摘" " " 要：為探究竹葉柴胡的藥效機理，采用超聲輔助法提取了竹葉柴胡中總黃酮，并確定了最佳工藝如下：提取劑為40%乙醇，料液比為1∶55，超聲功率為200 W，溫度為70 ℃，時間為50 min。所測樣品中總黃酮質量分數為46.45 g·kg-1，且竹葉柴胡提取液對DPPH和羥基自由基均有較好的清除率。研究表明，竹葉柴胡有較好的抗氧化活性，具有抗病毒、抗衰老、抗癌等藥效作用。

關" 鍵" 詞：竹葉柴胡；超聲輔助；總黃酮；抗氧化活性

中圖分類號：R284.2" " "文獻標識碼： A" " "文章編號： 1004-0935（2023）02-0187-04

竹葉柴胡為傘形科柴胡屬植物，可全草入藥，性味苦寒，為目前市場上三大藥用柴胡之一[1]。竹葉柴胡含有皂苷、甾醇、多糖、黃酮等生物活性成分[2-3]，具有解熱、抗炎、抗病毒、免疫調節(jié)及抗衰老、抗癌等功效[4-7]。超聲波輔助法提取植物黃酮的不僅不影響提取物的活性，且具有儀器簡單、提取效率高、溫度低、節(jié)約溶劑等優(yōu)點[8-9]。本試驗探究了超聲輔助法提取竹葉柴胡中總黃酮的最佳工藝，并試驗了樣品總黃酮提取物對DPPH和羥基自由基的清除率，以研究竹葉柴胡的藥效作用。

1" 試驗部分

1.1" 主要儀器與試劑

紫外分光光度計，TU-1901，普析通用儀器公司；超聲儀，KQ-250DE型，昆山超聲儀器公司。

竹葉柴胡，四川博仁藥業(yè)有限公司；蘆丁標準品，成都康邦生物科技有限公司；水楊酸、乙醇、H2O2、AlNO3·9H2O、NaOH、NaNO2、FeSO4·7H2O、DPPH（1.1-二苯基-2-三硝基苯肼）、抗壞血酸，分析純，成都市科隆化學品有限公司。

1.2" 樣品預處理

樣品置于80 ℃干燥箱中烘4 h后，用粉碎機粉碎，過80目（0.178 mm）篩，裝袋密封備用。

1.3" 樣品中總黃酮的測定

按NaNO2-Al（NO3）3-NaOH絡合物法，用蘆丁為標準品，將樣品提取液于510 nm處測定吸光值。計算總黃酮得率：

總黃酮得率 = D×C×V/M。" " " （1）

式中：D—稀釋倍數；

C—總黃酮質量濃度，mg·mL-1；

V—樣品液體積，L；

M—樣品質量，g。

1.4" 樣品提取物的抗氧化活性測定

1.4.1" DPPH自由基清除能力測定

參考谷睿[10]等的方法，將樣品提取液稀釋為總黃酮質量濃度0.016 78、0.041 91、0.209 50、" " 0.419 10、0.838 20 mg·mL-1，并各取2.0 mL于20 mL試管中，分別加入2.0 mL 0.2 mmol·L-1 DPPH，混合均勻，置于暗處30 min后，用95%乙醇做空白試驗，在" "517 nm處測量吸光度。DPPH自由基清除率：

SR=[1-（Ai-Ax）/Ao]×100%。" " " "（2）

式中：Ai—樣品吸光度；

Ax—95%乙醇代替DPPH測得吸光度；

Ao—空白吸光度。

1.4.2" 羥基自由基清除能力測定

參考高亞妮[11]等的方法，將樣品提取液稀釋為總黃酮質量濃度0.016 78、0.041 91、0.209 50、" 0.419 10、0.838 20 mg·mL-1，并各取2.0 mL于20 mL試管中，分別依次加入1.0 mL 9 mmol·mL-1 FeSO4、1.0 mL 9 mmol·L-1水楊酸-乙醇溶液和1.0 mL" " 8.8 mmol·L-1 H2O2，搖勻，置于37 ℃水浴鍋中，" " 30 min后于510 nm處測定吸光度（Ai）；用蒸餾水代替H2O2，其余步驟不變，測定吸光度（Ax）；用蒸餾水做空白試驗，測定吸光度（Ao）。羥基自由基清除率SR計算同1.4.1。

2" 結果與分析

2.1" 樣品中總黃酮提取工藝

2.1.1" 料液比的影響

取預處理后的樣品5份，各0.5 g。按超聲溫度70 ℃，超聲功率 200 W，超聲時間 50 min，40%乙醇為提取劑，設置料液比（g·mL-1）1∶25、" " "1∶35、1∶45、1∶55、1∶65，提取總黃酮，結果見圖1。

由圖1可見，隨料液比增大，樣品總黃酮得率呈現先升后降的變化趨勢。料液比為1∶55（g·mL-1）時，樣品總黃酮得率最大，為最佳料液比。

2.1.2" 提取劑體積分數的影響

取預處理后的樣品5份，各0.5 g。固定料液比為1∶55（g·mL-1），超聲溫度70 ℃，超聲功率" " 200 W，超聲時間50 min。設置提取劑乙醇體積分數為30%、40%、50%、60%、70%，提取總黃酮，結果見圖2。

