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        丁型肝炎抗體檢測(cè)方法比較分析

        2023-04-29 00:44:03張振鋒
        臨床肝膽病雜志 2023年4期
        關(guān)鍵詞:診斷

        張振鋒

        摘要:丁型肝炎是由丁型肝炎病毒(HDV)與乙型肝炎病毒(HBV)合并感染或者HDV重疊感染HBV攜帶者引起的一種嚴(yán)重病毒性肝炎。由于長(zhǎng)期重視不足,丁型肝炎的診斷目前還存在巨大空白。近年來(lái),隨著相關(guān)研究的不斷深入,科研和醫(yī)療行業(yè)逐漸意識(shí)到丁型肝炎的危害。同時(shí)相關(guān)藥物研發(fā)的重大進(jìn)展也為丁型肝炎的治療甚至治愈帶來(lái)了新的機(jī)遇。而這些進(jìn)展將大大增加對(duì)丁型肝炎診斷的需求???HD抗體是丁型肝炎診斷的關(guān)鍵指標(biāo)。本文就目前丁型肝炎抗體包括抗-HD總抗體、IgG和IgM的檢測(cè)方法進(jìn)行了總結(jié)和比較分析,并對(duì)相關(guān)的重要問(wèn)題進(jìn)行了討論,以期加深對(duì)丁型肝炎抗體檢測(cè)現(xiàn)狀的了解,并為開(kāi)發(fā)更好的丁型肝炎診斷工具提供參考。

        關(guān)鍵詞:δ肝炎病毒; 丁型肝炎; 肝炎抗體; 診斷

        基金項(xiàng)目:南方科技大學(xué)科研啟動(dòng)經(jīng)費(fèi)(Y011006113)

        Detection methods for hepatitis D antibodies: A comparative analysis

        ZHANG Zhenfeng. (School of Public Health and Emergency Management, Southern University of Science and Technology, Shenzhen, Guangdong 518055, China)

        Corresponding author:

        ZHANG Zhenfeng, zhangzf@sustech.edu.cn (ORCID:0000-0002-0013-3685)

        Abstract:

        Hepatitis D is a severe form of viral hepatitis caused by co-infection with hepatitis D virus (HDV) and hepatitis B virus (HBV) or superinfection of HDV in HBV carriers. There is still a huge gap in the diagnosis of hepatitis D due to insufficient emphasis on this disease for a long time. With the advances in related studies in recent years, the academia and the medical industry have gradually realized the harm of hepatitis D, and meanwhile, breakthroughs in drug development have also brought new opportunities for the treatment or even cure of hepatitis D. These advances greatly increase the demand for the diagnosis of hepatitis D. HDV antibodies are the key markers for the diagnosis of hepatitis D. This article summarizes and compares the detection methods for HDV antibodies including total HDV antibodies, IgG, and IgM and discusses related important issues, so as to understand the current status of the detection of HDV antibodies and provide a reference for developing better diagnostic tools for hepatitis D.

        Key words:

        Hepatitis Delta Virus; Hepatitis D; Hepatitis Antibodies; Diagnosis

        Research funding:

        Southern University of Science and Technology Scientific Research Startup Fund (Y011006113)

        丁型肝炎是由丁型肝炎病毒(HDV)與乙型肝炎病毒(HBV)合并感染(兩種病毒同時(shí)感染人體)或者HDV感染已經(jīng)攜帶HBV的患者引起的病毒性肝臟疾病。相對(duì)于HBV單獨(dú)感染,HDV和HBV共同感染會(huì)顯著加快疾病向肝硬化和肝癌等重癥發(fā)展的進(jìn)程,因此丁型肝炎被認(rèn)為是最嚴(yán)重的病毒性肝炎[1]。盡管危害很大,但丁型肝炎的診斷相對(duì)于乙型肝炎而言進(jìn)展非常緩慢。由于大量檢測(cè)空白的存在和感染呈現(xiàn)顯著的地域差異,關(guān)于HDV感染的總感染人數(shù)存在爭(zhēng)議[2],部分Meta分析[3-5]估計(jì)全球有1 200萬(wàn)~7 200萬(wàn)HDV感染者。我國(guó)丁型肝炎診斷的數(shù)據(jù)也很少。近年來(lái)隨著相關(guān)研究的進(jìn)展包括藥物研發(fā)的突破等,丁型肝炎的危害逐漸受到關(guān)注,為丁型肝炎的治愈帶來(lái)了曙光[6]。亞太肝病學(xué)會(huì)[7]和歐洲肝病學(xué)會(huì)[8]均建議對(duì)所有HBsAg陽(yáng)性的個(gè)體進(jìn)行丁型肝炎檢測(cè),然而目前只有極少數(shù)人接受了相應(yīng)的檢測(cè),診斷缺口巨大,問(wèn)題亟待解決。丁型肝炎的篩查通常首先檢測(cè)血清中的抗-HD抗體包括IgG和IgM,然后對(duì)陽(yáng)性者再進(jìn)行HDV RNA的驗(yàn)證。除了篩查之外,抗-HD抗體尤其是IgM也是丁型肝炎疾病狀態(tài)的一項(xiàng)重要指標(biāo)。因此有必要對(duì)抗-HD抗體檢測(cè)的方法進(jìn)行認(rèn)真分析。

