驗(yàn)方法。每個(gè)處理選取3 株杉木，取其上部1片完全展開的葉片，取0.1 g干凈新鮮的葉片放進(jìn)裝有20 mL提取液（丙酮∶乙醇∶純水=4.5∶4.5∶1）的三角瓶中。封口后，放在暗處反應(yīng)12 h，于663 nm 和645 nm 下測(cè)定上清液的吸光值。在施澆菌液后，分別于15、30、45 和60 d 采集杉木幼苗葉片，并按以下方法測(cè)定其葉片內(nèi)葉綠素含量：

葉綠素a質(zhì)量濃度=12.2×OD663-2.83×OD645；

葉綠素b質(zhì)量濃度=20.11×OD645-5.02×OD663；

葉綠素含量(mg/g)=葉綠素a 或b 的質(zhì)量濃度(mg/L)×提取液總量(mL)/葉片鮮質(zhì)量×1 000。

1.3.5 葉綠素?zé)晒馓匦詼y(cè)定

葉綠素?zé)晒鈪?shù)的測(cè)定時(shí)間是太陽光充足的早上9：00-11：00，光源穩(wěn)定；測(cè)量?jī)x器使用Handy Fluor Cam 熒光成像儀，測(cè)量初始熒光（F0）、PSⅡ最大光化學(xué)量子產(chǎn)量（Fv/Fm），每株杉木幼苗重復(fù)測(cè)試3次。

1.4 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)的整理工作由Microsoft Excel 2010 完成，數(shù)據(jù)的分析工作由SPSS 21.0完成，相關(guān)圖像由Origin 9.0完成。

2 結(jié)果與分析

2.1 內(nèi)生真菌在杉木幼苗體內(nèi)定殖情況

由圖1 可知，在杉木根系細(xì)胞中觀察到內(nèi)生真菌S10、S22、S24 和S38 的菌絲。該結(jié)果表明，在施澆菌液的15 d 后，4 株內(nèi)生真菌在杉木幼苗根部定殖成功。

圖1 菌株侵染植物結(jié)果Figure 1 Results of strains infecting plants

2.2 混合內(nèi)生真菌對(duì)杉木幼苗苗高地徑的影響

由表2 可知，接種內(nèi)生真菌的絕大部分杉木幼苗在苗高生長(zhǎng)和地徑生長(zhǎng)上的增長(zhǎng)率高于未接種內(nèi)生真菌的杉木幼苗，且地徑增長(zhǎng)率均高于苗高增長(zhǎng)率。苗高和地徑生長(zhǎng)方面，接種混合菌S22×S38的杉木幼苗分別在苗高和地徑的增長(zhǎng)率上都顯著大于接種其他單株菌株、混合菌在和空白對(duì)照組，其相對(duì)于空白對(duì)照組的增長(zhǎng)率分別為11.01%和18.99%。菌株S24 能夠顯著促進(jìn)地徑的生長(zhǎng)，相對(duì)于空白對(duì)照組的增長(zhǎng)率為15.66%，在促進(jìn)苗高生長(zhǎng)方面沒有明顯優(yōu)勢(shì)。S10×S22對(duì)地徑生長(zhǎng)的增長(zhǎng)率的影響也分別大于S10和S22單菌的促進(jìn)效果。

表2 混合內(nèi)生真菌對(duì)杉木幼苗苗高和地徑的影響Table 2 Effects of mixed endophytic fungi on seedling height and ground diameter of C. lanceolata seedlings

2.3 混合內(nèi)生真菌對(duì)杉木幼苗生物量的影響

由表3 可知，接種混合菌S10×S22 和3 株單菌S22、S24、S38的杉木幼苗的地下干重值顯著大于空白對(duì)照組（P＜0.05），分別高出空白對(duì)照組55.57%、58.57%、53.74%和57.40%，說明其能夠促進(jìn)杉木幼苗的根系的生長(zhǎng)以及有機(jī)物質(zhì)的積累。接種內(nèi)生真菌的杉木幼苗的根冠比和空白對(duì)照組差異顯著（P＜0.05），且大于空白對(duì)照組，唯有接種S10菌株的杉木幼苗的根冠比小于空白對(duì)照組。接種混合菌S10×S22的杉木幼苗的根冠比顯著大于接種其他菌的幼苗和空白對(duì)照組。接種3 株單菌S22、S24、S38的3株幼苗相對(duì)于空白對(duì)照組也有顯著的促進(jìn)作用（P＜0.05），其根冠比值小于混合菌S10×S22，但是大于其他任意的混合菌組合。其他混合菌組合的根冠比值也是顯著高于空白對(duì)照組（P＜0.05）?；旌暇鶶10×S22 和3 株單菌S22、S24、S38 都可以促進(jìn)杉木幼苗根系生長(zhǎng)和有機(jī)物的積累，其中混合菌S10×S22的促進(jìn)效果相對(duì)于單一菌較好。