由圖2可見，樣品的總黃酮得率隨著乙醇體積分數的增大呈現先增后降的趨勢。乙醇體積分數為40%時，樣品總黃酮得率最大，為最佳提取劑體積分數。

2.1.3" 提取時間的影響

取預處理后的樣品5份，各0.5 g。固定提取劑為40%乙醇，料液比1∶55（g·mL-1），超聲溫度70 ℃，超聲功率200 W。設置提取時間為10、20、30、40 、50、60 min，提取總黃酮，結果見圖3。

由圖3可見，隨提取時間的延長，樣品的總黃酮得率逐漸增大。提取時間為50 min時，樣品總黃酮得率最大，為最佳提取時間。

2.1.4" 提取溫度的影響

取預處理后的樣品5份，各0.5 g。固定提取劑為40%乙醇，料液比1∶55（g·mL-1），提取時間" " 50 min，超聲功率200 W。設置提取溫度為30、40、50 、60、70 ℃，提取總黃酮，結果見圖4。

由圖4可見，隨著提取溫度的升高，樣品總黃酮得率逐漸增大。但乙醇沸點為78 ℃，當提取溫度超過75 ℃時，提取劑損失會較大。因此，選擇70 ℃為最佳提取溫度。

2.1.5" 超聲功率的影響

取預處理后的樣品5份，各0.5 g。固定提取劑為40%乙醇，料液比1∶55（g·mL-1），提取時間" " 50 min，提取溫度 70 ℃。設置超聲提取功率為125、150、175、200、225 W，提取總黃酮，結果見圖5。

由圖5可見，隨著超聲功率的增加，樣品總黃酮得率呈現先增后降的變化趨勢。超聲功率為" "200 W時，總黃酮得率最大，為最佳超聲提取功率。

2.2" 樣品中總黃酮測定

取3份0.5 g預處理后的樣品，在料液比" " "1∶55（g·mL-1）、提取劑為40%乙醇、提取溫度 60 ℃、超聲功率 200 W時，提取50 min，靜置過濾，將濾液按“1.3”進行總黃酮含量測定及加標回收實驗，結果見表1。

由表1可知，所測竹葉柴胡樣品提取液中總黃酮質量濃度平均為0.844 5 mg·mL-1，樣品總黃酮質量分數為46.45 g·kg-1，加標回收率在90%～120%之間，RSD為0.35%，表明該測定方法準確、可靠。

2.3" 抗氧化活性研究

2.3.1" DPPH自由基清除率

按“1.4.1”，對樣品提取液進行DPPH自由基清除率實驗，結果見圖6。

由圖6可知，樣品提取液中總黃酮質量濃度為0.016 78～0.838 20 mg·mL-1時，對DPPH自由基清除率達41.13%～70.62%，表明竹葉柴胡對DPPH自由基有較好的清除能力。

2.3.2" 羥基自由基清除率試驗

按“1.4.2”進行樣品提取液對羥基自由基清除率實驗，結果見圖7。

由圖7可知，樣品提取液中總黃酮質量濃度為0.016 78～0.838 20 mg·mL-1時，對羥基自由基的清除率為3.64%～17.60%，表明竹葉柴胡對羥基自由基具有一定的清除能力。

3" 結 論

超聲波輔助法提取竹葉柴胡中總黃酮的最佳工藝為：提取劑40%乙醇，料液比1∶55（g·mL-1），超聲功率為200 W，溫度為70 ℃，提取時間50 min。所測樣品中總黃酮質量分數為46.45 g·kg-1，加標回收率為113.5%～114.4%，RSD為0.35%。樣品提取液中總黃酮在0.016 78～0.838 20 mg·mL-1時，對DPPH、羥基自由基的清除率為41.13%～70.62%、3.64%～17.60%，表明竹葉柴胡抗氧化活性好，具有明顯的抗病毒、抗衰老、抗癌等藥效。

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Study on Extraction Technology and Antioxidant of Total Flavonoids From Bupleurum Bamboos

CHEN Tong， HOU Lin-qing， QIN fan-yi， GAN Xin-rui， YE Jun^*

（College of Chemistry and Life Science， Chengdu Normal University， Chengdu Sichuan 611130， China）

Abstract：" To explore the pharmacodynamic mechanism of Bamboo-leaf Bupleurum， total flavonoids were extracted from Bamboo-leaf Bupleurum by ultrasonic-assisted extraction process， and the optimum process was determined as follows： extraction agent 40% ethanol， solid-liquid ratio 1∶55， ultrasonic power 200 W， extraction temperature 70 ℃， extraction time 50 min. The total mass fraction of flavonoids in the samples was 46.45 g·kg^-1. DPPH and HYDROXyl radical scavenging rate of bupleurum bambusifolia extract were good. The results showed that Bupleurum bamboo-leaves had good antioxidant activity and anti-virus， anti-aging and anti-cancer effects.

Key words： Bupleurum bamboos; Flavonoids; Ultrasound assisted; Antioxidant activity