        1 HDV抗原的特征和抗體的診斷意義

        HDV的基因組為單鏈環(huán)形反義RNA,僅約1 680個(gè)核苷酸(圖1)。HDV的基因組僅有一個(gè)開(kāi)放閱讀框編碼195個(gè)氨基酸的丁型肝炎小抗原(small hepatitis delta antigen, S-HDAg)。在病毒復(fù)制過(guò)程中,部分病毒基因組的開(kāi)放閱讀框的終止密碼子UAG可以被人體的RNA編輯酶ADAR1(adenosine deaminase acting on RNA 1)修飾變成色氨酸密碼子UGG,進(jìn)而導(dǎo)致表達(dá)的蛋白延長(zhǎng)19個(gè)氨基酸,該蛋白被稱(chēng)為丁型肝炎大抗原(large hepatitis delta antigen, L-HDAg)。S-HDAg是病毒基因組復(fù)制所必需的,而L-HDAg通過(guò)與HBV的囊膜蛋白相互作用介導(dǎo)病毒粒子的組裝和釋放[9-10]。目前發(fā)現(xiàn)的HDV共分為8個(gè)基因型,其中 Ⅰ 型HDV(HDV1)為全球分布,其他基因型都呈現(xiàn)明顯的地域分布,我國(guó)主要流行的基因型為HDV1[11-12]。

        丁型肝炎可大致分為急性感染期和慢性感染期兩個(gè)階段。HDV和HBV合并感染情況下,兩種病毒在急性感染之后通常均被清除,只有少數(shù)(<5%)會(huì)發(fā)展成為慢性感染。然而,HDV重疊感染HBV陽(yáng)性患者發(fā)展成為慢性感染的概率很高(>90%)[13-14]。人體被HDV感染后主要產(chǎn)生抗-HD IgM和抗-HD IgG兩類(lèi)抗體。同時(shí),由于HBV復(fù)制產(chǎn)生了表面抗原、核心抗原等HBV抗原,人體也可能相應(yīng)地產(chǎn)生對(duì)應(yīng)的各種HBV抗體。感染各個(gè)階段人體血液中各種HDV和HBV抗體的狀態(tài)匯總于表1。HDV進(jìn)入人體后通常有數(shù)周甚至更長(zhǎng)的潛伏期,然后開(kāi)始大量復(fù)制???HD IgM大約在HDV大量復(fù)制2周后出現(xiàn)并快速升高。在急性感染期,患者血液中抗-HD IgM含量較高;急性感染后期,隨著HDV被清除或轉(zhuǎn)為慢性感染,抗-HD IgM水平通常會(huì)快速下降,因此抗-HD IgM常被作為急性感染的指標(biāo)。盡管如此,抗-HD IgM在部分慢性感染者中也能檢測(cè)到,通常與病毒活躍程度和肝損傷呈正相關(guān)[15-17]。因此,判定HDV急性感染不能僅依賴(lài)于抗-HD IgM,還應(yīng)該結(jié)合其他指標(biāo),如抗-HBc IgM、抗-HD IgG、肝損傷指標(biāo)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等???HD IgG出現(xiàn)晚于抗-HD IgM數(shù)周,在血液中的濃度可以達(dá)到很高水平,而且持續(xù)時(shí)間很長(zhǎng)。因此,抗-HD IgG常被作為HDV感染已經(jīng)度過(guò)急性期的指標(biāo)。然而,抗-HD IgG在病毒被清除之后仍能維持很長(zhǎng)時(shí)間,故僅抗-HD IgG陽(yáng)性無(wú)法確定是現(xiàn)癥感染還是既往感染已經(jīng)清除病毒,需要利用HDV RNA以明確。丁型肝炎的初步篩查需要同時(shí)檢測(cè)抗-HD IgM和抗-HD IgG,因此利用抗-HD總抗體最為合適。但在臨床中也常分別檢測(cè)抗-HD IgM和抗-HD IgG用于丁型肝炎的篩查。

