張雪冰　王鴻　張帆　陳建軍　李寬瑩

摘要：山桃是甘肅地區(qū)普遍應(yīng)用的桃樹(shù)優(yōu)良砧木，具有抗寒、抗旱的特性。然而山桃通過(guò)種子繁殖的方式存在一定比例上的抗性分離現(xiàn)象，而且繁殖周期較長(zhǎng)。為探索山桃組培快繁技術(shù)。對(duì)山桃組培苗的生根培養(yǎng)和煉苗移栽進(jìn)行了試驗(yàn)。結(jié)果表明，以改良QL培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，當(dāng)IBA濃度為1.0 mg/L時(shí)，試管苗生根效果最好，根系粗壯，側(cè)根較多，生根率達(dá)94%以上，平均根數(shù)6根以上，平均根長(zhǎng)6.8 cm以上；添加80 mg/L PG的處理，無(wú)論是生根率、平均根數(shù)還是平均根長(zhǎng)，較不添加80 mg/L PG的處理相比均表現(xiàn)不理想。將根長(zhǎng)超過(guò)3 cm的山桃組培苗置于溫室中，先遮光煉苗5～7 d，后將瓶蓋打開(kāi)1/2，并配制800倍多菌靈溶液少量倒入組培瓶中，4 d后可將瓶蓋全部打開(kāi)繼續(xù)煉苗5～7 d，組培苗根系生長(zhǎng)基本正常，煉苗成活率可達(dá)88%。

關(guān)鍵詞：山桃；組織培養(yǎng)；生根；激素

中圖分類號(hào)：S662.1? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? ? ? ? ? ? 文章編號(hào)：2097-2172（2023）03-0270-05

doi：10.3969/j.issn.2097-2172.2023.03.014

Abstract： Mountain peach， i.e. Prunus davidiana（Carr.） Franch， is a high-quality rootstock which is widely used in Gansu Province， it possesses both cold and drought resistance. However， mountain peach has a percentage of resistance separation in the way of seed propagation， and its propagation cycle is long. To explore the technology of tissue culture and rapid propagation of mountain peach. Rooting culture of the test-tube seedling and the transplanting of the tissue culture seedling of mountain peach were conducted to study the tissue culture and rapid propagation system of mountain peach. The results were as followed. When improved QL culture medium was used， best tube seedlings rooting effect was detected under the concentration of IBA at 1.0 mg/L， which delivered stronger root systemand more capillary roots， the rooting rate was above 94%， the average root number was over 6 and average root length was more than 6.8 cm under this concentration， whereas in the treatment of adding 80 mg/L PG， the average rooting rate， root number and root length showed less ideal performance compared with those in treatment with no 80 mg/L PG added. Tissue culture seedlings with root length over 3 cm were placed in the greenhouse environment， dark cultured for 5 to 7 days first， then small amount of 800 times Carbendazim solution were poured into the tissue culture bottle with lid half open， after 4 days， culture seedling root were refined for 5 to 7 days with cap fully open， in this way， the root system growth of tissue cultured seedlings was basically normal and the survival rate of refined seedlings could reach 88%.

Key words：? Prunus davidiana （Carr.） Franch; Tissue culture; Rooting; Plant growth regulator

桃是我國(guó)主要栽培的果樹(shù)之一，目前桃生產(chǎn)上所用的品種80%以上為我國(guó)自主選育的。我國(guó)的桃產(chǎn)業(yè)分布比較廣泛，而不同生態(tài)區(qū)域的立地和自然條件有很大差異，因此對(duì)桃品種的需求也呈現(xiàn)多樣化。與其他果樹(shù)相比，桃的經(jīng)濟(jì)壽命相對(duì)比較短，一般只有15～20 a，生產(chǎn)上存在的再植障礙等問(wèn)題也比較突出。山桃作為落葉小喬木，主產(chǎn)我國(guó)黃河流域，喜光，耐寒，耐旱，耐鹽堿，對(duì)土壤要求不嚴(yán)，貧瘠、荒山均可生長(zhǎng)。山桃早春開(kāi)花，色彩艷麗，樹(shù)形優(yōu)雅，是北方園林中早春重要的觀花樹(shù)種，也是西北地區(qū)普遍應(yīng)用的優(yōu)良砧木，適于做桃、李、榆葉梅等嫁接砧木。然而山桃通過(guò)種子繁殖的方式存在一定比例上的抗性分離現(xiàn)象，且繁殖周期較長(zhǎng)。通過(guò)組培快繁技術(shù)不但可以保留其抗性，還能夠提供大量整齊一致的優(yōu)良苗木。在國(guó)外，組培快繁技術(shù)已經(jīng)在工廠化生產(chǎn)中得到廣泛應(yīng)用，但目前在國(guó)內(nèi)組培快繁技術(shù)還不夠成熟完善。我們以山桃作為試驗(yàn)材料，探討其組培快繁技術(shù)，以期獲得更加成熟的無(wú)性繁殖技術(shù)，為桃樹(shù)的無(wú)性繁殖提供技術(shù)支持。