表3 混合內(nèi)生真菌對(duì)杉木幼苗生物量和根冠比的影響Table 3 Effects of mixed endophytic fungi on biomass and root-shoot ratio of C. lanceolata seedlings

2.4 混合內(nèi)生真菌對(duì)杉木幼苗葉綠素含量的影響

葉綠素在植物光合作用中的光吸收過程中十分重要，葉綠素的含量與光合作用強(qiáng)弱與效率有著密切的關(guān)系。由圖2 可知，在15～60 d 中，接種混合菌S22×S38、S24×S38的杉木幼苗葉綠素含量都大于空白對(duì)照組，增長(zhǎng)率分別為：S22×S38（11.19%、22.64%、16.52% 和10.79%）和S24×S38（14.32%、15.66%、10.76% 和10.89%）?；旌暇鶶10×S38 和S22×S24在45～60 d的階段中葉綠素含量增長(zhǎng)顯著，增長(zhǎng)率分別為：S10×S38（2.25%、17.53%）和S22×S24（10.72%和13.51%）。從試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，混合菌對(duì)提高杉木幼苗葉綠素含量的作用比單株菌強(qiáng)，單株菌中S38 在30～45 d 過程中對(duì)葉綠素含量的增長(zhǎng)作用較好。

圖2 混合內(nèi)生真菌對(duì)杉木幼苗葉綠素含量的影響Figure 2 Effects of mixed endophytic fungi on chlorophyll content of C. lanceolata seedlings

2.5 混合內(nèi)生真菌對(duì)杉木幼苗葉綠素?zé)晒馓匦缘挠绊?/h3>

由圖3可知，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，未接種內(nèi)生真菌的對(duì)照組的F0值呈現(xiàn)波動(dòng)上升的趨勢(shì)，說明了在試驗(yàn)階段中杉木幼苗光反應(yīng)中心可能受到抑制作用，PSⅡ反應(yīng)中心生理生化過程減緩。接種內(nèi)生真菌的杉木幼苗的F0值總體呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，在30 d 之后，不同菌種、混合菌之間和與空白對(duì)照組對(duì)比有較為顯著的差異（P＜0.05），在60 d 時(shí)，接種內(nèi)生真菌的杉木幼苗的F0值均小于空白對(duì)照組。接種2株混合菌S22×S38、S10×S22和單菌S24的杉木幼苗相對(duì)于其他菌的F0值顯著小于空白對(duì)照組（P＜0.05），對(duì)杉木幼苗保護(hù)PSⅡ反應(yīng)中心活性具有顯著作用。由圖4可知，大部分接種內(nèi)生真菌的杉木幼苗的Fv/Fm值出現(xiàn)上升的趨勢(shì)，但沒有特別顯著的變化。

圖4 混合內(nèi)生真菌對(duì)杉木幼苗葉綠素?zé)晒鈪?shù)Fv/Fm的影響Figure 4 Effects of mixed endophytic fungi on chlorophyll fluorescence parameters Fv/Fm of C. lanceolata seedlings