        2 HDV抗體檢測(cè)的主要方法

        到目前為止,國(guó)內(nèi)外已經(jīng)有數(shù)家企業(yè)和研發(fā)機(jī)構(gòu)開(kāi)發(fā)出了HDV抗體檢測(cè)產(chǎn)品,其中大部分為酶聯(lián)免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)試劑盒,此外還包括早期產(chǎn)品放射免疫分析(radioimmunoassay, RIA)試劑、新一代產(chǎn)品化學(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescent immunoassay, CLIA)試劑盒,以及尚未上市的膠體金檢測(cè)試紙條和免疫熒光微陣列等。HDV抗體檢測(cè)的主要方法匯總于表2,具體如下。

        2.1 ELISA檢測(cè)法

        ELISA包括免疫分析系統(tǒng)和信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)。免疫分析系統(tǒng)是將酶(如辣根過(guò)氧化物酶)作為標(biāo)志物,直接標(biāo)記在抗原或抗體上,經(jīng)過(guò)抗原與抗體反應(yīng)形成抗原-抗體復(fù)合物;信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)是在免疫反應(yīng)結(jié)束后,加入底物(如3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺)進(jìn)行酶促反應(yīng)產(chǎn)生可見(jiàn)的顏色變化。通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定樣品與對(duì)照的顏色差異,并根據(jù)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行定性判斷或結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)算待檢測(cè)物的濃度。ELISA是目前最常用的抗體檢測(cè)方法。根據(jù)抗體類(lèi)型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡牟煌珽LISA檢測(cè)抗體的方法又被分為間接法、競(jìng)爭(zhēng)法、捕獲法等多種類(lèi)型。在實(shí)驗(yàn)操作上主要包括酶標(biāo)板包被、樣品孵育、酶標(biāo)記、加入底物顯色以及信號(hào)檢測(cè)等步驟。

        2.1.1 抗-HD IgM ELISA檢測(cè) 目前商品化檢測(cè)抗-HD IgM的ELISA試劑盒主要采用間接法和捕獲法兩種。間接法ELISA采用HDV抗原包被酶標(biāo)板,然后與樣品孵育捕獲抗-HD IgM,最后用酶偶聯(lián)的抗人IgM抗體進(jìn)行信號(hào)檢測(cè)。但該方法的樣品中可能含有大量的抗-HD IgG也能夠與HDV抗原結(jié)合,此競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合可能會(huì)導(dǎo)致抗-HD IgM的檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。因此,采用間接法ELISA檢測(cè)抗-HD IgM時(shí)通常需要對(duì)樣本進(jìn)行稀釋或者采用吸附法預(yù)先去除IgG。與間接法ELISA不同,捕獲法ELISA用抗人IgM μ鏈抗體包被酶標(biāo)板,首先捕獲血清中的所有IgM,然后再先后加入HDV抗原和酶偶聯(lián)的抗HDV特異性抗體用于信號(hào)檢測(cè)。捕獲法ELISA排除了抗-HD IgG的干擾,結(jié)果更加可靠。因此,捕獲法ELISA是目前檢測(cè)抗-HD IgM最常用的方法。

        2.1.2 抗-HD IgG檢測(cè) 抗-HD IgG的ELISA檢測(cè)試劑盒是目前市場(chǎng)上供應(yīng)最多的丁型肝炎抗體檢測(cè)產(chǎn)品。其檢測(cè)方法基本上全部為間接法ELISA,主要包括:采用HDV抗原包被酶標(biāo)板,然后與樣品孵育捕獲抗-HD IgG,最后用酶偶聯(lián)的抗人IgG抗體進(jìn)行信號(hào)檢測(cè)。雖然該方法理論上也存在抗-HD IgM競(jìng)爭(zhēng)性與HDV抗原結(jié)合的問(wèn)題,但通常情況下抗-HD IgG陽(yáng)性的血清中,該抗體的濃度遠(yuǎn)高于抗-HD IgM。因此抗-HD IgM的干擾造成的影響不大。