1? ?材料與方法

1.1? ?材料

2020年10月，以高于2 cm 山桃試管苗作為生根培養(yǎng)試驗(yàn)材料。2021年1月，以組培室成功生根的山桃組培苗作為煉苗移栽試驗(yàn)材料。

1.2? ?方法

1.2.1? ? IBA對(duì)山桃試管苗生根的影響? ? 將高于2 cm 組培試管苗轉(zhuǎn)接到以改良QL為基本培養(yǎng)基、添加不同濃度IBA（0.50、0.75、1.00、1.25、1.50 mg/L）的生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，處理編號(hào)分別為處理1、2、3、4、5。首先需暗培養(yǎng)7 d，然后再轉(zhuǎn)光照培養(yǎng)，21 d后觀察試管苗生根情況并調(diào)查統(tǒng)計(jì)其生根率、平均根數(shù)、平均根長(zhǎng)。

1.2.2? ? PG對(duì)山桃試管苗生根的影響? ? 將高于2 cm 組培試管苗轉(zhuǎn)接到以改良QL為基本培養(yǎng)基、添加不同濃度PG和不同濃度IBA組合的生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)（表1），先暗培養(yǎng)7 d，然后再轉(zhuǎn)光照培養(yǎng)，21 d后觀察試管苗生根情況并調(diào)查統(tǒng)計(jì)其生根率、平均根數(shù)、平均根長(zhǎng)。

1.2.3? ? 山桃試管苗的煉苗移栽試驗(yàn)? ? 試驗(yàn)設(shè)3個(gè)處理，處理1，將根長(zhǎng)超過(guò)3 cm的山桃組培苗置于溫室環(huán)境中，不需遮光培養(yǎng)5～7 d，查看組培苗的適應(yīng)情況，然后將瓶蓋打開(kāi)1/2，并配制800倍的多菌靈（80%可濕性粉劑）溶液少量倒入組培瓶中，4 d后將瓶蓋全部打開(kāi)繼續(xù)煉苗5～7 d，觀察組培苗根系生長(zhǎng)是否良好，枝條生長(zhǎng)是否正常，并統(tǒng)計(jì)煉苗成活率。將其從組培瓶中取出，根部清洗干凈后移栽到配制好的基質(zhì)中。處理2，將根長(zhǎng)超過(guò)3 cm的山桃組培苗置于溫室環(huán)境中，遮光培養(yǎng)5～7 d，查看組培苗的適應(yīng)情況。然后將瓶蓋打開(kāi)1/2，配800倍的多菌靈溶液少量倒入組培瓶中，4 d后將其瓶蓋全部打開(kāi)繼續(xù)煉苗5～7 d，觀察組培苗根系生長(zhǎng)是否良好，枝條生長(zhǎng)是否正常，并統(tǒng)計(jì)煉苗成活率。將其從組培瓶中取出，根部清洗干凈后移栽配制好的基質(zhì)中。處理3，將根長(zhǎng)超過(guò)3 cm的山桃組培苗置于溫室環(huán)境中，遮光培養(yǎng)5～7 d，查看組培苗的適應(yīng)情況。然后將瓶蓋全部打開(kāi)，并配制800倍的多菌靈溶液少量倒入組培瓶中5～7 d后觀察組培苗根系生長(zhǎng)是否良好，枝條生長(zhǎng)是否正常，并統(tǒng)計(jì)煉苗成活率。將其從組培瓶中取出，根部清洗干凈后移栽到配制好的基質(zhì)中。

2? ?結(jié)果與分析

2.1? ?IBA對(duì)山桃試管苗生根的影響

從表2可知，IBA濃度為1.0 mg/L時(shí)，山桃試管苗的生根效果最顯著，主根根系粗壯，側(cè)根較多，生根率達(dá)94.72%，平均根數(shù)5.63根，平均根長(zhǎng)6.83 cm；IBA濃度為0.75、1.25 mg/L時(shí)，生根效果較好，生根率分別為79.17%、73.33%；IBA濃度為0.50 mg/L時(shí)，生根率較低，平均根長(zhǎng)短，只有主根，沒(méi)有側(cè)根；IBA濃度為1.50 mg/L時(shí)，生根效果最差，平均根數(shù)小于3根，無(wú)側(cè)根，主根細(xì)，生根率僅50.83%。