3 討論

微生物的數(shù)量大，分布范圍廣，傳播方式多。內(nèi)生菌的可以通過風(fēng)、雨水、昆蟲等媒介進(jìn)行傳播，其次再和植物逐漸形成共生關(guān)系[14-15]。內(nèi)生菌在植物間傳播、在宿主植物中定殖，對(duì)宿主植物有重要意義，內(nèi)生菌對(duì)宿主植物的調(diào)節(jié)作用主要依靠其產(chǎn)生的次生代謝物，菌株的次生代謝物不僅可以提高植物的抗逆性和抗病性，還參與宿主植物進(jìn)行生態(tài)位競(jìng)爭(zhēng)等生理作用[16-17]。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)生菌可定殖于宿主植物的各個(gè)部位，并且呈現(xiàn)出一定的特征[18]，內(nèi)生菌在植物中的分布特點(diǎn)與內(nèi)生菌與植物的互作特點(diǎn)有密切關(guān)系。內(nèi)生真菌可以與植物形成共生關(guān)系，本研究在對(duì)植物施澆菌液后，觀察內(nèi)生真菌的侵染方式及效率，對(duì)進(jìn)一步研究?jī)?nèi)生真菌對(duì)植物的作用具有重要意義。米士偉等[19]對(duì)球毛殼屬的菌種在毛白楊宿主植物上的侵染和定殖過程進(jìn)行了研究，采用的是傳統(tǒng)的顯微鏡觀察和現(xiàn)代的分子生物學(xué)相關(guān)手段，研究表明菌種的侵染途徑多樣，定殖部位常見于外皮層、表皮細(xì)胞和細(xì)胞之間的間隙。本研究中經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色，由光學(xué)顯微鏡進(jìn)行鏡檢發(fā)現(xiàn)杉木幼苗根系有菌絲產(chǎn)生，說明菌株均已成功侵染杉木幼苗的體內(nèi)，與其形成了共生的關(guān)系。

本研究中，混合菌S22×S38、S24×S38 對(duì)苗高的促進(jìn)作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他單株菌混合菌以及對(duì)照，說明S22 與S38、S24 與S38 混合產(chǎn)生的促生效果要比其單菌更好；地徑方面，增長(zhǎng)率的大小排序?yàn)椋篠22×S38＞ S24＞ S10×S22＞ S22＞ S22×S24＞ S10＞ S10×S38＞對(duì)照，混合菌株S22×S38、S10×S22 在地徑方面的促進(jìn)作用均大于單株菌?；旌暇c單株菌相比，有著更強(qiáng)大的優(yōu)勢(shì)作用，對(duì)于植物的生長(zhǎng)發(fā)育和抗逆性均有好處。陳志為等[20]在對(duì)相思樹的研究中，施澆單株菌以及混合菌在相思樹的幼苗上，研究各個(gè)生理指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，混合菌相比單株菌對(duì)生理指標(biāo)的影響優(yōu)勢(shì)更加明顯，與本研究結(jié)果一致。劉慧等[21]在對(duì)內(nèi)生真菌對(duì)羊草生物量的研究中發(fā)現(xiàn)，接種了混合內(nèi)生真菌和叢枝菌根真菌的羊草相比較于單株菌，具有較高的生物量，有利于羊草的生長(zhǎng)。接種了內(nèi)生真菌對(duì)杉木幼苗無論是在地上部分、地下部分還是根冠比方面，內(nèi)生真菌對(duì)杉木幼苗都有促進(jìn)其生物量的積累作用。單株菌S22、S24、S38和混合菌株S10×S22、S10×S24、S10×S38對(duì)杉木幼苗的總體促進(jìn)作用都很明顯，菌株S10比其他菌混合的作用更好。印敬明等[22]研究發(fā)現(xiàn)，球毛殼屬菌株能夠定殖于番茄體內(nèi)，通過一系列生理反應(yīng)，試驗(yàn)結(jié)果顯示，該菌株可以促進(jìn)番茄的生長(zhǎng)。研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)生菌除了直接參與化合反應(yīng)外，還可以間接地促進(jìn)植物生長(zhǎng)，例如，產(chǎn)生次生代謝產(chǎn)物和提高植物體內(nèi)抗氧化酶、磷酸酶等酶活性，提高宿主植物的抗性，促進(jìn)植物的生長(zhǎng)[23-24]。