        2.1.3 抗-HD總抗體檢測(cè) 相對(duì)于抗-HD IgM和抗-HD IgG而言,抗-HD總抗體更加適合于丁型肝炎的初步篩查。盡管如此,目前市場(chǎng)上抗-HD總抗體檢測(cè)試劑盒很少???HD總抗體的ELISA檢測(cè)方法主要分為競(jìng)爭(zhēng)法和雙抗原夾心法兩種。競(jìng)爭(zhēng)法ELISA的主要步驟包括:采用HDV抗原包被酶標(biāo)板,然后與樣品孵育捕獲抗-HD IgM和抗-HD IgG,最后加入酶偶聯(lián)的抗HDV多克隆抗體,結(jié)合尚未被樣品中的抗體占據(jù)的HDV抗原并進(jìn)行信號(hào)檢測(cè)。雙抗原夾心法ELISA也采用HDV抗原包被酶標(biāo)板并與樣品孵育捕獲抗-HD總抗體,最后用酶偶聯(lián)的HDV抗原進(jìn)行標(biāo)記和信號(hào)檢測(cè)。相對(duì)于上述抗-HD IgM和抗-HD IgG的ELISA檢測(cè),抗-HD總抗體的兩種檢測(cè)方法均較為復(fù)雜,這可能是目前市場(chǎng)上抗-HD總抗體檢測(cè)試劑盒較少的一個(gè)原因。

        2.2 其他檢測(cè)方法

        2.2.1 RIA檢測(cè)法 與ELISA類(lèi)似, RIA也包括免疫分析系統(tǒng)和信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng),兩者的主要區(qū)別在于RIA是以放射性同位素為標(biāo)志物,以同位素的放射性強(qiáng)度作為檢測(cè)信號(hào)。RIA檢測(cè)法建立于1960年,其檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性都很高。RIA曾是檢測(cè)HDV抗體的主要方法,這些方法大多數(shù)建立于1980—1990年[18-19],例如Abbott公司的丁型肝炎抗體檢測(cè)試劑盒[20]。但由于同位素對(duì)人體危害較大,檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜耗時(shí),后來(lái)逐漸被ELISA替代[21-23]。基于筆者的檢索,目前市場(chǎng)上已經(jīng)沒(méi)有商品化的HDV抗體RIA檢測(cè)試劑盒供應(yīng)。然而這不排除仍有少數(shù)檢測(cè)機(jī)構(gòu)和實(shí)驗(yàn)室在使用自制的RIA檢測(cè)試劑進(jìn)行HDV抗體檢測(cè)。

        2.2.2 CLIA檢測(cè)法 CLIA同樣也包括免疫分析和信號(hào)檢測(cè)兩個(gè)系統(tǒng)。其免疫分析系統(tǒng)與ELISA和RIA類(lèi)似,但CLIA的信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)中采用的是魯米諾等發(fā)光底物。底物經(jīng)氧化或酶促反應(yīng)后會(huì)發(fā)射光子,發(fā)光強(qiáng)度利用發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x器進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)化學(xué)發(fā)光標(biāo)志物與發(fā)光強(qiáng)度的關(guān)系,進(jìn)行定性或定量分析。由于CLIA的檢測(cè)靈敏度遠(yuǎn)高于ELISA,很多ELISA產(chǎn)品正在被CLIA產(chǎn)品替代,在HDV抗體檢測(cè)領(lǐng)域亦是如此。上述HDV抗體ELISA檢測(cè)試劑盒理論上均可開(kāi)發(fā)出對(duì)應(yīng)的CLIA檢測(cè)試劑盒。但是,由于化學(xué)發(fā)光診斷技術(shù)起步較晚,而且產(chǎn)品一般是試劑和儀器一體化的封閉系統(tǒng),因此技術(shù)壁壘較高,產(chǎn)品的更新?lián)Q代無(wú)法在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)。基于筆者所掌握的信息,目前市場(chǎng)上只有Diasorin和Dia.Pro Diagnostic Bioprobes Srl兩家企業(yè)提供HDV抗體CLIA檢測(cè)產(chǎn)品[24],而且均為基于競(jìng)爭(zhēng)法的總抗體檢測(cè)試劑盒。兩家均為長(zhǎng)期從事丁型肝炎檢測(cè)試劑生產(chǎn)和研發(fā)的意大利企業(yè)。意大利在丁型肝炎診斷領(lǐng)域的領(lǐng)先發(fā)展可能與該國(guó)的HDV感染率較高(相對(duì)于其他歐洲發(fā)達(dá)國(guó)家)以及HDV的發(fā)現(xiàn)者意大利科學(xué)家Rizzetto博士的推動(dòng)有關(guān)。Diasorin公司在推出抗-HD總抗體CLIA檢測(cè)產(chǎn)品之后,已經(jīng)停售相應(yīng)的ELISA產(chǎn)品。而Dia.Pro Diagnostic Bioprobes Srl公司則目前還同時(shí)提供ELISA和CLIA產(chǎn)品。