2.2? ?PG對(duì)山桃試管苗生根的影響

從表3可知，IBA濃度為1.00 mg/L時(shí)，不添加PG的處理生根率最高，為94.72%，且平均根數(shù)較多，為5.63根；平均根長(zhǎng)較長(zhǎng)，為6.83 cm。IBA濃度為0.75 mg/L時(shí)生根率較高，不添加PG和添加80 mg/L PG處理分別為79.17%、78.61%，不添加PG的處理平均根數(shù)較多、平均根長(zhǎng)較長(zhǎng)。IBA濃度為1.25 mg/L時(shí)，不添加PG處理的生根率高于添加80 mg/L PG處理，為73.33%，平均根數(shù)相對(duì)較多，平均根長(zhǎng)相對(duì)較長(zhǎng)。IBA濃度為1.50 mg/L時(shí)生根率較低，不添加PG處理生根率相對(duì)高于添加80 mg/L PG處理，平均根數(shù)相對(duì)較多，平均根長(zhǎng)相對(duì)較長(zhǎng)。

2.3? ?煉苗移栽的成活率

從表4可知，在煉苗移栽過(guò)程中，煉苗前期經(jīng)過(guò)遮光處理、中間又有半開(kāi)蓋煉苗過(guò)程的組培苗根系生長(zhǎng)基本正常，僅個(gè)別葉片枯黃，零落，煉苗成活率達(dá)88.00%。沒(méi)有經(jīng)過(guò)遮光處理的組培苗，更早的出現(xiàn)葉片干枯的現(xiàn)象，后期還發(fā)現(xiàn)其個(gè)別根系發(fā)褐、發(fā)黑，煉苗成活率達(dá)80.33%。沒(méi)有經(jīng)過(guò)半開(kāi)蓋煉苗過(guò)程的組培苗，葉片零落嚴(yán)重，且有些生根苗頂尖停長(zhǎng)，煉苗成活率僅77.33%。

3? ?討論與結(jié)論

誘導(dǎo)植物組培苗生根常用的外源激素有IAA、IBA、NAA等，其中IBA可以誘導(dǎo)桃組培試管苗的生根，但會(huì)影響根的生長(zhǎng)、延長(zhǎng)［1 ］。Hammerschlag等認(rèn)為，NAA的生根效果要優(yōu)于IAA和IBA，當(dāng)生根培養(yǎng)基中的NAA的濃度為5.8 μmol/L時(shí)，生根效果最顯著［2 ］，這一結(jié)論與本研究發(fā)現(xiàn)IBA濃度為1.0 mg/L時(shí)生根效果最理想的結(jié)果并不相同。也有研究發(fā)現(xiàn)，IBA的生根效果比NAA和IAA更為理想［3 - 4 ］，在組培快繁生根過(guò)程中，生根培養(yǎng)基內(nèi)所添加的IBA濃度一般為0.5～1.5 mg/L［5 - 6 ］，添加濃度太高反而會(huì)使生根率降低［7 ］，因?yàn)檫m宜的IBA濃度能夠抑制根的伸長(zhǎng)生長(zhǎng)，可見(jiàn)，高濃度IBA會(huì)使生根數(shù)量增多，而較低濃度的IBA會(huì)使平均根長(zhǎng)增長(zhǎng)［8 ］，這與本試驗(yàn)的結(jié)果基本一致。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，IBA濃度高于1.0 mg/L時(shí)生根率降低，平均根長(zhǎng)減少，而低濃度的IBA生根效果也不理想。也有許多研究將IAA、IBA、NAA 3種激素搭配使用來(lái)促進(jìn)生根。例如，有研究發(fā)現(xiàn)，在桃生根培養(yǎng)基中添加IAA 1.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L時(shí)生根效果最為理想［9 ］，然而也有研究表明在生根培養(yǎng)基中只添加IBA 2.0 mg/L時(shí)生根率最高［10 ］。除了這3種常用的激素以外，有其他添加激素也可促進(jìn)桃組培試管苗的生根。郭偉偉等［11 ］在‘黃金冠’桃的組培研究中發(fā)現(xiàn)，NAA+IBA組合使用時(shí)生根效果最顯著；潘瞳等［12 ］在對(duì)紫葉桃的組培研究中發(fā)現(xiàn)，IBA+2，4-D組合使用時(shí)生根效果最理想，而本試驗(yàn)中，IBA濃度為1.0 mg/L時(shí)，生根效果很理想，說(shuō)明不同桃品種適宜生根的激素也存在差異。在生根培養(yǎng)基中添加適量的80 mg/L間苯三酚（PG）可以提高桃組培試管苗的生根率，當(dāng)添加濃度低于15 mg/L時(shí)生根效果并不明顯［7 ］，這一結(jié)論與本研究結(jié)果并不一致。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)生根培養(yǎng)基中添加間苯三酚（PG）對(duì)山桃的生根培養(yǎng)并沒(méi)有促進(jìn)作用，其原因有待進(jìn)一步研究。