葉綠素在植物葉片中具有重要的作用，也是光合作用的基本物質(zhì)，在光反應(yīng)系統(tǒng)中，被葉片捕獲的陽光由葉綠素到光反應(yīng)中心，從而引起光化學(xué)反應(yīng)，葉綠素的含量以及光合模上的葉綠素蛋白等物質(zhì)影響光合作用的強(qiáng)度和效率，進(jìn)而影響植物適應(yīng)環(huán)境的能力[25]。葉綠素?zé)晒鈪?shù)分別代表了植物在光合作用時(shí)不同的理化性質(zhì)，PSⅡ光反應(yīng)中心如果在全開放的狀態(tài)下，F(xiàn)0代表了其熒光產(chǎn)量；如果光合作用受到抑制和光反應(yīng)中心受到破壞等情況，則F0值會(huì)升高[25]。本研究中，混合菌S22×S38、S24×S38在試驗(yàn)的全過程中都能有效促進(jìn)葉綠素含量的增加。隨著時(shí)間延長(zhǎng)，效果越加明顯，混合菌S10×S38、S24×S38 和單菌S38 能夠在試驗(yàn)后期，即45～60 d 階段，促進(jìn)杉木幼苗葉綠素的積累，葉綠素含量都是高于對(duì)照的，從而提高杉木幼苗的光合作用。陳貝貝和Wang Q. X.等[26-27]在研究?jī)?nèi)生真菌對(duì)植物光合作用的影響時(shí)，發(fā)現(xiàn)了接種了內(nèi)生真菌的地黃和蘭科植物，其葉綠素質(zhì)量分?jǐn)?shù)較未接種內(nèi)生真菌的植物很高，光合作用也有顯著增強(qiáng)，與本研究結(jié)果相符。在葉綠素?zé)晒夥矫妫?0、60 d時(shí)，接種了內(nèi)生真菌的杉木幼苗的初始熒光值小于對(duì)照，說明接種了內(nèi)生真菌的杉木幼苗在光合作用時(shí)，內(nèi)生真菌可以協(xié)助植物保護(hù)PSⅡ反應(yīng)中心收到外界環(huán)境對(duì)其的不利影響；各株菌株在這兩個(gè)時(shí)間段都對(duì)PSⅡ反應(yīng)中心起到了保護(hù)的作用，60 d時(shí)的作用更加明顯。經(jīng)試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析表明，F(xiàn)v/Fm值處于0.80～0.85 的范圍中，整個(gè)試驗(yàn)過程中沒有發(fā)生太顯著的變化情況，說明內(nèi)生真菌對(duì)促進(jìn)光合電子傳遞速率方面沒有太大的影響作用。閆寧等[28]研究?jī)?nèi)生菌對(duì)茭白幼苗光合作用的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，茭白幼苗被黑粉菌寄生和侵染后，其F0值下降，PSⅡ光反應(yīng)中心活性增加，電子傳遞效率提高，F(xiàn)v/Fm值無顯著影響，這與本試驗(yàn)結(jié)果相符合。但是在同一時(shí)期，不同菌種之間對(duì)杉木幼苗的Fv/Fm值具有較顯著的差異，這說明雖然變化微小，但是通過接種內(nèi)生真菌的方式來提高PSⅡ反應(yīng)中心活性，提高PSⅡ反應(yīng)中心內(nèi)稟光能轉(zhuǎn)換效率，進(jìn)而提高光合作用速率與效率。

4 結(jié)論

總體而言，混合內(nèi)生真菌的促生作用要強(qiáng)于單株內(nèi)生真菌，但也有單株內(nèi)生真菌的促生作用強(qiáng)于混合內(nèi)生和真菌的情況，菌株S10 比其他菌混合的作用更好?；旌暇繄F(tuán)菌×二型傘霉菌、膠孢炭疽菌×二型傘霉菌對(duì)苗高的促進(jìn)作用遠(yuǎn)高于其他單株菌混合菌以及空白對(duì)照；混合菌株炭團(tuán)菌×二型傘霉菌、螺旋木霉菌×炭團(tuán)菌在地徑方面的促進(jìn)作用均大于混合的單株菌及空白對(duì)照；單株菌炭團(tuán)菌、膠孢炭疽菌、二型傘霉菌和混合菌株螺旋木霉菌×炭團(tuán)菌、螺旋木霉菌×膠孢炭疽菌、螺旋木霉菌×二型傘霉菌對(duì)杉木幼苗的總體促進(jìn)作用都很明顯。內(nèi)生真菌對(duì)促進(jìn)光合電子傳遞速率方面沒有太大的影響作用。本研究還有許多不足之處，僅從生理生化等特征研究?jī)?nèi)生真菌對(duì)杉木的影響，沒有對(duì)內(nèi)生真菌與杉木二者相互作用機(jī)制進(jìn)行更深層次研究，以后可以從分子層面上開展研究。