        2.2.3 膠體金試紙條 ELISA和CLIA利用酶標(biāo)板等多孔板可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣本,但是這兩種方法對(duì)檢測(cè)設(shè)備有較高要求,需要在實(shí)驗(yàn)室中完成。試紙條檢測(cè)則不需要大型儀器,并且檢測(cè)時(shí)間短,非常適合在偏遠(yuǎn)和不發(fā)達(dá)的地區(qū)進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)或者在樣品數(shù)量比較少的情況下進(jìn)行快速檢測(cè)。德國(guó)海德堡大學(xué)Urban教授團(tuán)隊(duì)在2021年首次報(bào)道了HDV抗體檢測(cè)試紙條[25]。該試紙條的設(shè)計(jì)采用的是經(jīng)典的膠體金標(biāo)記方法:首先將純化的重組HDV抗原(檢測(cè)條帶)和抗-羊抗體(對(duì)照條帶)分別噴涂固定在膜上,在膜的前方放置吸附有膠體金標(biāo)記的羊抗人IgG的濾紙條。加入樣本(稀釋的血清)之后,樣本通過(guò)膠體金濾紙與金標(biāo)記抗體一起流向檢測(cè)膜。如果樣品中含有HDV特異性抗體,那么抗體與金標(biāo)記二抗將在HDV抗原處富集形成可見(jiàn)的條帶,多余的金標(biāo)記二抗進(jìn)一步流經(jīng)抗-羊抗體時(shí)被捕獲形成對(duì)照條帶。以ELISA檢測(cè)結(jié)果作為對(duì)照,該檢測(cè)試紙條可以檢測(cè)出94.6%陽(yáng)性樣本,具有相當(dāng)高的陽(yáng)性樣本檢出率。而且,試紙條未檢測(cè)出的假陰性樣本其ELISA檢測(cè)信號(hào)也很弱,這些樣本很可能來(lái)自已經(jīng)清除HDV的患者。Urban教授團(tuán)隊(duì)與??∑娼淌趫F(tuán)隊(duì)合作,利用該試紙條對(duì)我國(guó)和德國(guó)共5千多份樣本進(jìn)行了檢測(cè),發(fā)現(xiàn)丁型肝炎存在顯著的熱點(diǎn)分布[26]。目前該試紙條尚未上市。2.2.4 微陣列定量檢測(cè) 微陣列檢測(cè)方法具有所需實(shí)驗(yàn)材料少、靈敏,以及易于實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)。在HDV抗體檢測(cè)方面,上海交通大學(xué)的陳曉華團(tuán)隊(duì)與美國(guó)斯坦福大學(xué)Glenn團(tuán)隊(duì)合作,在2017年報(bào)道了一種基于熒光的高通量定量微陣列抗體捕獲(quantitative microarray antibody capture,Q-MAC)技術(shù)[27]。其原理是將重組HDV抗原以圓點(diǎn)形式固定在金膜上制作成微陣列,加入樣本之后HDV抗原捕獲抗體,然后再加入IRDye800熒光標(biāo)記驢抗人IgG二抗,最后利用Licor Odyssey掃描儀進(jìn)行熒光信號(hào)檢測(cè)。平行比較實(shí)驗(yàn)顯示,該方法的檢測(cè)靈敏度遠(yuǎn)高于ELISA和免疫印跡,而且可以實(shí)現(xiàn)抗體定量。雖然該方法僅檢測(cè)了抗-HD IgG,但用同樣的策略開(kāi)發(fā)出抗-HD IgM和抗-HD總抗體應(yīng)該也具有可行性。與上述抗-HD IgG檢測(cè)試紙條一樣,目前Q-MAC產(chǎn)品也尚未上市。