組織培養(yǎng)的最后一步就是組培試管苗的煉苗移栽，是組培試管苗移栽于大田能否成功的最后一道關(guān)卡，也是組培這一技術(shù)能否生產(chǎn)化的關(guān)鍵［13 ］。當(dāng)組培試管苗經(jīng)過(guò)生根培養(yǎng)后，移栽時(shí)根的長(zhǎng)度一般要求不小于3 cm，否則由于根過(guò)短移栽不易成活；另外移栽時(shí)根的長(zhǎng)度也不宜過(guò)長(zhǎng)，以防在移栽的過(guò)程中將根折斷而導(dǎo)致降低成活率［14 ］。若直接將組培生根苗移栽于大田，由于生長(zhǎng)環(huán)境差別太大會(huì)導(dǎo)致成活率降低。因此，組培生根苗必須在溫室條件下進(jìn)行煉苗，煉苗成功后方可移栽定植大田。組培生根苗需要在溫室環(huán)境下閉瓶煉苗 3 d左右，然后再打開(kāi)瓶塞煉苗4 d左右［15 ］。移栽前必須清洗干凈組培生根苗根部的瓊脂，然后栽入含有少量營(yíng)養(yǎng)成分的基質(zhì)中。有研究發(fā)現(xiàn)，組培試管苗移栽到養(yǎng)分很低的蛭石中成活率高，不能直接移栽到養(yǎng)分充足的有機(jī)土壤里［7 ］，移栽的基質(zhì)應(yīng)偏酸性。這與本試驗(yàn)研究結(jié)果基本一致。本試驗(yàn)也是選擇現(xiàn)在溫室煉苗數(shù)天后再移栽，同樣選擇養(yǎng)分較低的基質(zhì)為移栽所用。有研究發(fā)現(xiàn)，組培試管苗在移栽時(shí)應(yīng)緩慢降低環(huán)境濕度，盡量保持高濕的環(huán)境才能提高成活率［15 ］，因此保證高濕的密閉環(huán)境是煉苗前期的關(guān)鍵。桃快繁生根煉苗的環(huán)境溫度應(yīng)保持在20 ℃左右為宜。移栽后為防止組培苗污染，應(yīng)噴灑 800 倍的多菌靈或代森錳鋅控制病害的發(fā)生。煉苗過(guò)程中前期需適當(dāng)遮陰，后期逐漸增加光照強(qiáng)度，從而促進(jìn)組培苗逐漸木質(zhì)化［16 - 17 ］。低溫處理不同天數(shù)對(duì)打破種子休眠有一定的作用，可以提高萌芽率［18 ］?？傊诒驹囼?yàn)煉苗移栽的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，溫度、光照等因素十分重要，這與大多數(shù)研究結(jié)果一致。本試驗(yàn)表明，將根長(zhǎng)超過(guò)3 cm的山桃組培苗置于溫室環(huán)境中，需要遮光培養(yǎng)5～7 d，觀察組培苗的適應(yīng)情況，之后將瓶蓋打開(kāi)一半，并配置800倍的多菌靈少量倒入組培瓶中，既可以預(yù)防組培苗污染，也可以保持培養(yǎng)基不被晾干，4 d后可將其瓶蓋全部打開(kāi)繼續(xù)煉苗5～7 d，觀察組培苗根系生長(zhǎng)是否良好，枝條生長(zhǎng)是否正常，便可以將其從組培瓶中取出，將根部清洗干凈后移栽到配置好的基質(zhì)中。這種煉苗移栽方法對(duì)山桃試管苗最為適合。

本試驗(yàn)表明，IBA濃度為1.0 mg/L時(shí)，山桃試管苗的生根效果最好，根系粗壯，側(cè)根較多，生根率達(dá)94 %以上，平均根數(shù)6根以上，平均根長(zhǎng)6.8 cm以上。添加80 mg/L PG的處理，無(wú)論是生根率、平均根數(shù)還是平均根長(zhǎng)，較不添加80 mg/L PG的處理相比表現(xiàn)都不理想。將根長(zhǎng)超過(guò)3 cm的山桃組培苗置于溫室環(huán)境中遮光煉苗5～7 d后，將瓶蓋打開(kāi)一半，并配制800倍的多菌靈少量倒入組培瓶中，4 d后可將其瓶蓋全部打開(kāi)，繼續(xù)煉苗5～7 d時(shí)，這樣的煉苗過(guò)程效果最好，組培苗根系生長(zhǎng)基本正常，只有個(gè)別葉片枯黃，零落，煉苗成活率可達(dá)到88%。

參考文獻(xiàn)：

［1］ ANCHONDO T J R， FRATTARELLI A， MONTICELLI S， et al. Effect of the gelling agent and alternative substrates on micropropagation of peach rootstock GF677 （P. amygdalus× P. persica）［J］.? Acta Horticulturae， 2011， 923： 209-212.

［2］ KRIZAN P， SAULI P， LASTOVICKA J. Persistence of planetary wave type oscillations in the mid-latitude ionosphere［J］.? Annals of Geophysics， 2006， 49（6）：1189-1193.

［3］ FELEK W， MEKIBIB F， ADMASSU B. Micropropagation of peach， Prunus persica（L.） BATSCH. cv. Garnem［J］. African Journal of Biotechnology， 2017， 16（10）： 490-498.

［4］DEJAMPOUR J， MAJIDI I， KHOSRAVI S， et al. In Vitro Propagation of HS314 Rootstock （Prunus amygdalus× P. persica）［J］.? Hortscience， 2011， 46（6）： 928-931.

［5］ 趙劍波，郭繼英，姜全，等.? 桃抗重茬砧木GF677組培快繁技術(shù)［J］.? 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016（5）：60-61；68.

［6］ 周玉碧，李? ?唯.? 晚熟桃微繁技術(shù)的研究［J］.? 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，40（6）：745-749.

［7］ PARK S H， ELHITI M， WANG H， et al.? Adventitious root formation of in vitro peach shoots is regulated by auxin and ethylene［J］.? Scientia Horticulturae， 2017， 226： 250-260.

［8］ 陳子萱，曹孜義，田福平.? 扁桃砧木Nemaguard和Lovell的組培快繁［J］.? 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，39（5）：524-528.

［9］ KORNOVA K， MICHAILOVA J， ASTADJOV N.? Application of In Vitro Techniques for Propagation of Rosa Kazanlika Top.（Rosa Damascena Var. Trigintipetala）［J］.? Biotechnology & Biotechnological Equipment， 2000， 14（2）：78-81.

［10］ KAMALI K， MAHIDI E， ZARGHAMI R.? Determination of the most suitable culture medium and growth conditions for micropropagation of GF677 （hybrid of almond × peach） rootstocks［M］. University of Oxford. 2001， 234-243.

［11］ 郭偉偉，孟慶杰，黃? ?勇，等. ‘黃金冠’桃組織培養(yǎng)的初步研究［J］.? 北方園藝，2010（19）：142-144.

［12］ 潘? ?瞳，姚苗笛，于曉南.? 紫葉桃（Prunus persica f. atropurpurea）的愈傷組織誘導(dǎo)和培養(yǎng)［J］.? 河北林果研究，2009，24（1）：77-80.

［13］ EDRISS M H， BAGHDADI G A， EL-RAZEK A M A， et al. Micropropagation of Some Peach Rootstocks［J］. Nature and Science， 2014，12（3）： 106-114.

［14］ PEREZ J M， CANTERO N E， PEREZ-A F， et al.? Relationship between endogenous hormonal content and somatic organogenesis in callus of peach （Prunus persica L. Batsch） cultivars and Prunus persica × Prunus dulcis rootstocks［J］.? Journal Of Plant Physiology， 2014， 171（8）： 619-624.

［15］ SOTIROPOULOS T E， FOTOPOULOS S.? In vitro propagation of the PR 204/84 peach rootstock（Prunus persica × P. amygdalus）： the effect of BAP， GA3， and activated charcoal on shoot elongation［J］.? European journal of horticultural science， 2005， 70（5）： 253-255.

［16］ 楊增海，胡霓云，路廣明.? 桃莖尖試管繁殖成苗［J］.? 植物生理學(xué)報(bào)，1982（3）：42-43.

［17］ 楊增海，胡霓云，路廣明.? 桃試管實(shí)生苗莖尖培養(yǎng)的研究［J］.? 園藝學(xué)報(bào)，1984，11（1）：7-13.

［18］ 張雪冰，王? ?鴻，張? ?帆，等.? 外源激素及低溫處理對(duì)桃種子休眠解除的影響［J］.? 甘肅農(nóng)業(yè)科技，2020（12）：59-61.