        3 丁型肝炎抗體檢測(cè)面臨的幾個(gè)重要問(wèn)題

        3.1 不同HDV基因型的序列差異對(duì)抗體檢測(cè)的影響 如上所述,HDV共有8個(gè)基因型。由于HDV1為全球分布,影響最廣,所以幾乎所有的HDV抗體檢測(cè)產(chǎn)品都利用HDV1的抗原來(lái)捕獲抗體[18,28](抗-HD IgG檢測(cè)試紙條除外,見(jiàn)下文)。關(guān)于不同HDV基因型的抗原與抗體交叉反應(yīng)能力的研究很少。從生物信息學(xué)方面而言,HDV不同基因型的基因組序列差異可以達(dá)到40%[11-12],然而HDV抗原的蛋白質(zhì)序列水平差異要小很多。Wang等[29]利用針對(duì)HDV1型的患者血清和單克隆抗體能夠檢測(cè)所有HDV基因型的抗原,包括免疫熒光和免疫印跡試驗(yàn),并且信號(hào)強(qiáng)度沒(méi)有明顯區(qū)別。這說(shuō)明HDV不同基因型的抗原表位可能相當(dāng)保守。盡管如此,該研究使用的抗體很可能是過(guò)量的,不排除當(dāng)使用更低濃度的抗體時(shí)可以觀(guān)察到因交叉反應(yīng)能力差異造成的信號(hào)強(qiáng)度不同。上述膠體金試紙條檢測(cè)方法使用了一種所謂的“保守”HDV抗原,即首先對(duì)8個(gè)基因型的HDV抗原序列進(jìn)行比對(duì),獲得保守序列,然后通過(guò)人工合成的方式獲得該“保守”抗原的編碼DNA[25]。該試紙條可以成功檢測(cè)到多種HDV基因型感染的患者血清中的抗體。但其主要是定性分析,準(zhǔn)確測(cè)定該“保守”抗原與不同基因型HDV抗體的交叉反應(yīng)能力則需要更多的平行比較試驗(yàn)。除了利用完整的HDV抗原之外,部分檢測(cè)試劑利用含有HDV抗原表位的肽段來(lái)進(jìn)行抗體檢測(cè)[30]。這種檢測(cè)方法可能對(duì)基因變異更加敏感,需要充分考慮抗原表位的保守性,并且通常需要同時(shí)采用多個(gè)表位的肽段來(lái)避免假陰性的出現(xiàn)??傊?,不同HDV基因型的抗原與抗體之間具有較強(qiáng)的交叉反應(yīng)能力,但是抗原的序列差異對(duì)不同HDV基因型的抗體檢測(cè),尤其定量檢測(cè)的確切影響還有待更深入的研究。

        3.2 HDV抗體的定量檢測(cè) 以上提到的HDV抗體檢測(cè)產(chǎn)品,除了基于熒光的微陣列檢測(cè)外,幾乎全部只能用于定性檢測(cè)。這可能是由于目前丁型肝炎抗體檢測(cè)的主要目的是篩查,而定性檢測(cè)試劑已經(jīng)能夠滿(mǎn)足篩查的需求。盡管如此,抗體定量檢測(cè)的重要性仍不容忽視。如前所述,除了急性感染期外,抗-HD IgM在部分慢性丁型肝炎患者血清中也能檢測(cè)到,而且抗體濃度與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)。因此,抗-HD IgM的定量檢測(cè)具有重要意義。另一方面,隨著丁型肝炎治療的展開(kāi),抗體的定量檢測(cè)對(duì)監(jiān)控病情和藥物治療效果很可能也是非常必要的。研究者們或許能夠從乙型肝炎抗體檢測(cè)的發(fā)展歷程中學(xué)習(xí)到經(jīng)驗(yàn),例如 “乙肝五項(xiàng)”中的抗體檢測(cè)經(jīng)歷了從定性到定量檢測(cè)的過(guò)程。HDV抗體檢測(cè)可能也會(huì)經(jīng)歷類(lèi)似的過(guò)程。

        3.3 標(biāo)準(zhǔn)品與檢測(cè)試劑的評(píng)估 由于目前HDV抗體檢測(cè)產(chǎn)品主要用于定性檢測(cè),所以?xún)H包含陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照,不包含標(biāo)準(zhǔn)品。已有多項(xiàng)研究[20-24,31]對(duì)不同的丁型肝炎抗體檢測(cè)試劑進(jìn)了平行比較,結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些試劑盒在檢測(cè)靈敏度等方面存在很大的差異。缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)品導(dǎo)致不同檢測(cè)產(chǎn)品和方法之間的比較和評(píng)價(jià)存在很大困難。HDV現(xiàn)癥感染時(shí),HDV抗體的水平通常比較高,抗體定性檢測(cè)結(jié)果的一致性很高[17-18]。但是無(wú)法排除某些感染者體內(nèi)抗體水平較低,或者藥物治療導(dǎo)致抗體水平降低等情況。在這些情況下,檢測(cè)產(chǎn)品的靈敏度和特異度對(duì)結(jié)果的判斷可能會(huì)有很大的影響。另一方面,隨著HDV抗體定量檢測(cè)需求的增加,標(biāo)準(zhǔn)品和評(píng)價(jià)指標(biāo)的重要性會(huì)越來(lái)越大。世界衛(wèi)生組織在2013年建立了第一份HDV基因組RNA的標(biāo)準(zhǔn)品[32],該標(biāo)準(zhǔn)品取自HDV1型患者血清,HDV的效價(jià)制訂為575 000 IU/mL。該標(biāo)準(zhǔn)品為HDV基因組RNA的定量提供了統(tǒng)一的參考。然而目前尚沒(méi)有一套完整的丁型肝炎抗體標(biāo)準(zhǔn)品。建立一套完整統(tǒng)一的丁型肝炎抗體標(biāo)準(zhǔn)品,將有利于抗體定量檢測(cè)產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)和評(píng)估,而且有利于對(duì)不同研究所獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行橫向比較,因此具有重要意義。

        4 展望

        HDV抗體檢測(cè)對(duì)丁型肝炎的診斷至關(guān)重要???HD總抗體、抗-HD IgG、抗-HD IgM分別具有不同的臨床診斷意義,均應(yīng)該受到重視。雖然目前相關(guān)的檢測(cè)手段都有了一定的發(fā)展,而且市場(chǎng)上有應(yīng)用的產(chǎn)品供應(yīng),但是仍存在很多重要的不足之處,包括:缺乏對(duì)不同HDV基因型的抗體檢測(cè)能力的測(cè)定;總抗體檢測(cè)產(chǎn)品較少,難以滿(mǎn)足大規(guī)模篩選的需求;定量檢測(cè)產(chǎn)品缺乏;基于CLIA等高靈敏度檢測(cè)方法的產(chǎn)品有待開(kāi)發(fā);缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)品、操作指南和評(píng)價(jià)指標(biāo)等。此外,作為丁型肝炎的另一項(xiàng)關(guān)鍵指標(biāo),HDV RNA的檢測(cè)也存在很多問(wèn)題[32-33]。近年來(lái)隨著對(duì)丁型肝炎認(rèn)識(shí)的深入,科研和醫(yī)療產(chǎn)業(yè)機(jī)構(gòu)都在不斷推動(dòng)丁型肝炎檢測(cè)試劑的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用。新型冠狀病毒肺炎暴發(fā)以來(lái),病毒診斷行業(yè)在技術(shù)和產(chǎn)業(yè)規(guī)模方面取得了重大的發(fā)展。這些發(fā)展必然會(huì)對(duì)丁型肝炎診斷產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)和升級(jí)起到巨大的推動(dòng)作用。丁型肝炎領(lǐng)域的相關(guān)專(zhuān)家和從業(yè)人員應(yīng)加大教育宣傳,達(dá)成共識(shí),針對(duì)以上亟待解決的問(wèn)題,推動(dòng)丁型肝炎檢測(cè)的產(chǎn)品開(kāi)發(fā)、升級(jí)和應(yīng)用,并最終為丁型肝炎的防治提供支持。

        利益沖突聲明:作者聲明不存在利益沖突。

        致謝:衷心感謝莊輝院士對(duì)文稿寫(xiě)作的指導(dǎo)。

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        收稿日期:

        2023-02-20;錄用日期:2023-03-20

        本文編輯:葛俊

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